一种重组乳酸乳球菌菌株及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种重组乳酸乳球菌菌株及其制备方法和应用，通过过表达murF基因得到重组乳酸乳球菌菌株。构建菌株的方法：将乳酸乳球菌菌株的基因murF连接到质粒载体上，获得重组质粒；将重组质粒电转到乳酸乳球菌中，选取阳性转化子，获得重组菌株。重组乳酸乳球菌菌株可提高菌株的耐酸性和乳酸链球菌素(Nisin)产量。将原始菌株和过表达murF的菌株在发酵培养基中发酵12h，培养到8h时Nisin产量达到最大，过表达murF的菌株比原始菌株Nisin产量提高1.1～1.5倍，酸应激存活率提高1.1～1.7倍。本发明专利技术的重组菌株对产物Nisin和菌株抗逆性有明显的影响。其中Nisin是一种安全无毒的食品防腐剂。

A Recombinant Lactococcus lactis Strain and Its Preparation and Application

The invention discloses a recombinant Lactococcus lactis strain and its preparation method and application. The recombinant Lactococcus lactis strain is obtained by overexpressing murF gene. The method of constructing the strain was to connect the murF gene of Lactococcus lactis strain to the plasmid vector and obtain the recombinant plasmid. The recombinant plasmid was transferred to Lactococcus lactis by electroporation, and the positive transformant was selected to obtain the recombinant strain. Recombinant Lactococcus lactis strain can improve the acid resistance and Nisin production of the strain. The original strain and the strain overexpressing murF were fermented in the fermentation medium for 12 hours, and the yield of Nisin reached the maximum at 8 hours. The yield of the strain overexpressing murF was 1.1-1.5 times higher than that of the original strain, and the survival rate of acid stress was 1.1-1.7 times higher than that of the original strain. The recombinant strain of the invention has obvious influence on the product Nisin and the stress resistance of the strain. Nisin is a safe and non-toxic food preservative.

【技术实现步骤摘要】
一种重组乳酸乳球菌菌株及其制备方法和应用
本专利技术涉及分子生物技术、微生物领域，尤其是一种重组乳酸乳球菌菌株及其方法和应用。
技术介绍
乳酸乳球菌是工业上最主要的乳酸链球菌素(Nisin)的产生菌。Nisin是一种天然生物活性抗菌肽，由34个氨基酸残基组成，可被人体吸收。它是一种安全无毒的食品防腐剂，主要应用于食品行业，是唯一一种被允许作为食品添加剂的细菌素，食用后在消化道中很快被蛋白水解酶消化成氨基酸它不会改变肠道内的正常菌群，不会引起抗药性问题。它能有效的抑制引起食品腐烂的多种革兰氏阳性菌的生长，如乳酸杆菌、葡萄球菌、李斯特菌、耐热腐败菌、分枝杆菌等，特别是对产生孢子的细菌，如芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌、嗜热芽孢杆菌等有很强的抑制作用。在现有发酵乳酸链球菌素产量的基础下，菌体代谢分泌的乳酸会抑制菌体自身的生长，对菌体发酵很不利，因此通过提高菌体在酸性条件下的存活率来提高发酵产量也是一种可行的方法。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术提供一种重组乳酸乳球菌菌株及其制备方法和应用，克服现有技术中乳酸乳球菌的Nisin产量低的问题。本专利技术的技术方案是：一种重组乳酸乳球本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组乳酸乳球菌菌株，其特征在于，所述重组菌株采用酶切连接的方法将目的基因表达在乳酸乳球菌中过表达，构建方法包括如下步骤：(1)提取乳酸乳球菌的基因组DNA，以该基因组DNA为模板，设计引物扩增出murF基因片段；(2)限制性内切酶对步骤(1)中的murF片段进行双酶切；(3)同步骤(2)用限制性内切酶对质粒pLEB124进行双酶切，得到线性质粒；(4)将步骤(2)的酶切片段和步骤(3)的酶切质粒通过T4连接酶进行连接；(5)将步骤(4)得到的重组质粒化转到大肠杆菌TG1中，用红霉素抗性筛选得到阳性转化子，挑取单菌落进行PCR验证并测序，将正确的重组单菌落37℃培养克隆质粒；(6)将步骤...

【技术特征摘要】
1.一种重组乳酸乳球菌菌株，其特征在于，所述重组菌株采用酶切连接的方法将目的基因表达在乳酸乳球菌中过表达，构建方法包括如下步骤：(1)提取乳酸乳球菌的基因组DNA，以该基因组DNA为模板，设计引物扩增出murF基因片段；(2)限制性内切酶对步骤(1)中的murF片段进行双酶切；(3)同步骤(2)用限制性内切酶对质粒pLEB124进行双酶切，得到线性质粒；(4)将步骤(2)的酶切片段和步骤(3)的酶切质粒通过T4连接酶进行连接；(5)将步骤(4)得到的重组质粒化转到大肠杆菌TG1中，用红霉素抗性筛选得到阳性转化子，挑取单菌落进行PCR验证并测序，将正确的重组单菌落37℃培养克隆质粒；(6)将步骤(5)得到的重组质粒电转到乳酸乳球菌YF11中，用红霉素抗性筛选得到阳性菌株，挑取单菌落PCR验证，将验证正确的菌株保菌，-80℃储存菌种。2.根据权利要求1所述的重组乳酸乳球菌菌株，其特征在于，所述菌株包括乳酸乳球菌乳亚种。3.一种重组乳酸乳球菌菌株的制备方法，其特征在于，采用酶切连接的方法将目的基因表达在乳酸乳...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔建军，薛二淑，吴昊，财音青格乐，宋倩倩，田开仁，支宁，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津,12