提高高GC含量噬铜菌属细菌电转化效率的方法技术

本发明专利技术提供一种提高高GC含量噬铜菌属细菌电转化效率的方法，高GC含量噬铜菌属细菌经活化后接种于含有表面活性剂和果胶酶的稀释的富营养培养基中，培养一段时间后，离心收集菌体，然后用无菌去离子水重悬洗涤数次，离心收集菌体沉淀，重悬于预冷的甘油水溶液中，制备得到的感受态细胞进行电转化。本发明专利技术通过对培养基进行改良，发现减少培养基中营养物质含量并加入适量的表面活性剂和果胶酶可以有效减少噬铜菌属细菌胞外聚合物的产生，大大提高了感受态细胞的电转化效率。本发明专利技术针对高GC含量噬铜菌属细菌的特点开发出一种稳定、高效的电转化方法，为深入研究分析噬铜菌属细菌提供有力的技术支持。

Method to Improve the Electrotransformation Efficiency of Copperophage Bacteria with High GC Content

The invention provides a method for improving the electrotransformation efficiency of high GC content Copperophage bacteria. The high GC content Copperophage bacteria are activated and inoculated into the diluted eutrophic medium containing surfactant and pectinase. After culture for a period of time, the bacteria are collected by centrifugation, then re-suspended with sterile deionized water for several times, the bacteria are collected by centrifugation and precipitated by centrifugation, and re-suspended in the pre-cooled glycerol water. In the solution, the competent cells were electrotransformed. By improving the culture medium, the invention finds that reducing the nutrient content in the culture medium and adding appropriate surfactant and pectinase can effectively reduce the production of extracellular polymer of Cuperophage bacteria, and greatly improve the electrotransformation efficiency of competent cells. The invention develops a stable and efficient electric transformation method according to the characteristics of high GC content copper-phage bacteria, and provides strong technical support for in-depth research and analysis of copper-phage bacteria.

【技术实现步骤摘要】
提高高GC含量噬铜菌属细菌电转化效率的方法
本专利技术属于基因工程
，具体地说，涉及一种提高高GC含量噬铜菌属细菌电转化效率的方法。
技术介绍
噬铜菌属(genusCupriavidus)是细菌分类学中的一个属，目前该属下包括17个种，分别为：C.alkaliphilus，C.basilensis，C.campinensis，C.gilardii，C.laharis，C.metallidurans，C.necator，C.nantongensis，C.numazuensis，C.oxalaticus，C.pampae，C.pauculus，C.pinatubonensis，C.plantarum，C.respiraculi，C.taiwanensis，C.yeoncheonensis。所属细菌为革兰氏阴性菌，具有杆状，专性好氧，能运动，有鞭毛等特征，对铜，钴，锌等金属耐受。所属细菌大部分分离自土壤、水、池塘沉积物、豆科植物结节和火山泥流沉积物。通过对已报道的12个种的基因组测序结果分析显示，噬铜菌属属于高GC含量(63％-69％)细菌。目前报道的噬铜菌属细菌对环境具有重要的作用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高高GC含量噬铜菌属细菌电转化效率的方法，其特征在于，高GC含量噬铜菌属细菌经活化后接种于含有表面活性剂和果胶酶的稀释的富营养培养基中，培养一段时间后，离心收集菌体，然后用无菌去离子水重悬洗涤数次，离心收集菌体沉淀，重悬于预冷的甘油水溶液中，制备得到的感受态细胞进行电转化。

【技术特征摘要】
1.一种提高高GC含量噬铜菌属细菌电转化效率的方法，其特征在于，高GC含量噬铜菌属细菌经活化后接种于含有表面活性剂和果胶酶的稀释的富营养培养基中，培养一段时间后，离心收集菌体，然后用无菌去离子水重悬洗涤数次，离心收集菌体沉淀，重悬于预冷的甘油水溶液中，制备得到的感受态细胞进行电转化。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述富营养培养基为LB液体培养基或SOC液体培养基。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，富营养培养基稀释的倍数为2-5倍，优选5倍。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述表面活性剂为非离子表面活性剂，所述非离子表面活性剂包括吐温80。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述表面活性剂的终浓度为1％-2％，优选1％。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述果胶酶的终浓度为20-100U/mL，优选100U/mL。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将无菌去离子水洗涤后离心得到的菌体沉淀重悬于预冷的甘油水溶液中，然后离心收集菌体沉淀，重复此操作1次，然后将所得菌体重悬于预冷的甘油水溶液中，制备得到感受态细胞。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述甘油水溶液的浓度为10％...

【专利技术属性】
技术研发人员：方连城，秦晗，王尧，吴祥为，花日茂，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34