水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法技术

本发明专利技术公开了一种水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，属于检测技术领域，该检测分析方法包括以下步骤：1)水生动物组织中百菌清的提取；2)水生动物组织中百菌清检测。该方法在完成水生动物组织中百菌清提取的基础上，对样品前处理、色谱条件和检测方法等进行优化，使得该检测分析方法处理效率高，快速检测、高灵敏性，特别是能在水生动物组织中精准定量百菌清，为全面普查水生动物组织中百菌清的含量水平及分布特征提供可靠的分析手段。

Detection and analysis of chlorothalonil residues in aquatic animal tissues

The invention discloses a detection and analysis method for chlorothalonil residues in aquatic animal tissues, belonging to the detection technology field. The detection and analysis method comprises the following steps: 1) extraction of chlorothalonil from aquatic animal tissues; 2) detection of chlorothalonil in aquatic animal tissues. Based on the extraction of chlorothalonil from aquatic animal tissues, the pretreatment of samples, chromatographic conditions and detection methods were optimized, which made the detection and analysis method highly efficient, rapid and sensitive. Especially, it could accurately quantify chlorothalonil in aquatic animal tissues. This method could provide a comprehensive survey of the content and distribution characteristics of chlorothalonil in aquatic animal tissues. Provide reliable means of analysis.

【技术实现步骤摘要】
水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法
本专利技术涉及检测
，具体的说是一种水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法。
技术介绍
百菌清(chlorothalonil)化学名称为四氯间苯二腈，是一种非内吸性、广谱、高效的保护性杀菌剂，对多种作物的真菌病害具有防治作用。其杀菌机理是与真菌细胞中的磷酸甘油醛脱氢酶发生作用，结合脱氢酶体中含有半胱氨酸的蛋白质，使脱氢酶丧失活性，破坏真菌细胞的新陈代谢，从而导致真菌的死亡。百菌清从生产开始，至今在世界农业生产中的使用已经超过50年，由于广泛和长期使用，在农作物和自然生态环境中都检测到百菌清的残留，对环境和食品安全具有潜在威胁。百菌清对人和哺乳动物低毒，会引起皮肤炎症、眼睛不适和胃肠刺激等症状，对鱼、贝类等水生生物高毒，美国国家环境保护总署已经将其列为可能使人类致癌的物质之一。我国2012年修订的《生活饮用水卫生标准》首次将百菌清列入了监测范围。201210338528.0公开了一种快速、灵敏的检测果蔬表面农药(其中包括百菌清)残留的方法，以离子迁移谱技术为基本检测技术，采用正、负离子模式，建立了离子迁移谱检测农药残留的快速定性、半定量分析方法。将含有不同农药样品的采样薄片，烘干溶剂送入到离子迁移谱热解析进样器内进行检测分析获得检测信号，通过样品峰迁移时间和信号强度进行定性和半定量分析。该方法为定性和半定量分析，不能准确分析百菌清的具体含量水平。201210137297.7公开了一种检测牛组织中氟佐隆残留量的方法，该方法是将牛组织样品经过提取、净化后，以乙腈-水为流动相,高效液相色谱-紫外检测法检测；液相色谱条件为：色谱柱，AgilentC18，5μm，150mm×4.6mmi.d.；流动相，体积比为68/32的乙腈-水；流速：1.2mL·min-1；检测波长：260nm；柱温：25℃；进样体积：20mL。该方法所测得牛组织中氟佐隆的LOD为0.005mg·kg-1；LOQ脂肪为0.01mg·kg-1，其他组织为0.02mg·kg-1，能够满足关于动物性食品中氟佐隆药物残留分析的要求。但是其检出限仍然较高。因此，目前亟需研究出适用于水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，为全面普查水生动物组织中百菌清的含量水平及分布特征提供可靠的分析手段。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，操作简单、方法可靠、回收率合理，其加标回收率为70～110％，RSD小于10％，并且检出限较低(检出限可以达到0.012μg/L)，在水生生物分析检测领域具有广阔的应用前景。本专利技术解决其技术问题所采取的技术方案是：水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，包括以下步骤：(1)水生动物组织中百菌清的提取①取水生动物组织样品和蛋白酶置于离心管一中，超声，涡旋，静置；②萃取：在步骤①静置完毕的离心管一中加入萃取溶剂，涡旋，加入CH3COONa和无水MgSO4，涡旋，振荡，离心，取出萃取液并冷冻；③取离心管二加入N-丙基乙二胺、C18、无水MgSO4，然后加入步骤②中经冷冻的萃取液，涡旋，离心，然后取上清液，氮吹近干后，加入稳定剂，用正己烷定容，过有机滤膜，得到待测样品；N-丙基乙二胺(PSA)与为NH2相似的吸附剂，PSA有两个氨基PKa值分别为10.1和10.9。有比氨基柱更强的离子交换能力。保留机理：弱阴离子交换(水溶液)或者极性作用(非极性有机溶剂)，络合作用。PSA的极性比NH2弱，PSA可与金属离子产生鳌合作用，用于提取金属离子强亲合力和高容量可以有效去除脂肪酸，有机酸和一些极性色素及糖。广泛用于植物农残分析样品的处理。主要为正向萃取。C18具有疏水作用，对非极性的组分有吸附作用，保留机理：强非极性作用。主要用于反相萃取，适合于非极性到中等极性的化合物，如抗菌素、巴比妥酸盐、酞嗪、咖啡因、药物、染料、芳香油、脂溶性维生素、杀真菌剂、除草剂、环境农药、PAH和PCB残留、食品添加剂、碳水化合物、对羟基甲苯酸取代脂、苯酚、邻苯二甲酸酯、类固醇、表活化剂、茶碱、水溶性维生素等。(2)检测①绘制标准曲线，此处所述的绘制标准曲线的方法可以采用现有检测分析
内常用的标准曲线绘制方法，其所选取的标准液的浓度也不做限定。②将步骤(1)③得到的待测样品置于进样瓶中，用GC-ECD检测。其中，所述水生动物组织为水产肉类、禽类肉类和畜类肉类水生动物组织；优选地，所述水生动物组织为鱼肉，虾肉，蟹肉中的任意一种；优选地，所述水生动物组织为鱼肉。进一步地，步骤(1)①中的pH为7-8，例如7.1、7.2、7.3……8；温度为40-50℃，例如40℃、42℃、45℃、50℃等上述范围内的温度；超声功率为200-400W，可选择的为在此范围内的功率；进一步地，超声时间为2min-2h；进一步地，超声时间为10min-40min；进一步地，超声时间为30min；进一步地，步骤(1)①中的pH为7.5，温度为45℃，超声功率为300W。进一步地，步骤(1)②、(1)③中离心管为聚丙烯离心管；进一步地，步骤(1)②中冷冻时间为1-8h，可选的为1h、2h、3h、5h、8h等该范围内的任意时间。进一步地，步骤(1)②中冷冻时间为3-6h，3h、5h、6h等该范围内的任意时间；进一步地，步骤(1)②中冷冻时间为4h；进一步地，步骤(1)②中所述萃取溶剂为100％甲醇或者酸性乙腈溶液；进一步地，所述酸性乙腈溶液为甲酸/乙腈混合溶液或者乙酸/乙腈混合溶液；进一步地，所述甲酸/乙腈混合溶液为甲酸体积分数为0.5-2％的乙腈溶液；所述乙酸/乙腈混合溶液为乙酸体积分数为0.5-2％的乙腈溶液；进一步地，所述甲酸/乙腈混合溶液为甲酸体积分数为1％的乙腈溶液；所述乙酸/乙腈混合溶液为乙酸体积分数为1％的乙腈溶液；进一步地，所述酸性乙腈溶液为乙酸/乙腈混合溶液。进一步地，步骤(1)②中萃取条件为：萃取温度70℃，预热时间5min，稳定萃取时间5min；进一步地，此萃取步骤循环1-5次，此处所说的萃取步骤为：在步骤①静置完毕的离心管一中加入萃取溶剂，涡旋，加入CH3COONa和无水MgSO4，涡旋，振荡，离心，取出萃取液，循环的步骤为：取出萃取液后，再次再离心管一中加入萃取溶剂，涡旋，振荡，离心，取出萃取液；若需再次循环，则取出萃取液后，再次再离心管一中加入萃取溶剂，涡旋，振荡，离心，取出萃取液；依此循环。进一步地，此萃取步骤循环3次。萃取步骤循环操作得到的萃取液需合并。进一步地，步骤(1)②中的CH3COONa和无水MgSO4的质量比为1：(0.2-10)；进一步地，步骤(1)②中的CH3COONa和无水MgSO4的质量比为1：4；进一步地，无水MgSO4需进行预处理，所述预处理步骤为：在380-520℃下灼烧2-8h，冷却后装入磨口玻璃瓶中，置于干燥器中保存。进一步地，步骤(1)③中所述稳定剂为甲酸。进一步地，步骤(2)①绘制标准曲线的方法为：配制百菌清浓度为20ppb、50ppb、100ppb、200ppb、400ppb、500ppb的标准溶液，用GC-ECD检测，绘制标准曲线；进一步地，所述步骤(2)中，GC-ECD检测时，检测仪器为Agilent7890A型气相色谱仪，检测器为μ本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)水生动物组织中百菌清的提取①取水生动物组织样品和蛋白酶置于离心管一中，超声，涡旋，静置；②萃取：在步骤①静置完毕的离心管一中加入萃取溶剂，涡旋，加入CH3COONa和无水MgSO4，涡旋，振荡，离心，取出萃取液并冷冻；③取离心管二加入N‑丙基乙二胺、C18、无水MgSO4，然后加入步骤②中经冷冻的萃取液，涡旋，离心，然后取上清液，氮吹近干后，加入稳定剂，用正己烷定容，过有机滤膜，得到待测样品；(2)检测①绘制标准曲线；②将步骤(1)③得到的待测样品置于进样瓶中，用GC‑ECD检测。

【技术特征摘要】
1.水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)水生动物组织中百菌清的提取①取水生动物组织样品和蛋白酶置于离心管一中，超声，涡旋，静置；②萃取：在步骤①静置完毕的离心管一中加入萃取溶剂，涡旋，加入CH3COONa和无水MgSO4，涡旋，振荡，离心，取出萃取液并冷冻；③取离心管二加入N-丙基乙二胺、C18、无水MgSO4，然后加入步骤②中经冷冻的萃取液，涡旋，离心，然后取上清液，氮吹近干后，加入稳定剂，用正己烷定容，过有机滤膜，得到待测样品；(2)检测①绘制标准曲线；②将步骤(1)③得到的待测样品置于进样瓶中，用GC-ECD检测。2.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，其特征在于，所述水生动物组织为鱼肉，虾肉，蟹肉中的任意一种；优选地，所述水生动物组织为鱼肉。3.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，其特征在于，步骤(1)①中的pH为7-8，温度为40-50℃，超声功率为200-400W；进一步地，超声时间为2min-2h；进一步地，超声时间为10min-40min；进一步地，超声时间为30min；进一步地，步骤(1)①中的pH为7.5，温度为45℃，超声功率为300W。4.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，其特征在于，步骤(1)②、(1)③中离心管为聚丙烯离心管；进一步地，步骤(1)②中冷冻时间为1-8h；进一步地，步骤(1)②中冷冻时间为3-6h；进一步地，步骤(1)②中冷冻时间为4h；进一步地，步骤(1)②中所述萃取溶剂为100％甲醇或者酸性乙腈溶液；进一步地，所述酸性乙腈溶液为甲酸/乙腈混合溶液或者乙酸/乙腈混合溶液；进一步地，所述甲酸/乙腈混合溶液为甲酸体积分数为0.5-2％的乙腈溶液；所述乙酸/乙腈混合溶液为乙酸体积分数为0.5-2％的乙腈溶液；进一步地，所述甲酸/乙腈混合溶液为甲酸体积分数为1％的乙腈溶液；所述乙酸/乙腈混合溶液为乙酸体积分数为1％的乙腈溶液；进一步地，所述酸性乙腈溶液为乙酸/乙腈混合溶液。5.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，其特征在于，步骤(1)②中萃取条件为：萃取温度70℃，预热时间5min，稳定萃取时间5min；进一步地，萃取步骤循环1-5次；进一步地，此萃取步骤循环3次。6.根据权利要求1所述的水生动物组织中百菌清残留的检测分析方法，其特征在于，步骤(1)②中的CH3COONa和无水MgSO4的质量比为1：(0.2-10)；进一步地，步骤(1)②中的CH3COONa和无水MgSO4的质量比为1：4；进...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚晶晶，李海普，林惠菊，杨兆光，李跃，屠焓钰，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43