一种干细胞无血清培养基制造技术

本发明专利技术公开了一种干细胞无血清培养基，包括基础培养基、添加成分以及细胞因子组合，以基础培养基的体积作为基准，所述添加剂组成及其含量分别为转铁蛋白，体积比为5％‑10％、胰岛素，5‑15mg/L、L‑谷氨酰胺，2‑4mM、生长因子，5‑15ng/mL、BMP‑5抗体，0.05‑0.25ng/mL、脂类复合物，2‑4mM以及微量元素，1‑5mg/L。本发明专利技术采用无血清等动物源的成分，排除血清中含有许多不确定物质(如不同的抗原、抗体、激素和细胞因子等)对于造血干细胞体外扩增的存活率以及细胞增殖过程的干扰，进而增加增殖效率高以及高活性的造血干细胞的数量，同时调整细胞因子在造血干细胞体外扩增过程中使用的种类以及添加的含量，进而提高造血干细胞在体外增殖中的活性，以降低细胞的死亡率。

【技术实现步骤摘要】
一种干细胞无血清培养基
专利技术涉及干细胞体外培养
，具体为一种干细胞无血清培养基。
技术介绍
骨髓造血干细胞及成体外周血造血干细胞移植可治疗血液肿瘤(如白血病、多发性骨髓瘤等)、再生障碍性贫血、免疫缺陷病及遗传性疾病。近年来,由于脐血造血干细胞基础研究的进展，发现脐血中含有比骨髓更丰富的造血干细胞,其生长扩增能力比骨髓来源丰富而且易得,采集时安全、简便,较少发生病毒传播和移植物抗宿主病。在过去,脐血是废弃物,而现在,脐血干细胞可通过脐血库保存,增加了其合理利用的可能性。但是，充分利用脐血干细胞则需要采用更多的方法使脐血干细胞增多,目前研究得最多的是脐血干细胞的体外扩增，然而体外扩增常规要加入人或动物血清,而血清中含有许多不确定物质(如不同的抗原、抗体、激素和细胞因子等)，近年来尤为重视动物体内的病毒感染,其血清中可能携带某些动物病毒,这是用血清体外扩增干细胞用于移植的潜在危险，进而影响细胞的存活率以及细胞增殖过程，此外，造血干细胞的增值分化、发育成熟过程相当复杂，依赖于各种造血因子的调节，其中细胞刺激因子发挥的作用极为关键，而相关细胞刺激因子的组成以及含量对于造血干细胞的体外扩增具有一定影响，为此，我们提出了一种干细胞无血清培养基。
技术实现思路
专利技术的目的在于提供一种干细胞无血清培养基，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，专利技术提供如下技术方案：一种干细胞无血清培养基，其特征在于：以基础培养基的体积作为基准，所述添加成分组成及其含量分别为转铁蛋白，体积比为5％-10％、胰岛素，5-15mg/L、L-谷氨酰胺，2-4mM、生长因子，5-15ng/mL、BMP-5抗体，0.05-0.25ng/mL、脂类复合物，2-4mM以及微量元素，1-5mg/L。优选的，所述基础培养基采用DMEM基础培养基。优选的，以DMEM基础培养基的体积作为基准，所述细胞因子组合组成以及含量分别为：干细胞生长因子(SCF)，10-20ng/mL、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，5-15ng/mL、白细胞介素3(IL-3)，1-5ng/mL以及白细胞介素6(IL-6)1-15ng/mL。优选的，所述DMEM基础培养基为高糖型DMEM基础培养基，葡萄糖浓度为3000mg/L-4500mg/L。优选的，所述干细胞无血清培养基适用于脐血造血干细胞以及骨髓造血干细胞等造血干细胞的体外扩增培养。优选的，所述DMEM基础培养基和添加剂按照特定体积比或含量混合制得培养液。优选的，所述细胞组合因子添加时间为造血干细胞接种于培养液后并在造血干细胞体外扩增中逐步添加。优选的，所述造血干细胞体外扩增周期为14d。与现有技术相比，专利技术的有益效果是：1、该种干细胞无血清培养基，采用无血清等动物源的成分，以DMEM基础培养基、添加成分以及细胞因子组合三大部分组成，排除血清中含有许多不确定物质(如不同的抗原、抗体、激素和细胞因子等)对于造血干细胞体外扩增的存活率以及细胞增殖过程的干扰，进而增加增殖效率高以及高活性的造血干细胞的数量，更好的应用于血液肿瘤(如白血病、多发性骨髓瘤等)、再生障碍性贫血、免疫缺陷病及遗传性疾病中去。2、该种干细胞无血清培养基，调整细胞因子在造血干细胞体外扩增过程中使用的种类以及添加的含量，进而提高造血干细胞在体外增殖中的活性，以降低细胞的死亡率，进而在较短的培养周期内明显增加细胞数量，同时该培养基的可以同时适用于脐血造血干细胞与骨髓造血干细胞的体外增殖与应用。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例一：专利技术提供一种技术方案：一种干细胞无血清培养基，其特征在于：以葡萄糖浓度为3750mg/L的高糖型DMEM基础培养基的体积作为基准，所述添加成分组成及其含量分别为转铁蛋白，体积比为7.5％、胰岛素，10mg/L、L-谷氨酰胺，3mM、生长因子，10ng/mL、BMP-5抗体，0.15ng/mL、脂类复合物，3mM以及微量元素，3mg/L，同时，所述细胞因子组合组成以及含量分别为：干细胞生长因子(SCF)，15ng/mL、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，10ng/mL、白细胞介素3(IL-3)，3ng/mL以及白细胞介素6(IL-6)8ng/mL，所述DMEM基础培养基和添加剂按照特定体积比或含量混合制得培养液，在14d内，将细胞组合因子中按照干细胞生长因子(SCF)、白细胞介素3(IL-3)、白细胞介素6(IL-6)以及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的顺序加入培养液中，所述干细胞无血清培养基适用于脐血造血干细胞以及骨髓造血干细胞等造血干细胞的体外扩增培养。实施例二：专利技术提供一种技术方案：一种干细胞无血清培养基，其特征在于：以葡萄糖浓度为4500mg/L的高糖型DMEM基础培养基的体积作为基准，所述添加成分组成及其含量分别为转铁蛋白，体积比为10％、胰岛素，15mg/L、L-谷氨酰胺，4mM、生长因子，5ng/mL、BMP-5抗体，0.25ng/mL、脂类复合物，4mM以及微量元素，5mg/L，同时，所述细胞因子组合组成以及含量分别为：干细胞生长因子(SCF)，20ng/mL、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，15ng/mL、白细胞介素3(IL-3)，5ng/mL以及白细胞介素6(IL-6)15ng/mL，所述DMEM基础培养基和添加剂按照特定体积比或含量混合制得培养液，在14d内，将细胞组合因子中按照干细胞生长因子(SCF)、白细胞介素3(IL-3)、白细胞介素6(IL-6)以及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的顺序加入培养液中，所述干细胞无血清培养基适用于脐血造血干细胞以及骨髓造血干细胞等造血干细胞的体外扩增培养。实施例三：一种干细胞无血清培养基，其特征在于：以葡萄糖浓度为3000mg/L的高糖型DMEM基础培养基的体积作为基准，所述添加成分组成及其含量分别为转铁蛋白，体积比为5％、胰岛素，5mg/L、L-谷氨酰胺，2mM、生长因子，5ng/mL、BMP-5抗体，0.05ng/mL、脂类复合物，2mM以及微量元素，1mg/L，同时，所述细胞因子组合组成以及含量分别为：干细胞生长因子(SCF)，10ng/mL、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，5ng/mL、白细胞介素3(IL-3)，1ng/mL以及白细胞介素6(IL-6)1ng/mL，所述DMEM基础培养基和添加剂按照特定体积比或含量混合制得培养液，在14d内，将细胞组合因子中按照干细胞生长因子(SCF)、白细胞介素3(IL-3)、白细胞介素6(IL-6)以及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的顺序加入培养液中，所述干细胞无血清培养基适用于脐血造血干细胞以及骨髓造血干细胞等造血干细胞的体外扩增培养。显然，本领域的技术人员可以对本专利技术进行各种改动和变型而不脱离本专利技术的精神和范围。这样，倘若本专利技术的这些修改和变型属于本专利技术权利要求及其等同技术的范围之内，则本专利技术也意图包含这本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种干细胞无血清培养基，包括基础培养基、添加成分以及细胞因子组合，其特征在于：以基础培养基的体积作为基准，所述添加成分组成及其含量分别为转铁蛋白，体积比为5％‑10％、胰岛素，5‑15mg/L、L‑谷氨酰胺，2‑4mM、生长因子，5‑15ng/mL、BMP‑5抗体，0.05‑0.25ng/mL、脂类复合物，2‑4mM以及微量元素，1‑5mg/L。

【技术特征摘要】
1.一种干细胞无血清培养基，包括基础培养基、添加成分以及细胞因子组合，其特征在于：以基础培养基的体积作为基准，所述添加成分组成及其含量分别为转铁蛋白，体积比为5％-10％、胰岛素，5-15mg/L、L-谷氨酰胺，2-4mM、生长因子，5-15ng/mL、BMP-5抗体，0.05-0.25ng/mL、脂类复合物，2-4mM以及微量元素，1-5mg/L。2.如权利要求1所述的一种干细胞无血清培养基，其特征在于：所述基础培养基采用DMEM基础培养基。3.如权利要求1或2所述的一种干细胞无血清培养基，其特征在于：以DMEM基础培养基的体积作为基准，所述细胞因子组合组成以及含量分别为：干细胞生长因子(SCF)，10-20ng/mL、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，5-15ng/mL、白细胞介素3(IL-3)，1-5n...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴家波，周海军，
申请(专利权)人：广州和能生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44