Caspase-3重组单链抗体的构建及功能验证的方法技术

本发明专利技术公开了Caspase‑3重组单链抗体的构建及功能验证的方法：包括以下步骤(1)构建pcDNA3.3c‑Caspase‑3‑Gala重组质粒；(2)构建pcDNA3.3c‑Caspase‑3‑Gala减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009重组菌株；(3)Caspase‑3重组质粒通过减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009胞内侵袭的特性,侵入细胞后实现蛋白Caspase‑3的真核表达，验证这种蛋白对细胞的杀伤作用。本发明专利技术中采用减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009的胞内侵袭的特性实现人源毒素蛋白的表达，同时大量研究表明减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009能够特异性聚集在实体肿瘤中，可以实现特异性杀伤肿瘤细胞的目的，为肿瘤治疗研究提供实验依据。

Construction and Functional Validation of Caspase-3 Recombinant Single Chain Antibody

The present invention discloses the construction and functional verification of Caspase 3 recombinant single chain antibody, including the following steps: (1) construction of recombinant plasmid pcDNA3.3c Caspase 3 Gala; (2) construction of recombinant strain pcDNA3.3c Caspase 3 Gala attenuated Salmonella typhimurium VNPNP20009; (3) invasion characteristics of recombinant plasmid caspase 3 through attenuated Salmonella typhimurium NPV20009 cells, and invasion into cells To realize the eukaryotic expression of Caspase_3 protein and verify its killing effect on cells. In the present invention, the expression of human toxin protein is realized by the intracellular invasion characteristics of attenuated Salmonella typhimurium VNP20009. At the same time, a large number of studies have shown that attenuated Salmonella typhimurium VNP20009 can specifically accumulate in solid tumors and achieve the purpose of killing tumor cells specifically, which provides experimental basis for the research of cancer treatment.

【技术实现步骤摘要】
Caspase-3重组单链抗体的构建及功能验证的方法
本专利技术属于生物制药、肿瘤医学领域，主要涉及Caspase-3重组单链抗体的构建及功能验证的方法。
技术介绍
Caspase-3是哺乳动物细胞凋亡中的关键蛋白酶，处于凋亡级联反应通路的核心位置，是细胞凋亡蛋白级联反应的必经之路。Caspase-3正常以酶原(32KDa)的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基(17KDa)和两个小亚基(12KDa)组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。本专利技术以减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009作为治疗载体，综合应用了减毒鼠伤寒沙门氏菌胞内侵袭的特性和特异性聚集在实体瘤中的性质，进一步扩大了本专利技术中肿瘤杀伤的特异性。现今，在临床上对于癌症的治疗，提出了抗体药物偶联物(AntibodyDrugConjugates，ADC)的一类新颖的治疗药物，本专利技术应用这一概念，结合实验前期基础，为ADC药物治疗的发展提供了一定的实验数据基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种真核质粒表达过程的减毒鼠伤寒沙门氏菌介导的质粒转染技术。本专利技术第本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Caspase‑3重组单链抗体的构建及功能验证的方法，其特征是，所述构建方法包括如下步骤：(1)获取Caspase‑3‑Gala片段以pET302‑Caspase‑3‑Gala为模板，以SEQ ID No.3和SEQ ID No.4序列为引物，PCR扩增获得SEQ ID No.1所示的Caspase‑3‑Gala片段；(2)构建pcDNA3.3c‑Caspase‑3‑Gala重组质粒：将步骤(1)中获得的Caspase‑3‑Gala片段，通过酶切酶连的方法连接到pcDNA3.3c其序列为：SEQ ID No.2质粒中，重组质粒命名pcDNA3.3c‑Caspase‑3‑Gala；(3)构建...

【技术特征摘要】
1.Caspase-3重组单链抗体的构建及功能验证的方法，其特征是，所述构建方法包括如下步骤：(1)获取Caspase-3-Gala片段以pET302-Caspase-3-Gala为模板，以SEQIDNo.3和SEQIDNo.4序列为引物，PCR扩增获得SEQIDNo.1所示的Caspase-3-Gala片段；(2)构建pcDNA3.3c-Caspase-3-Gala重组质粒：将步骤(1)中获得的Caspase-3-Gala片段，通过酶切酶连的方法连接到pcDNA3.3c其序列为：SEQIDNo.2质粒中，重组质粒命名pcDNA3.3c-Caspase-3-Gala；(3)构建pcDNA3.3c-Caspase-3-Gala重组菌株：将步骤(2)中的pcDNA3.3c-Caspase-3-Gala重组质粒转入E.coliTop10中，获得重组菌株；(4)构建pcDNA3.3c-Caspase-3-Gala重组减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009：从步骤(3)中获得的重...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈廷涛，赵消消，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：江西,36