采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法技术

本发明专利技术涉及分析化学技术领域，尤其是采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法。该方法的步骤为：(1)取神经酸标准品，配制多份标准品溶液；(2)将配制好的所有标准品溶液分别上样于高效液相色谱，得到各份标准品溶液对应的色谱图；(3)以各份标准品溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得线性回归方程；(4)取含有神经酸的待测样品，得到待测样品的色谱图，求得待测样品中神经酸的含量。本发明专利技术选择乙腈作为溶解和提取溶剂，在保证主要成分被全部提取出来的基础上，除去了其他成分对含量测定的干扰。接着选择特定比例的流动相对待测物进行洗脱分离，实现了神经酸样品的简便快速定量，免去了常规方法酯化繁琐的操作和待测组分的损失。

Determination of Neuric Acid by High Performance Liquid Chromatography

The invention relates to the technical field of analytical chemistry, in particular to a method for determining the content of nervous acid by high performance liquid chromatography. The steps of the method are as follows: (1) taking standard nerve acid and preparing several standard solution; (2) sampling all the prepared standard solution on high performance liquid chromatography to obtain the corresponding chromatogram of each standard solution; (3) taking the concentration of each standard solution as abscissa and the peak area as ordinate, the linear regression equation can be obtained; (4) taking the sample containing nerve acid to be measured, the chromatogram of each standard solution can be obtained. To the chromatogram of the sample to be measured, the content of nerve acid in the sample to be measured was obtained. The invention chooses acetonitrile as dissolving and extracting solvent, and eliminates the interference of other components on the content determination on the basis of guaranteeing that all the main components are extracted. Next, a specific proportion of the flow was selected to elute and separate the substance to be measured, which realized the simple and rapid quantification of nerve acid samples, and avoided the tedious operation of esterification by conventional methods and the loss of the components to be measured.

【技术实现步骤摘要】
采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法
本专利技术涉及分析化学
，尤其是采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法。
技术介绍
神经酸化学名为顺-15-二十四碳单烯酸，分子式为C24H46O2，相对分子量为366.6。在常温下，神经酸为白色片状晶体，能溶于醇，不溶于水，熔点为39～40℃。神经酸是一种ω-9型长链单不饱和脂肪酸，又名鲨鱼酸，最早发现存在于鲨鱼脑中，是神经组织生物膜的重要组成成分以及脑甙中髓质的标志性成分，也是世界公认的具有修复疏通受损大脑神经通路、恢复神经末梢活性、促进神经细胞生长和发育功能的重要物质。人体本身不能合成神经酸，也很难在日常食物中汲取到，只能靠人为补充。神经酸的缺乏会引起脑衰老、免疫功能低下、中枢与周围神经系统疾病：如老年痴呆、脑瘫、脑萎缩、抑郁、记忆力减退、睡眠健忘等脑疾病。由于神经酸特殊的药理作用，对神经酸原料药及制剂中神经酸的含量测定具有重要价值。然而，目前神经酸含量的测定，多采用衍生化气相色谱法。由于衍生化气相色谱法通常将神经酸进行酯化后测定酯化物的含量，该方法预处理过程烦琐，可能存在未完全反应的神经酸，会对检测结果有一定影响，检测准确度不高。因此，亟待开发一种前处理简便、准确度高的神经酸含量测定方法。
技术实现思路
为了解决
技术介绍
中描述的技术问题，本专利技术提供了一种采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法，选择乙腈作为溶解和提取溶剂，在保证主要成分被全部提取出来的基础上，也除去了其他成分对含量测定的干扰。接着选择特定比例的流动相对待测物进行洗脱分离，实现了神经酸样品的简便快速定量，免去了常规方法酯化繁琐的操作和待测组分的损失。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法，包括以下步骤：(1)取神经酸标准品，以乙腈为溶剂，按照浓度梯度配制多份标准品溶液；(2)将配制好的所有标准品溶液分别上样于高效液相色谱，采用C8色谱柱，以90％-95％乙腈和余量体积比为0.05％-0.15％的磷酸水溶液为流动相，得到各份标准品溶液对应的色谱图；(3)以各份标准品溶液的浓度为横坐标，以对应色谱图中神经酸色谱峰的峰面积为纵坐标作图，得线性回归方程；(4)取含有神经酸的待测样品，加入乙腈超声处理使主成分溶解，得待测样品溶液，上样于高效液相色谱，采用与步骤(2)相同的方法进行检测，得到待测样品的色谱图，将其中神经酸色谱峰的峰面积代入步骤(3)所述线性回归方程中，求得待测样品中神经酸的含量。具体地，所述待测样品为神经酸原料药及含神经酸的固体制剂。具体地，所述待测样品溶液的制备方法为：称取待测样品置容量瓶中，加入乙腈，超声处理使主成分溶解，乙腈定容至刻度，摇匀，得待测样品溶液。具体地，所述待测样品溶液用0.22μm滤膜过滤后，再上样于高效液相色谱。具体地，步骤(1)中，所述多份标准品溶液的浓度分别为0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL。具体地，所述标准品溶液或待测样品溶液的进样量为5-15μL。具体地，所述流动相的流速为1-1.5ml/min。具体地，步骤(2)的上样于高效液相色谱的标准品溶液和步骤(4)的上样于高效液相色谱的待测样品溶液均使用PDA检测器进行检测；PDA检测器的检测波长为203nm。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法，选择乙腈作为溶解和提取溶剂，在保证主要成分被全部提取出来的基础上，也除去了其他成分对含量测定的干扰。接着选择特定比例的流动相对待测物进行洗脱分离，实现了神经酸样品的简便快速定量，免去了常规方法酯化繁琐的操作和待测组分的损失。附图说明下面结合附图和实施例对本专利技术进一步说明。图1是本专利技术的线性回归方程图；图2是本专利技术的浓度为2mg/mL的标准溶液的色谱图；图3是本专利技术的待测样品溶液的色谱图；具体实施方式现在结合附图对本专利技术作进一步详细的说明。图1是本专利技术的线性回归方程图，图2是本专利技术的浓度为2mg/mL的标准溶液的色谱图，图3是本专利技术的待测样品溶液的色谱图。实施例1本实施例以神经酸片剂为待测样品，具体为：(1)取神经酸标准品，以乙腈为溶剂，配置浓度为2mg/mL的标准品母液，再按照浓度梯度配制浓度分别为0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL的多份标准品溶液；(2)将所述多份标准品溶液分别以10μL的进样量上样于高效液相色谱，采用C8色谱柱，以93％乙腈和余量体积比为0.05％-0.15％的磷酸水溶液为流动相，流速1ml/min进行洗脱，得各份标准品溶液对应的色谱图；(3)以各份标准品溶液的浓度为横坐标、以对应色谱图中神经酸色谱峰的峰面积为纵坐标作图，得线性回归方程(如附图1所示，神经酸含量在0.01～0.2mg/mL浓度范围内具有良好的线性关系)；所示线性回归方程具体为：y＝3000000x(mg/mL)+4795.9，R2＝0.9999；(4)取神经酸片剂10片，精密称定，研细。精密称取适量(约相当于神经酸5mg)，置10mL容量瓶中，加乙腈适量，超声处理使主成分溶解，乙腈定容至刻度，摇匀，得待测样品溶液。将所述待测样品溶液用0.22μm滤膜过滤后，再上样于高效液相色谱，采用与步骤(2)相同的方法进行检测，得到待测样品溶液的色谱图，将其中神经酸色谱峰的峰面积代入步骤(3)所述线性回归方程中，求得待测样品中神经酸的含量。浓度为2mg/mL的标准溶液以及待测样品溶液的色谱图分别如附图2、附图3所示。结合附图2和附图3可知，样品中的辅料及杂质等与神经酸得到了很好的分离，且样品与标准溶液中的神经酸保留时间几乎一致，该方法具有很好的专属性。精密度：1)按照实施例1提供的方法平行测定一份浓度为2mg/mL的标准溶液共6次，结果见表1。表1：精密度(n＝6)由表1可见，相对标准偏差RSD为1.80％，试验方法精密度高。实验例2：稳定性按照实施例1提供的方法，在24h内测定同一份待测样品溶液共6次(0h、2h、4h、8h、12h、24h)，评价待测样品溶液的稳定性，结果见表2。表2：稳定性(n＝6)由表2可见，相对标准偏差RSD为1.52％，待测样品溶液在24h内稳定。实验例3：加标回收率按照实施例1提供的方法，首先测定待测样品溶液中神经酸的浓度(约为0.1mg/mL)，再将待测样品溶液平均分成9份，每份500μl，再分成3组，每组分别加入浓度相当的神经酸标准溶液400μl，500μl，600μl，混匀后按照实施例1提供的方法分析，结果见表3。表3：加标回收率(n＝9)由表3可见，添加神经酸标准溶液后所得样品的回收率在96.91％～104.4％之间，RSD在0.80％～3.78％之间，说明该方法准确高，可用于固体制剂中神经酸的定量分析。此外，若采用合适的提取溶剂和方法提取到液体制剂(如水剂、油剂等)中的神经酸，本专利技术的方法也能实现对液体制剂样品中神经酸含量的准确测定。以上述依据本专利技术的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关工作人员完全可以在不偏离本项专利技术技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本项专利技术的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定其技术性范本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取神经酸标准品，以乙腈为溶剂，按照浓度梯度配制多份标准品溶液；(2)将配制好的所有标准品溶液分别上样于高效液相色谱，采用C8色谱柱，以90％‑95％乙腈和余量体积比为0.05％‑0.15％的磷酸水溶液为流动相，得到各份标准品溶液对应的色谱图；(3)以各份标准品溶液的浓度为横坐标，以对应色谱图中神经酸色谱峰的峰面积为纵坐标作图，得线性回归方程；(4)取含有神经酸的待测样品，加入乙腈超声处理使主成分溶解，得待测样品溶液，上样于高效液相色谱，采用与步骤(2)相同的方法进行检测，得到待测样品的色谱图，将其中神经酸色谱峰的峰面积代入步骤(3)所述线性回归方程中，求得待测样品中神经酸的含量。

【技术特征摘要】
1.一种采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取神经酸标准品，以乙腈为溶剂，按照浓度梯度配制多份标准品溶液；(2)将配制好的所有标准品溶液分别上样于高效液相色谱，采用C8色谱柱，以90％-95％乙腈和余量体积比为0.05％-0.15％的磷酸水溶液为流动相，得到各份标准品溶液对应的色谱图；(3)以各份标准品溶液的浓度为横坐标，以对应色谱图中神经酸色谱峰的峰面积为纵坐标作图，得线性回归方程；(4)取含有神经酸的待测样品，加入乙腈超声处理使主成分溶解，得待测样品溶液，上样于高效液相色谱，采用与步骤(2)相同的方法进行检测，得到待测样品的色谱图，将其中神经酸色谱峰的峰面积代入步骤(3)所述线性回归方程中，求得待测样品中神经酸的含量。2.根据权利要求1所述的采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法，其特征在于，所述待测样品为神经酸原料药及含神经酸的固体制剂。3.根据权利要求1或2所述的采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法，其特征在于，所述待测样品溶液的制备方法为：称取待测样品...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈报春，吴乐艳，林泰良，孙孔春，杨璨瑜，
申请(专利权)人：昆明医科大学，
类型：发明
国别省市：云南,53