一种木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法及其应用组成比例

本发明专利技术公开了一种木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法及其应用，包括步骤：对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、超高相液相色谱测定、特征图谱的建立、相似度评价等。本发明专利技术建立了木蝴蝶配方颗粒的UPLC特征图谱，并通过液质联用技术对木蝴蝶配方颗粒6种共有成分进行了快速定性及定量分析。该方法为木蝴蝶配方颗粒的质量评价和控制提供了较为全面、系统、有效的快速评价方法。

A Method for Constructing UPLC Characteristic Map of Wood Butterfly Formula Particles and Its Application

The invention discloses a method for constructing UPLC characteristic Atlas of wood butterfly formula particles and its application, including steps: preparation of reference solution, preparation of sample solution, determination of ultra-high phase liquid chromatography, establishment of characteristic atlas, similarity evaluation, etc. The UPLC characteristic Atlas of wood butterfly formula granules is established, and the six common components of wood butterfly formula granules are qualitatively and quantitatively analyzed by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS). This method provides a more comprehensive, systematic and effective rapid evaluation method for the quality evaluation and control of formulaic wood butterfly granules.

【技术实现步骤摘要】
一种木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法及其应用
本专利技术属于药物分析及药物质量控制
，具体涉及一种木蝴蝶配方颗粒特征图谱的构建方法及其应用。
技术介绍
木蝴蝶(Oroxylisemen)为紫葳科木蝴蝶属木蝴蝶Oroxylumindicum(L)Vent.的干燥成熟种子，又名千层纸、玉蝴蝶等，始载于《滇南本草》，具有几百年的药用历史。中医理论认为木蝴蝶性味苦、甘、凉，入肺、肝、胃经，有清肺利咽、疏肝和胃之功效，用于肺热咳嗽，喉痹，喑哑，肝胃气痛，常用于以咳嗽为主症的上呼吸道感染、急性支气管炎、慢性咽炎、肺炎后期等症。现代医学研究表明，木蝴蝶的主要药效成分为黄酮类物质，具有抗炎、抗氧化、抗癌、降糖、抑制病毒及肿瘤生长等多种药理作用。具有药理活性的化学成分为脂肪油、黄芩苷元-7-葡萄糖苷、黄芩苷、黄芩苷元、千层纸素A、木蝴蝶苷B、白杨素、白杨素-7-葡萄糖醛酸苷等黄酮类化合物。木蝴蝶配方颗粒是由单味中药饮片经水提、浓缩、干燥、制粒而成，目前并没有建立有效控制木蝴蝶配方颗粒的质量的方法。随着现代分析技术的发展，特征图谱作为一种体现中药化学成分整体特征的质量评价方法正在广泛应用，因此，有必要建立了一种快速鉴别木蝴蝶配方颗粒的UPLC特征图谱方法，为有效控制和较全面评价木蝴蝶配方颗粒的质量提供依据。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法，该方法为木蝴蝶配方颗粒的质量评价和控制提供了较为全面、系统、有效的快速评价方法。本专利技术是通过以下技术方案实现：一种木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法，包括如下步骤：(a)混合对照品溶液的制备：分别精密称取白杨素、黄芩素、白杨素-7-O-β-D葡萄糖醛酸苷、木蝴蝶苷A、黄芩苷和木蝴蝶苷B对照品，加甲醇溶解定容至25mL，即得白杨素、黄芩素、白杨素-7-O-β-D葡萄糖醛酸苷、木蝴蝶苷A、黄芩苷、木蝴蝶苷B浓度分别为12.594μg/mL、69.600μg/mL、32.286μg/mL、128.256μg/mL、31.512μg/mL、60.276μg/mL的混合对照品储备液，即得；(b)供试品溶液的制备：取木蝴蝶配方颗粒，研细，取0.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入60-80％乙醇50-100mL，称定重量，超声处理15-30分钟，取出，放冷，用60-80％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤膜滤过，即得；(c)超高相液相色谱测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入超高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，其中色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为276nm，流速为0.28mL/min，进样体积为1μL，柱温为30℃；(d)特征图谱的建立：将多批木蝴蝶配方颗粒的色谱图，采用“中药色谱特征图谱相似度评价系统”进行数据匹配，建立木蝴蝶配方颗粒的特征图谱，确定具有6个共有峰，以1号峰为参照峰S，各特征峰的相对保留时间分别为：峰1：1.00、峰2：1.20、峰3：1.22、峰4：1.35、峰5：1.52、峰6：1.68，相对保留时间在规定值的±10％之内；(e)相似度评价：计算各批次木蝴蝶配方颗粒的相似度，木蝴蝶配方颗粒的相似度均大于0.90。本专利技术的木蝴蝶配方颗粒是由单味中药饮片经水提、浓缩、干燥、制粒而成，优选的，所述木蝴蝶配方颗粒的制备方法为：取木蝴蝶饮片，以水为提取溶媒，加水煎煮两次，每次加投料量5～10倍量的水，煎煮0.5～2小时，合并滤液，滤过；滤液真空减压浓缩至相对密度为为1.02～1.10的清膏；取清膏进行喷雾干燥，得干浸膏粉，干浸膏粉干法制粒得粒度在16～40目的木蝴蝶配方颗粒。本专利技术对供试品溶液的制备条件进行了优化，对不同提取溶剂、不同提取方式、不同提取时间及不同料液比进行考察，优选的，步骤(b)供试品溶液的制备：取木蝴蝶配方颗粒，研细，取0.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入70％乙醇50mL，称定重量，超声处理30分钟，功率为300W，频率为40KHz，取出，放冷，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，用0.22μm滤膜滤过，即得。作为本专利技术进一步优选的技术方案，所述的一种木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法，还包括步骤(f)特征图谱峰指认：采用UPLC-Q-TOF-MS方法确认6个共有峰成分，其中，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.01％甲酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为276nm，流速为0.28mL/min，进样体积为1μL，柱温为30℃；质谱条件为：电喷雾离子源(ESI+)，喷雾电压为1.55kV；脱溶剂温度为597℃，离子源温度为148℃；脱溶剂气流为997L/hr；氮气流为1L/hr；质谱扫描采用多反应检测MRM扫描模式。监测离子及相关电压参数设定如下表所示：作为本专利技术进一步优选的技术方案，所述的一种木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，还包括步骤(g)含量测定：按照供试品溶液的制备方法及质谱条件测定，计算木蝴蝶配方颗粒中的白杨素、黄芩素、白杨素-7-O-β-D葡萄糖醛酸苷、木蝴蝶苷A、黄芩苷和木蝴蝶苷B6个共有峰成分的含量。本专利技术还提供了上述木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法在木蝴蝶配方颗粒质量评价和检测中的应用。本专利技术与现有技术相比，具有如下有益效果：本专利技术建立了木蝴蝶配方颗粒的UPLC特征图谱，并通过液质联用技术对木蝴蝶配方颗粒6种共有成分进行了快速定性及定量分析。该方法为木蝴蝶配方颗粒的质量评价和控制提供了较为全面、系统、有效的快速评价方法。附图说明图1为16批木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱叠加图；图2为16批木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱共有模式图；具体实施方式下面通过具体实施方式来进一步说明本专利技术，以下实施例为本专利技术具体的实施方式，但本专利技术的实施方式并不受下述实施例的限制。1、仪器与试药1.1仪器Waters液质联用仪(液相部分ACQUITYUPLCH-Class、质谱部分WatersXevoTQDMS)；百万分之一天平(METTLERTOLEDO，XP26)、万分之一天平(METTLERTOLEDO，ME204E)，AgilentSBC18色谱柱(2.1×100mm,1.8μm)，电热恒温水浴锅(上海一恒科技有限公司，HWS-28)，数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，KQ500DE)，超纯水系统(默克股份有限公司，Milli-Q-Direct)。1.2对照品和试剂乙腈(德国merck公司，色谱纯)；乙醇(西陇科学股份有限公司，分析纯)；甲醇(西陇科学股份有限公司，分析纯)；磷酸(天津科密欧化学试剂有限公司，色谱纯)；甲酸(天津科密欧化学试剂有限公司，色谱纯)；水为实验室自制水。白杨素(批号：111701-200501)、木蝴蝶苷B(批号：111915-201603，含量：91.9％)、黄芩苷(批号：110715-201720，含量：93.5％)、黄芩素(批号：111595-201607，含量：98.5％)对照品购自中国食品药品检定研究院；白杨素-7-O-β-D葡萄糖醛酸苷(批号：wkq17072702本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：（a）混合对照品溶液的制备：分别精密称取白杨素、黄芩素、白杨素‑7‑O‑

【技术特征摘要】
1.一种木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：（a）混合对照品溶液的制备：分别精密称取白杨素、黄芩素、白杨素-7-O-β-D葡萄糖醛酸苷、木蝴蝶A、黄芩苷和木蝴蝶B对照品，加甲醇溶解定容至25mL，即得白杨素、黄芩素、白杨素-7-O-β-D葡萄糖醛酸苷、木蝴蝶A、黄芩苷、木蝴蝶B浓度分别为12.594μg/mL、69.600μg/mL、32.286μg/mL、128.256μg/mL、31.512μg/mL、60.276μg/mL的混合对照品储备液，即得；（b）供试品溶液的制备：取木蝴蝶配方颗粒，研细，取0.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入60-80%乙醇50-100mL，称定重量，超声处理15-30分钟，取出，放冷，用60-80%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤膜滤过，即得；（c）超高相液相色谱测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1µl，注入超高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，其中色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为276nm，流速为0.28mL/min，进样体积为1μL，柱温为30℃；（d）特征图谱的建立：将多批木蝴蝶配方颗粒的色谱图，采用“中药色谱特征图谱相似度评价系统”进行数据匹配，建立木蝴蝶配方颗粒的特征图谱，确定具有6个共有峰，以1号峰为参照峰S，各特征峰的相对保留时间分别为：峰1：1.00、峰2：1.20、峰3：1.22、峰4：1.35、峰5：1.52、峰6：1.68，相对保留时间在规定值的±10%之内；（e）相似度评价：计算各批次木蝴蝶配方颗粒的相似度，木蝴蝶配方颗粒的相似度均大于0.90。2.根据权利要求1所述的一种木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述木蝴蝶配方颗粒的制备方法为：取木蝴蝶饮片，以水为提取溶媒，加水煎煮两次，每...

【专利技术属性】
技术研发人员：李国卫，何民友，曹斯琼，王利伟，吴淑珍，索彩仙，黄敏烨，吴文平，陈向东，
申请(专利权)人：广东一方制药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44