七味通痹口服液的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种七味通痹口服液的检测方法，该检测的色谱条件为：色谱柱为Agilent ZORBAX SB‑C18(4.6*250mm，5μm)；流动相：甲醇(A)‑0.1％甲酸水溶液(B)，洗脱梯度：0～10min，1～3％(A)；10～35min，3～20％(A)；35～50min，20～30％(A)；50～70min，30～55％(A)；70～75min，55～100％(A)；75～85min，100％(A)；流速为0.8～1.2mL/min；柱温为25～30℃；检测波长210～300nm。本发明专利技术对七味通痹口服液的化学成分进行表征，得到了多种化学成分，并对相关成分信息及含量信息进行了测量。不仅如此，本发明专利技术对主要的入血成分进行分析，并进行药代动力学特征评价；最终在上述研究基础上建立了基于主要入血成分的HPLC含量测定方法，使指标成分的选择更合理，丰富了质量标准提升研究的价值与意义。

Determination of Qiwei Tongbi Oral Liquid

The invention discloses a method for the determination of Qiwei Tongbi oral liquid. The chromatographic conditions for the determination are as follows: the chromatographic column is Agilent ZORBAX SB C18 (4.6*250mm, 5 um); the mobile phase is methanol (A) 0.1% formic acid aqueous solution (B), the elution gradient is 0-10 min, 1-3% (A); 10-35 min, 3-20% (A); 35-50 min, 20-30% (A); 50-70-75 min, 55-10% (A); and the elution gradient is 0-3% (A). 0%(A); 75-85 min, 100%(A); flow rate 0.8-1.2 mL/min; column temperature 25-30 C; detection wavelength 210-300 nm. The invention characterizes the chemical composition of Qiwei Tongbi oral liquid, obtains a variety of chemical components, and measures the relevant component information and content information. Moreover, the present invention analyses the main blood-entry components and evaluates their pharmacokinetic characteristics. Finally, on the basis of the above research, a method for determination of the content of the main blood-entry components by HPLC is established, which makes the selection of the index components more reasonable and enriches the value and significance of the research on improving the quality standards.

【技术实现步骤摘要】
七味通痹口服液的检测方法
本专利技术涉及分析化学
，特别涉及一种七味通痹口服液的质量控制方法。
技术介绍
七味通痹口服液是一种专门用于治疗类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis，RA)的中药口服制剂，处方由蚂蚁(拟黑多刺蚁)、青风藤、鸡血藤、鹿衔草、石楠藤、千年健、威灵仙共七味药材组成，具有补肾壮骨，祛风蠲痹之功效，主治类风湿性关节炎证属肝肾不足、风湿阻络证。上市至今，作为一种治疗RA的口服制剂，其明确的临床疗效，得到广大医患人员的认可，市场占有率逐年提高，具有较高的研究价值。中药复方药是指在中医药理论指导下，用于预防和治疗疾病的方剂药，作为中国传统的中药方剂，其药材组方多，成分复杂，往往成为研究的重点与难点，极大地阻碍了中药现代化发展。因此，结合前人的研究方法与思路，做好物质基础研究是必要的前提条件。此外，还需要推陈出新，不断探索新的研究理念与方法，才能更好更深入地发现中药复方的真正内涵。目前，关于七味通痹口服液的文献报道主要侧重于生产工艺优化、药效学评价及临床RA的治疗等。对于本品的化学成分解析、物质基础、体内代谢过程等尚未进行研究。同时，由于七味通痹口服液的现行质量标准控制成分较为单一，难以反映产品的批间一致性，有必要进行质量标准提升研究，以更好地控制产品的稳定、均一。此外，目前对于七味通痹口服液在体内以何种成分、何种形式发挥作用以及作用机理报道较少，对七味通痹口服液药效物质基础还缺乏进一步的认识。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术拟采用UPLC-QTOF-MS技术对制剂的化学成分及入血成分进行研究，采用UPLC-QQQ-MS技术对主要的PK指标进行大鼠体内的经时过程研究。在此基础上，建立基于入血成分的质量控制方法，为有效控制产品质量、保证批间一致性提供技术支持。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：一种七味通痹口服液的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：取七味通痹口服液供试品和对照品进行检测，该检测的色谱条件为：色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18(4.6*250mm，5μm)；流动相：甲醇(A)-0.1％甲酸水溶液(B)，洗脱梯度：0～10min，1～3％(A)；10～35min，3～20％(A)；35～50min，20～30％(A)；50～70min，30～55％(A)；70～75min，55～100％(A)；75～85min，100％(A)；流速为0.8～1.2mL/min；柱温为25～30℃；检测波长210～300nm；根据检测结果，获得七味通痹口服液的成分信息或含量信息。具体地，所述供试品的制备为，精密量取1mL七味通痹口服液，用纯水稀释10倍，14000rpm离心10min，取上清液，作为供试品溶液。优选地，上述色谱条件中，所述流速为1.0mL/min，柱温为25℃，检测波长254nm。进一步地，所述对照品选自青藤碱、水晶兰苷、芒柄花素、原儿茶酸、缬氨酸、腺嘌呤、焦谷氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、5-羟甲基糠醛、谷氨酸、木兰花碱和芒柄花苷中的一种或多种。具体地，所述对照品的制备为，用50％甲醇制成含各对照品为10～40μg/mL的溶液。可利用前述检测条件建立一种或多种对照品的标准曲线，从而根据供试品检测结果计算有效成分的含量。本专利技术还提出了一种七味通痹口服液化学成分分析方法，其特征在于，用UPLC-QTOF-MS对七味通痹口服液进行分析，其中，色谱条件和质谱条件分别为：色谱条件：色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18(4.6*250mm，5μm)；流动相：甲醇(A)-0.1％甲酸水溶液(B)，洗脱梯度：0～10min，1～3％(A)；10～35min，3～20％(A)；35～50min，20～30％(A)；50～70min，30～55％(A)；70～75min，55～100％(A)；75～85min，100％(A)；流速为0.8～1.2mL/min；柱温为25～30℃；检测波长210～300nm；其中，流速优选为1.0mL/min；柱温优选为25℃；检测波长优选为254nm；质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，正负离子模式；毛细管电压分别为4000、3500V；离子扫描范围m/z100～3000；干燥气流速10L/min；干燥气温度350℃；雾化压力60psi；裂解电压135V；锥孔电压65V；碰撞能量分别采用10、20、30、40eV。本专利技术还提出了一种七味通痹口服液主要入血成分的检测方法，取处理后的七味通痹口服液血浆样品和标准血浆样品进行检测，其特征在于，该方法色谱条件为：色谱柱为AgilentEclipseplusC18(3*50mm，1.8μm)；流动相：甲醇(A)-0.1％甲酸水溶液(B)，梯度洗脱：0～3min，10～45％(A)；3～4min，45～65％(A)；4～4.3min，65～100％(A)；4.3～5min，100％(A)；5～5.5min，100～10％(A)；5.5～6min，10％(A)；柱温：30～40℃；流速：0.5～1.0mL/min；其中柱温优选为40℃，流速优选为0.6mL/min。根据检测结果，获得七味通痹口服液主要入血成分(PK成分)的信息。具体的，处理后的七味通痹口服液血浆样品制备方法为：取血浆样品，加内标溶液(氯霉素，5μg/mL)，再加甲醇，涡旋混匀，14000rpm离心，取上清液即得。进一步地，所述标准血浆样品的制备为，取空白血浆90μL若干份，分别加入10μL混合对照品溶液和10μL内标溶液(氯霉素，5μg/mL)，配制成青藤碱和木兰花碱浓度分别为：240.5/102、120.2/51、60.13/25.5、30.06/12.8、15.03/6.4、7.52/3.19、3.76/1.59、1.88/0.80、0.63/0.27μg/mL的系列标准血浆样品溶液。本专利技术还提出了一种七味通痹口服液入血成分分析的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：取处理后的七味通痹口服液血浆样品和空白血浆样品用UPLC-Q-TOF-MS对该样品进行分析，其中，色谱条件和质谱条件分别为：色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18(4.6*250mm，5μm)；流动相：甲醇(A)-0.1％甲酸水溶液(B)，洗脱梯度：0～10min，1～3％(A)；10～35min，3～20％(A)；35～50min，20～30％(A)；50～70min，30～55％(A)；70～75min，55～100％(A)；75～85min，100％(A)；流速为0.8～1.2mL/min；柱温为25～30℃；检测波长210～300nm；优选地，柱温：25℃，流速：1.0mL/min；检测波长254nm；质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，正负离子模式；毛细管电压分别为4000、3500V；离子扫描范围m/z100～3000；干燥气流速10L/min；干燥气温度350℃；雾化压力60psi；裂解电压135V；锥孔电压65V；碰撞能量分别采用10、20、30、40eV。具体地，其特征在于，上述入血成分分析的七味通痹口服液血浆样品制备方法如下：取血浆样品，加甲醇混匀，14000rpm离心，上清液于40℃氮气吹干，加50％甲醇复溶，14000本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种七味通痹口服液的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：取七味通痹口服液供试品和对照品进行检测，该检测的色谱条件为：色谱柱为Agilent ZORBAX SB‑C18(4.6*250mm，5μm)；流动相：甲醇(A)‑0.1％甲酸水溶液(B)，洗脱梯度：0～10min，1～3％(A)；10～35min，3～20％(A)；35～50min，20～30％(A)；50～70min，30～55％(A)；70～75min，55～100％(A)；75～85min，100％(A)；流速为0.8～1.2mL/min；柱温为25～30℃；检测波长210～300nm；根据检测结果，获得七味通痹口服液的成分信息或含量信息。

【技术特征摘要】
1.一种七味通痹口服液的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：取七味通痹口服液供试品和对照品进行检测，该检测的色谱条件为：色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18(4.6*250mm，5μm)；流动相：甲醇(A)-0.1％甲酸水溶液(B)，洗脱梯度：0～10min，1～3％(A)；10～35min，3～20％(A)；35～50min，20～30％(A)；50～70min，30～55％(A)；70～75min，55～100％(A)；75～85min，100％(A)；流速为0.8～1.2mL/min；柱温为25～30℃；检测波长210～300nm；根据检测结果，获得七味通痹口服液的成分信息或含量信息。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述供试品的制备为，精密量取1ml七味通痹口服液，用纯水稀释10倍，14000rpm离心10min，取上清液，作为供试品溶液。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流速为1.0mL/min，柱温为25℃，检测波长254nm。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述对照品选自青藤碱、水晶兰苷、芒柄花素、原儿茶酸、缬氨酸、腺嘌呤、焦谷氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、5-羟甲基糠醛、谷氨酸、木兰花碱和芒柄花苷中的一种或多种。5.一种七味通痹口服液化学成分分析方法，其特征在于，用UPLC-Q-TOF-MS对七味通痹口服液进行分析，其中，色谱条件和质谱条件分别为：色谱条件：色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18(4.6*250mm，5μm)；流动相：甲醇(A)-0.1％甲酸水溶液(B)，洗脱梯度：0～10min，1～3％(A)；10～35min，3～20％(A)；35～50min，20～30％(A)；50～70min，30～55％(A)；70～75min，55～100％(A)；75～85min，100％(A)；流速为0.8～1.2mL/min；柱温为25～30℃；检测波长210～300nm；质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，正负离子模式；毛细管电压分别为4000、3500V；离子扫描范围m/z100～3000；干燥气流速10L/min；干燥气温度350℃；雾化压力60psi；裂解电压135V；锥孔电压65V；碰撞能量分别采用10、20、30、40eV。6.一种七味通痹口服液主要入血成分的检测方法，其特征在于，该方法包括，取处理后的七味通痹口服液血浆样品和标准血浆样品进行检测，该方法的色谱条件为：色谱柱为AgilentEclipseplusC18(3*50mm，1.8μm)；流动相：甲醇(A)-0.1％甲酸水溶液(B)，梯度洗脱：0～3min，10～45％(A)；3～4min，45～65％(A)...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖伟，耿婷，汤齐，高霞，黄文哲，王振中，曹亮，
申请(专利权)人：江苏康缘药业股份有限公司，江苏康缘阳光药业有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32