一种精子顶体酶的提取方法技术

本发明专利技术提供了一种精子顶体酶的提取方法，所述方法包括以尿素溶液作为萃取剂，采用液‑固萃取技术将精子顶体酶萃取至液体中，并添加了顶体酶稳定剂保持酶的活性；本发明专利技术通过优选萃取剂和顶体酶稳定剂，并优化浓度配比，使其不损失酶活的前提下简化操作步骤，使顶体酶保存期达到14天以上；本发明专利技术工艺简单，可实现工业化大规模生产，可为企业带来良好的经济效益，具备广阔的前景。

【技术实现步骤摘要】
一种精子顶体酶的提取方法
本专利技术属于生物
，涉及一种精子顶体酶的提取方法。
技术介绍
顶体酶是受精过程中重要的蛋白水解酶，存在于精子头部顶体内膜与赤道膜之间。当精子与卵母细胞结合后，精子头部发生顶体反应，顶体外膜破裂，释放顶体酶溶解卵母细胞周围的放射冠和透明带，使精子穿过透明带与卵细胞融合完成受精。精子顶体酶活性降低可影响精子穿透卵母细胞透明带，从而导致受精失败。通过精液常规难以鉴别的不育原因患者，其顶体酶活性也低；顶体酶活性是判断男性精子功能和生育力强弱的重要评价指标。目前市面上流行的检测试剂盒有深圳市博锐德生物科技有限公司生产的精子顶体酶活性定量测定试剂盒(固相BAPNA法)(粤食药监械(准)字2014第2401138号)，其检验原理是：以高分子聚合物将待测精子固着于聚四氟乙烯膜(PTFE)表面，通过特制的反应装置控制反应液与PTFE表面精子的接触与分离，达到实现检测精子顶体酶和终止反应的目的。检测被固相捕获精子的精氨酸酰胺酶活性，精子顶体内的精氨酸酰胺酶活性可反映全部顶体酶的活性。Nα-苯甲酰-DL-精胺酸-ρ-硝酰基苯胺(BAPNA)在精氨酸酰胺酶的作用下，分解产生本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种精子顶体酶的提取方法，其特征在于，所述提取方法以液‑固萃取技术为基础，向精子中加入萃取液，采用Ficoll密度梯度离心法进行分离，萃取得到精子顶体酶；所述萃取液包括尿素。

【技术特征摘要】
1.一种精子顶体酶的提取方法，其特征在于，所述提取方法以液-固萃取技术为基础，向精子中加入萃取液，采用Ficoll密度梯度离心法进行分离，萃取得到精子顶体酶；所述萃取液包括尿素。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述尿素的浓度为4-8M；优选地，所述萃取液还包括Ficoll400、TritonX-100或HEPES-氢氧化钠缓冲液中的任意一种或至少两种的组合。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)将精液离心留取精子沉淀；(2)将步骤(1)的精子沉淀中加入萃取液，萃取后离心留取上清。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述离心的转速为1800-2200g；优选地，步骤(1)所述离心的时间为10-30min；优选地，步骤(2)所述萃取的时间为50-70min；优选地，步骤(2)所述离心的转速为1800-2200g；优选地，步骤(2)所述离心的时间为8-12min；优选地，步骤(2)所述萃取液与精子沉淀的比例为每1毫升精液离心得到的精子沉淀加0.8-1.2毫升萃取液。5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述方法还包括向萃取的上清中加入顶体酶稳定剂的步骤；优选地，所述顶体酶稳定剂包括海藻糖；优选地，所述海藻糖的浓度为0.2-0.4mol/L。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述顶体酶稳定剂还包括HAM’S-F10培养基；优选地，所述HAM’S-F10培养基的体积浓度为45-55％；优选地，所述顶体酶稳定...

【专利技术属性】
技术研发人员：李明磊，傅剑华，蔡华，曾周祥，蔡栋，庄兴华，邹玮，
申请(专利权)人：深圳华康生物医学工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44