一种研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法技术

本发明专利技术涉及一种口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的研究方法，该方法包括口用型无烟气烟草制品的筛选、模拟溶出参数的确定、体内实验烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的测定、体外试验模拟等步骤。本发明专利技术利用体内实验进行体外研究参数确定，体外采用全仿真模拟咀嚼机对样品进行测试，所用装置能完全模拟人体口腔吸食无烟气烟草制品的状态，在咀嚼力度、咀嚼频率、唾液流量、口腔温度上均可调控，且可控性强稳定性高，操作简单。本发明专利技术研究方法可以很好的避免传统人工品尝带来的主观和客观因素的影响，避免了大量人群实验的伦理道德制约，同时节约实验费用的同时还减少了因人体实验对健康带来的危害，适用于样品的批量研究。

【技术实现步骤摘要】
一种研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法
本专利技术属于口用型无烟气烟草制品分析
，具体涉及一种研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，通过该方法可以研究分析口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺溶出情况。
技术介绍
无烟气烟草制品（SmokelessTobaccoproducts,简称STPs）是指不经燃烧，直接通过口腔或鼻腔吸食的烟草制品，与传统卷烟相比其有害成分少，危害性较小；同时它不产生二手烟气，能在一定程度上缓解公共场所禁烟和吸烟的矛盾，并在一定程度上满足烟民的生理需要。无烟气烟草制品有袋装口含烟、鼻烟和嚼烟等多种多样的形式，其中消费主体是口用型无烟气烟草制品，主要包括袋装口含烟、胶基型嚼烟和含化烟。袋装口含烟是具有一定颗粒度的烟草粉末混合适量的烟草特有的亚硝胺、矫味剂、水、保润剂和酸碱调节剂经热处理加工制成的，用无纺布小袋包装，置于唇齿之间消费。胶基型无烟气烟草制品(Tobaccochewinggum)由瑞典火柴公司(SwedishMatch)于2003年首先研发成功并试投放市场。它又称为新型嚼烟、胶基型无烟气烟草、烟草口香糖、胶基烟，是一种以烟草和/或烟草提取物为效用组分，可食用胶基为载体，通过咀嚼方式向人体递送烟草特有的亚硝胺的新型烟草制品。2016年，全球STPs销售额为120亿美元，其中袋装口含烟销售额增加40%以上，嚼烟增加10%左右。STPs覆盖全球70个国家，占总人口的73%。通过STPs形式进行消费时，烟草不经燃烧，不会产生卷烟烟气中特有的一些有害成分，更重要的是不会产生令人讨厌的“二手烟”，是禁烟环境下烟草消费的重要补充形式。受到当前世界控烟运动的影响，这一类的烟草制品正成为国际烟草领域的重要发展趋势。目前世界上已发现有300多种N-亚硝胺对40多种动物有致癌性，但烟草制品和烟气中已经知道的只有以下八种：N-亚硝基降盐烟碱(N-nitrosonornicotine,NNN)；4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(4-(N-methyl-N-nitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone,NNK)；N-亚硝基新烟碱(N-nitrosoanatabine,NAT)；N-亚硝基新烟草碱(N-nitrosoanabasine,NAB)；4-(甲基亚硝胺)-4-(3-吡啶基)-丁醛(4-(N-methyl-N-nitrosamino)-4-(3-pyridyl)-butanal,NNA)；4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁醇(4-(N-methyl-N-nitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol,NNAL)；4-(甲基亚硝胺)-4-(3-吡啶基)-丁醇(4-(N-methyl-N-nitrosamino)-4-(3-pyridyl)-1-butanol,iso-NNAL)。其中NNN、NNK和NAT的含量高于其它几种。目前普遍认为TSNAs会使人患肺癌，特别是NNN和NNK。用啮齿动物研究表明，无论是喂食还是注射，NNK均会导致肺部肿瘤——表皮细胞良性肿瘤，以及肺腺癌——恶性上皮瘤。另外，美国国家科学院估计，每天抽一盒烟的吸烟者对TSNAs的接触量是17毫克。普遍认为烟草制品中TSNAs产生的机理是烟草生物碱的自然亚硝化作用。新鲜烟草中TSNAs和亚硝酸盐含量极微，一般认为TSNAs的形成和积累是发生在采摘之后和调制处理阶段。无烟气烟草制品的制作工艺包括发酵，因此极容易产生大量的烟草特有的亚硝胺（TSNAs），其安全性还受到科学界和公共健康团体的质疑。消费者从无烟气烟草制品中吸食的TSNAs除了与该产品本身的性质有关外，还与消费者的消费习惯有密切联系。目前关于口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况还未见报道，消费者使用该类产品时对TSNAs的释放吸收情况尚不清楚。因此如何克服现有技术的不足是目前口用型无烟气烟草制品分析
亟需解决的问题。
技术实现思路
本专利技术针对口用型无烟气烟草制品中烟草特有的亚硝胺体外释放情况尚未研究，提供了一种研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，该方法是一种更为接近人体口腔条件的试验方法，利用该方法可以更加准确的研究口用型无烟气烟草制品在人体口腔的释放情况，为该类产品的加工制作、质量控制及安全性评价提供技术支撑和理论依据。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，包括如下步骤：步骤（1），口用型无烟气烟草制品的筛选：对待研究的某种口用型无烟气烟草制品选取多颗进行重量检测，计算该制品单颗重量平均值和方差；之后，选择重量范围在平均值±（1-3）倍方差范围内的制品作为试样进行后续测定；步骤（2），模拟溶出参数的确定：选择多位身体健康的自愿者在自然状态下吸食步骤（1）筛选出的试样，并在事先确定的时间点收集残留样品和各自愿者唾液，每个时间点使用一颗样品；步骤（3），体内实验烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的测定：利用液相色谱质谱分别对待研究口用型无烟气烟草制品、残留样品和自愿者唾液进行测试，以确定各时间段自愿者吸食样品的烟草特有的亚硝胺溶出量；步骤（4），体外试验模拟：采用全仿真模拟咀嚼机模拟吸食该待研究口用型无烟气烟草制品，并根据步骤（3）得到的自愿者吸食样品的烟草特有的亚硝胺溶出量和步骤（2）得到的唾液量，设置全仿真模拟咀嚼机的压合力、唾液流速、唾液量和口腔温度参数；步骤（5），液相色谱质谱分析：利用液相色谱质谱分别对待研究口用型无烟气烟草制品、残留样品和全仿真模拟咀嚼机中的人工唾液进行测试，用此测试结果来表征待研究口用型无烟气烟草制品的烟草特有的亚硝胺口腔释放情况；步骤（6），烟草特有的亚硝胺口腔释放规律研究：采用上述全仿真模拟咀嚼机及设定的参数对同种口用型无烟气烟草制品整个咀嚼过程中的不同时间点进行测试，绘制烟草特有的亚硝胺释放曲线，进行烟草特有的亚硝胺口腔释放规律研究。进一步，优选的是，步骤（1）中，选择至少50颗待研究的某种口用型无烟气烟草制品进行重量检测。进一步，优选的是，步骤（1）中，所述的口用型无烟气烟草制品的种类包括口含烟、嚼烟、含化烟、膏状含烟、牙粉和可溶解烟草，其中，所述的口含烟的种类包括袋装口含烟、烟草口香糖、含片和硬质糖。进一步，优选的是，步骤（2）中，所述自愿者为年龄为18-55周岁；所述残留样品和自愿者唾液的收集时间点为实验开始后0-60min内任意一点。进一步，优选的是，步骤（4）体外试验模拟时，所采用的人工唾液为无机盐类人工唾液或蛋白酶类人工唾液。进一步，优选的是，步骤（5）利用液相色谱质谱进行测试时，采用内标法定量。进一步，优选的是，对口用型无烟气烟草制品、残留样品采用液相色谱质谱进行测试时，做如下处理：测试时取1颗制品或残留样品，加入0.01~0.1mol/L盐酸水溶液1~5mL和100ng/mL的混合内标溶液100μL，涡旋混匀，超声提取，离心，上清液全部上样到活化后的OasisHLB固相萃取柱上，加3mL体积浓度为2%甲醇水溶液淋洗，最后用3mL甲醇洗脱，收集洗脱液氮气吹干，加入1.0~5.0mL甲本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），口用型无烟气烟草制品的筛选：对待研究的某种口用型无烟气烟草制品选取多颗进行重量检测，计算该制品单颗重量平均值和方差；之后，选择重量范围在平均值±（1‑3）倍方差范围内的制品作为试样进行后续测定；步骤（2），模拟溶出参数的确定：选择多位身体健康的自愿者在自然状态下吸食步骤（1）筛选出的试样，并在事先确定的时间点收集残留样品和各自愿者唾液，每个时间点使用一颗样品；步骤（3），体内实验烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的测定：利用液相色谱质谱分别对待研究口用型无烟气烟草制品、残留样品和自愿者唾液进行测试，以确定各时间段自愿者吸食样品的烟草特有的亚硝胺溶出量；步骤（4），体外试验模拟：采用全仿真模拟咀嚼机模拟吸食该待研究口用型无烟气烟草制品，并根据步骤（3）得到的自愿者吸食样品的烟草特有的亚硝胺溶出量和步骤（2）得到的唾液量，设置全仿真模拟咀嚼机的压合力、唾液流速、唾液量和口腔温度参数；步骤（5），液相色谱质谱分析：利用液相色谱质谱分别对待研究口用型无烟气烟草制品、残留样品和全仿真模拟咀嚼机中的人工唾液进行测试，用此测试结果来表征待研究口用型无烟气烟草制品的烟草特有的亚硝胺口腔释放情况；步骤（6），烟草特有的亚硝胺口腔释放规律研究：采用上述全仿真模拟咀嚼机及设定的参数对同种口用型无烟气烟草制品整个咀嚼过程中的不同时间点进行测试，绘制烟草特有的亚硝胺释放曲线，进行烟草特有的亚硝胺口腔释放规律研究。...

【技术特征摘要】
1.一种研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），口用型无烟气烟草制品的筛选：对待研究的某种口用型无烟气烟草制品选取多颗进行重量检测，计算该制品单颗重量平均值和方差；之后，选择重量范围在平均值±（1-3）倍方差范围内的制品作为试样进行后续测定；步骤（2），模拟溶出参数的确定：选择多位身体健康的自愿者在自然状态下吸食步骤（1）筛选出的试样，并在事先确定的时间点收集残留样品和各自愿者唾液，每个时间点使用一颗样品；步骤（3），体内实验烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的测定：利用液相色谱质谱分别对待研究口用型无烟气烟草制品、残留样品和自愿者唾液进行测试，以确定各时间段自愿者吸食样品的烟草特有的亚硝胺溶出量；步骤（4），体外试验模拟：采用全仿真模拟咀嚼机模拟吸食该待研究口用型无烟气烟草制品，并根据步骤（3）得到的自愿者吸食样品的烟草特有的亚硝胺溶出量和步骤（2）得到的唾液量，设置全仿真模拟咀嚼机的压合力、唾液流速、唾液量和口腔温度参数；步骤（5），液相色谱质谱分析：利用液相色谱质谱分别对待研究口用型无烟气烟草制品、残留样品和全仿真模拟咀嚼机中的人工唾液进行测试，用此测试结果来表征待研究口用型无烟气烟草制品的烟草特有的亚硝胺口腔释放情况；步骤（6），烟草特有的亚硝胺口腔释放规律研究：采用上述全仿真模拟咀嚼机及设定的参数对同种口用型无烟气烟草制品整个咀嚼过程中的不同时间点进行测试，绘制烟草特有的亚硝胺释放曲线，进行烟草特有的亚硝胺口腔释放规律研究。2.根据权利要求1所述的研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，其特征在于，步骤（1）中，选择至少50颗待研究的某种口用型无烟气烟草制品进行重量检测。3.根据权利要求1所述的研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的口用型无烟气烟草制品的种类包括口含烟、嚼烟、含化烟、膏状含烟、牙粉和可溶解烟草，其中，所述的口含烟的种类包括袋装口含烟、烟草口香糖、含片和硬质糖。4.根据权利要求1所述的研究口用型无烟气烟草制品烟草特有的亚硝胺口腔释放情况的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述自愿者为年龄为18-55周岁；所述残留样品和自愿者唾液的收集时间点为...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨继，赵杨，段沅杏，米其利，高茜，管莹，赵辉，刘春波，申钦鹏，杨柳，
申请(专利权)人：云南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：云南,53