一种杂色曲霉HY12菌株制造技术

本发明专利技术提供了一种杂色曲霉HY12菌株，杂色曲霉HY12的菌落呈圆形，质地致密柔软，菌丝呈白色棉絮状，能产生大量分生孢子，分生孢子为棕色粉状，有同心轮纹隆起。本发明专利技术提供了一种杂色曲霉HY12菌株，在短时间内具有极的生长繁殖速度，能够产生大量的分生孢子，可感染斜纹夜蛾，对斜纹夜蛾具有较高的致死率和致畸率，为后期对斜纹夜蛾的防治奠定实验基础，同时为本领域内其他害虫的防治提供有利的参考。

【技术实现步骤摘要】
一种杂色曲霉HY12菌株
本专利技术涉及生物领域，特别是涉及一种杂色曲霉HY12菌株。
技术介绍
自专利技术化学农药之后，化学农药以每年5％惊人速度增长。虽然在过去的几十年中，化学农药在农业作物增产和害虫防治中起到了重要作用，但化学农药的大量使用，带来了严重的“3R”问题(即抗药性Resistance，农药残留Residence，再猖獗Resurgence)，也带来了一系列的生态环境问题。长期大量使用化学农药导致抗药性害虫增加，特别是近10年来，棉铃虫、蚜虫、小菜蛾、斜纹夜蛾、叶螨类等多发性害虫对菊酯类、有机磷类化学农药的抗药性增加了几百乃至数千倍。化学农药的施用，使农产品中农药残留量增加，严重污染了环境，危及人类建康及生命。随着人们生活水平的提高，人们对环境的要求越来越高，因此迫使人们寻找一种害虫防治替代方法。斜纹夜蛾(Spodopteralitura)属鳞翅目夜蛾科，是一种世界性分布的杂食性或多食性的农业害虫，危害寄主相当广泛，除十字花科蔬菜外，还可危害包括瓜、茄、豆、葱、韭菜、菠菜以及粮食、经济作物等近100科、300多种植物，以幼虫咬食叶片、花蕾、花及果实，初龄幼虫啮食叶片下表皮及叶肉，仅留上表皮呈透明斑。斜纹夜蛾4龄以后进入暴食，咬食叶片，仅留主脉，在包心椰菜上，幼虫还可钻入叶球内危害，把内部吃空，并排泄粪便，造成污染，使之降低乃至失去商品价值。斜纹夜蛾虫害在国内各地都有发生，对生产带来了极大的损害。为了规避杀虫剂抗性的问题，也使农民和种植者能够回应消费者对农药残留问题，需要一个有效的方法来控制斜纹夜蛾而不涉及化学农药残留。因此，研究斜纹夜蛾生长和繁殖特性，提供一种繁殖数量大，速度快，且能够感染斜纹夜蛾的菌株，达到抑制斜纹夜蛾的生长和繁殖，为防治斜纹夜蛾提供实验基础是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种杂色曲霉HY12菌株，在短时间内具有极快速的生长繁殖速度，能够产生大量的分生孢子，可感染并直接杀死斜纹夜蛾幼虫，未被直接杀死的幼虫，HY12菌株能使其提前进入蛹期，提高斜纹夜蛾化蛹期间的畸形率和死亡率，对斜纹夜蛾的繁衍具有一定的抑制作用，为后期对斜纹夜蛾的防治奠定实验基础，同时为本领域内其他害虫的防治提供有利的参考。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：从烟田斜纹夜蛾为害区采集土样，从土样中于偶然情况下分离获得13个真菌菌株并对真菌进行纯培养，经形态学观察初步鉴定，它们分别为白僵菌属(Beauverja)2株，镰刀菌属(Fusarium)2株，曲霉属(Aspergullus)3株，木霉属(Trichoderma)1株，青霉属(Penicillium)1株，枝孢属(Cladosporium)1株、未鉴定真菌3株。用纯培养的13个菌株接种斜纹夜蛾3龄幼虫后观察，筛选出1株繁殖速度快，对斜纹夜蛾致病性强的菌株，得到本专利技术中的技术方案。一种杂色曲霉HY12(Aspergillusversicolor)菌株，该菌株于2017年10月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，其保藏编号为CGMCCNO：14790。利用本专利技术提供的筛选出的菌株HY12繁殖速度快，对斜纹夜蛾致病性(感染性)强，LT50时间最短为8.14d，从接种至斜纹夜蛾起，接种菌株HY12的试虫行动迟缓，且提前进入蛹期，化蛹期间试虫畸形率和死亡率最高。进一步的，所述杂色曲霉HY12的TIS区段的序列为SEQIDNO.1。利用菌株HY12rDNAITS特异引物进行PCR扩增，rDNAITS测序后，与GenBank(登录号KY808842.1)真菌序列库中序列进行同源性比对，菌株HY12与曲霉属的多株真菌相似性较高，与Aspergillusversicolor相似性系数达到99％。进一步的，所述杂色曲霉HY12的菌落呈圆形质地致密柔软，菌丝呈白色棉絮状，能产生大量分生孢子，所述分生孢子为棕色粉状，有同心轮纹隆起。将本专利技术提供的菌株HY12接种到SDAY培养基上，其中SDAY培养基为：葡萄糖4份，蛋白胨1份，酵母浸出粉1份，琼脂2份，庆大霉素0.2份，水100份，观察其形态学特征，发现在SDAY培养基上培养14d菌落直径66.3mm。菌落呈圆形，白色棉絮状菌丝，菌落较厚，质地致密柔软；后期大量产生分生孢子，孢子为棕色粉状，粉层厚，有同心轮纹隆起。经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术提供了一种杂色曲霉HY12菌株，具有如下技术优点：本专利技术提供了一种杂色曲霉HY12菌株，在短时间内具有极快速的生长繁殖速度，能够产生大量的分生孢子，可感染斜纹夜蛾使其提前进入蛹期，对斜纹夜蛾蛹具有较高的致死率和致畸率，为后期对斜纹夜蛾的防治奠定实验基础，同时为本领域内其他害虫的防治提供有利的参考。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1附图为本专利技术提供的杂色曲霉HY12菌株的菌落图；图2附图为本专利技术提供杂色曲霉HY12的rDNAITS区段PCR凝胶电泳图；图3附图为本专利技术提供的菌株HY12亲缘关系相近菌株的系统发育树。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1杂色曲霉HY12菌株筛选从湘南烟田斜纹夜蛾为害区采集47个土样，其中永州江华25个土样，衡阳16个土样，江永4个土样，宁远2个土样。其中利用5点取样法采集土样，选择两烟株之间的中心距离处作为取土点，用土铲向下切取长10cm、宽10cm、深5cm土壤样品放入无菌的自封塑料袋中，带回实验室，置于冰箱中保存备以分离。详细记录样品采集的时间、地点及相关信息，不同土样要分别进行标记。将采回的烟田土样在无菌状态下碾碎并充分混合，过目筛后再充分混合，进一步用四分法进行多次取样，直至最终土壤样品量为20-50g。土壤悬浮液的制备：随机挑取2.5g土壤样品，加入50mL0.05％吐温-80溶液置于试管中，充分震荡混匀；取出2mL悬浊液加入到另一试管中，再加入8mL0.05％吐温80溶液中，震荡混匀，从中再取出2mL，加8mL0.05％吐温80溶液，依次类推，悬浊液的浓度分别为0.05、0.01、0.002mg/L；各浓度取0.2mL悬浊液加入到HECK培养基中进行稀释涂布，25.6℃下培养5天。其中HECK选择培养基包括葡萄糖4份、蛋白胨2份，高锰酸钾0.025份，放线菌酮0.5份，庆大霉素0.2份，氨苄青霉素0.048份，琼脂2份和水100份。挑取HECK培养基中的单菌落，然后在SDAY真菌培养基上采用平板划线法进行分离纯化，获得纯化的生长的菌株。其中SDAY培养基为：葡萄糖4份，蛋白胨1份，酵母浸出粉1份，琼脂2份，庆大霉素0.2份和水100份，共获得13个真菌菌株，经本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杂色曲霉HY12菌株，其特征在于，该菌株于2017年10月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCCNO：14790。

【技术特征摘要】
1.一种杂色曲霉HY12菌株，其特征在于，该菌株于2017年10月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCCNO：14790。2.根据权利要求1所述的一种杂色曲霉HY12菌株，其特征在于，所述杂色...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭琳，汤心砚，胡秋龙，刘双清，柏连阳，程予奇，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43