一种植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因及其编码的蛋白质和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因及其编码的蛋白质和应用，属于生物工程领域。本发明专利技术是利用PCR技术将Lactobacillus plantarum中的亚硝酸盐还原酶基因进行克隆并在大肠杆菌中进行诱导表达，利用亲和层析作用纯化得到高纯度的重组蛋白。利用本发明专利技术的方法纯化得到的高纯度的蛋白质可以有效的降解食品中的亚硝酸盐，并可以用于对其结构及性质的研究。

【技术实现步骤摘要】
一种植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因及其编码的蛋白质和应用
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因的重组载体、用该载体转化的宿主以及利用该转化体大量表达亚硝酸盐还原酶、和亚硝酸盐还原酶的高效亲和层析纯化方法。
技术介绍
亚硝酸盐是一种潜在的致癌物质，在蔬菜发酵过程中极易积累，给产品带来潜在的个品安全问题，且过量摄入亚硝酸盐可诱发高铁血红蛋白症，因此严格控制食品中亚硝酸盐的含量非常重要。许多研究表明亚硝酸盐是亚硝胺的前体物，亚硝胺是一种强致癌物，可以诱发消化系统中的多种癌变，如胃癌、肠癌和肝癌。鉴于食品可能存在超标亚硝酸盐污染和肉制品中含有亚硝酸盐的潜在食品安全问题，寻求有效控制或降解亚硝酸盐的方法势在必行，除了加入食用安全的乳酸菌外，还可利用亚硝酸盐还原酶(NiR)进行亚硝酸盐的生物降解。但是，目前对如何得到大量的食用安全的亚硝酸盐还原酶还没有很好的方法。主要是因为酶蛋白质的分离纯化困难导致生产成本过高而无法实现产业化，与常规蛋白分离技术相比，固定金属离子亲和层析技术(Imobilizedmetalionaffinitychromatography，简称本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因，其特征在于，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因，其特征在于，其核苷酸序列为SEQIDNO.1所示。2.权利要求1所述基因编码的蛋白质。3.根据权利要求2所述的蛋白质，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。4.含有权利要求1所述基因的重组表达载体。5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于，所述的表达载体为pET-28a(+)。6.含有权利要求1所述基因的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为大肠杆菌细胞。7.根据权利要求1所述的一种植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因，其特征在于，所述的还原酶基因编码的蛋白质的制备方法，包括如下步骤：(1)植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶的基因组DNA的制备1)以Genbank中植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶的DNA设计出PCR引物：上游引物(SEQIDNO.3)为5-CTCGAGAAAAGACCATGGCCAA-3(NcoI)，下游引物(SEQIDNO.4)为5-CTTAAGAATCCTGTTTGGAC-3(XhoI)，并人工合成这对上下游引物；2)植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶的基因组DNA的提取；3)目的基因的扩增；(2)重组表达载体pET28a(+)-nir的构建(3)构建好的表达载体pET28a(+)-nir质粒，转入E.coliBL21感受态细胞中，获得重组大肠杆菌进行诱导表达将构建好的表达菌株接种到LB/Kan液体培养基中，37℃振荡过夜培养14h，然后分别按1％的菌液量接种于含有100mLLB/Kan液体培养基的三角瓶中，37℃振荡培养4h，加入IPTG使最终浓度为1mmol/L；将菌液8000r/min离心10min，弃去上清液，沉淀菌体用pH7.4PBS缓冲液洗涤两次，将洗涤后的菌体重悬于10mL预冷的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张庆芳，李美玉，迟乃玉，王晓辉，于爽，胡善松，
申请(专利权)人：大连大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21