【技术实现步骤摘要】
一种基于foldon介导的寡聚化阿魏酸酯酶的制备方法
本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种基于foldon介导的寡聚化FAE的制备方法。
技术介绍
植物细胞壁中，酚酸类物质(如阿魏酸、咖啡酸、对香豆酸等)通过酯键与多糖(如阿拉伯木聚糖、果糖)的阿拉伯糖基或半乳糖基相连，或者通过醚键与木质素相连，形成致密的网状结构。阿魏酸酯酶(feruloylesteraseE.C3.1.1.73，FAE)是羧酸酯酶的一个亚类，它能水解植物细胞壁中阿魏酸与多糖之间连接的酯键，释放阿魏酸。FAE可以协同木质纤维降解酶，如木聚糖酶、纤维素酶及木质素酶，破坏木质纤维的致密网状结构，促进木质纤维降解。但目前报道的FAE的催化性能有待提高，需对酶进行改造，例如陈云华等在华侨大学学报(自然版)(2016.37(2):p.224-229)公开的阿魏酸酯酶O42807在毕赤酵母GS115中的表达，再例如李兵等在微生物学通报(2017.44(5):p.1065-1073)公开的黑曲霉FAE基因密码子优化及在毕赤酵母中的高效表达。申请号为201410724759.4的专利技术专利公开了一种重组...
【技术保护点】
1.一种基于foldon介导的寡聚化阿魏酸酯酶的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：设计如SEQ ID No.1所示的linker序列，并根据阿魏酸酯酶FAEO42807的氨基酸序列对应的核苷酸序列，设计基因序列His‑fae‑linker‑foldon，并在两端分别加入SnaB I和Not I酶切位点，人工合成基因片段His‑fae‑linker‑foldon；将pPIC9K质粒及His‑fae‑linker‑foldon用SnaB I和Not I双酶切，用T4连接酶连接质粒pPIC9K和基因片段His‑fae‑linker‑foldon，构建并筛选pPIC9K/His‑...
【技术特征摘要】
1.一种基于foldon介导的寡聚化阿魏酸酯酶的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：设计如SEQIDNo.1所示的linker序列，并根据阿魏酸酯酶FAEO42807的氨基酸序列对应的核苷酸序列，设计基因序列His-fae-linker-foldon，并在两端分别加入SnaBI和NotI酶切位点，人工合成基因片段His-fae-linker-foldon；将pPIC9K质粒及His-fae-linker-foldon用SnaBI和NotI双酶切，用T4连接酶连接质粒pPIC9K和基因片段His-fae-linker-foldon，构建并筛选pPIC9K/His-fae-linker-foldon质粒阳性克隆子，并电转化至P.pastorisGS115表达，得到pPIC9K/His-fae-linker-foldon工程菌；将pPIC9K/His-fae-linker-foldon工程菌在培养基中诱导表达，诱导表达采用的诱导培养基的成分为：BMMY培养基，1～2％去淀粉麦麸；分离纯化获得寡聚化的阿魏酸酯酶；将寡聚化的阿魏酸酯酶保存在复合稳定剂中，所述复合稳定剂按质量份数计，包括：4～6份木聚糖酶且木聚糖酶的含量≥20000U/mL、2～4份纤维素酶且纤维素酶的含量≥10000U/mL、0.02～0.04份的MgSO4、7～9份的PEG400。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述将pPIC9K/His-fae-linker-foldon工程菌在培养基中诱导表达具体包括：将pPIC9K/His-fae-linker-foldon工程菌接种到种子培养基中，培养条件：28～30℃，150～250rpm，培养16～18h；将经过种子培养基培养后的培养液在2～4℃及3500～4500rpm离心4～6min，收集细胞，加入到所述诱导培养基中，培养条件：28～30℃，150～250rpm，培养96～100...
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