干细胞体外扩增培养体系及其方法技术

一种干细胞的体外扩增方法，采用含有烟酰胺类物质的扩增培养体系，以无血清培养基为基础培养基，添加了8％～12％胎牛血清、细胞因子组合物和烟酰胺类物质。所述细胞因子组合物包括干细胞因子、促血小板生成素、FLt3配体、G‑CSF、IL‑3和IL‑6。与常规培养体系相比，用本发明专利技术的培养体系培养CD34+细胞1周～12周，可以有效增加造血干细胞数量，提高CD34+/Lin‑和CD34+/CD38‑细胞比例，有助于解决造血干细胞移植中细胞数量不足的问题。

In Vitro Expansion and Culture System of Stem Cells and Its Methods

A method for in vitro amplification of stem cells was developed by using an amplification culture system containing nicotinamides and serum-free medium with 8%-12% fetal bovine serum, cytokine compositions and nicotinamides added. The cytokine composition comprises stem cell factor, thrombopoietin, FLt3 ligand, G_CSF, IL_3 and IL_6. Compared with the conventional culture system, the culture system of the present invention can effectively increase the number of hematopoietic stem cells, increase the proportion of CD34+/Lin_and CD34+/CD38 cells, and help to solve the problem of insufficient number of cells in hematopoietic stem cell transplantation.

【技术实现步骤摘要】
干细胞体外扩增培养体系及其方法
本专利技术属于生物医学领域，具体涉及一种用于体外扩增干细胞的组合物，尤其是一种用于体外扩增造血干细胞的培养体系，以及造血干细胞的体外快速扩增培养方法。
技术介绍
造血干细胞(hematopoieticstemcells，HSCs)是存在于造血组织和血液中的一类成体干细胞，具有自我更新能力和分化为所有成熟血细胞的潜能。HSCs是最早被人们发现和研究的干细胞，它在人胚胎发育第二周时出现于卵黄囊，大约在第四周时转移至胚胎肝，在妊娠五个月时进入骨髓进行造血。临床发现，大部分恶性血液疾病，如急性髓系白血病、慢性髓性白血病的发生和进展，都直接或间接地与HSCs异常有关。自从20世纪60年代发展至今，HSCs移植已经成为治疗各型白血病、再生障碍性贫血、β-地中海贫血等严重血液病和免疫系统疾病的重要医疗手段，同时也被应用于某些实体瘤的治疗，如淋巴瘤、小细胞肺癌等。目前临床应用的HSCs有三大来源，即骨髓、外周血和脐带血。造血干细胞数量不足是全球范围内限制其临床应用的主要障碍之一。骨髓或外周血HSCs移植对供、受者间配型要求极高，患者常常需要等待较长时间才能找到合适的供本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种干细胞体外扩增培养方法，其特征在于，培养过程中使干细胞与能抑制CD38表达和/或活性及CD38相关信号通路的表达和/或活性的物质相接触，延长细胞增殖周期，扩增CD34+细胞数量。

【技术特征摘要】
1.一种干细胞体外扩增培养方法，其特征在于，培养过程中使干细胞与能抑制CD38表达和/或活性及CD38相关信号通路的表达和/或活性的物质相接触，延长细胞增殖周期，扩增CD34+细胞数量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述能抑制CD38表达和/或活性及CD38相关信号通路的表达和/或活性的物质为烟酰胺类物质。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述烟酰胺类物质是指能发挥类似烟酰胺作用的物质，选自于烟酰胺、烟酰胺类似物、烟酰胺及其类似物的衍生物、烟酰胺及其类似物的代谢产物。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述烟酰胺类似物选自于苯甲酰胺、尼古丁硫代酰胺、烟酸和α-氨基-3-吲哚丙酸之一种或几种；所述烟酰胺及其类似物的衍生物选自于取代苯甲酰胺、取代烟酰胺、N-取代烟酰胺、烟碱硫代酰胺之一种或几种；所述烟酰胺及其类似物的代谢产物为NAD、NADH和NADPH之一种或几种。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述烟酰胺类物质选自于烟酰胺、选自于苯甲酰胺、尼古丁硫代酰胺、烟酸或α-氨基-3-吲哚丙酮酸之一种或几种。6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述烟酰胺类物质在培养体系中的终浓度为0.1mM～20mM。7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述烟酰胺类物质在培养体系中的终浓度为1.0mM～10mM。8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述烟酰胺类物质在培养体系中的终浓度为1.0mM～6.0mM。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，以无血清培养基为基础培养基，还添加了8v/v％～12v/v％胎牛血清。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述培养体系中还外源性添加多种细胞因子，包括：早期效应细胞因子，其选自于肝细胞生长因子、FMS样的酪氨酸激酶3配体、白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-6、白介素-10、白介素-12、肿瘤坏死因子-α和促血小板生成素之一种或几种；和晚期效应细胞因子，其选自于粒细胞集落刺激因子、巨噬细胞集落刺激因子、红细胞生成素、纤维母细胞生长因子、表皮生长因子、神经生长因子、血管内皮生长因子、白血病抑制因子和肝细胞因子。11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述外源添加的多种细胞因子为SCF30ng/mL～300ng/mL、TPO2ng/mL～20ng/mL、FLt3配体50ng/mL～300ng/mL、IL-610ng/mL～100ng/mL和IL-320ng/mL～200ng/mL。12.根据权利要求10所述的体外扩增干细胞的培养体系，其特征在于，还添加G-CSF20ng/mL～80ng/mL，EPO2ng/mL～20ng/mL。13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述干细胞可来自于健康供体的新鲜的...

【专利技术属性】
技术研发人员：章毅，伍婷，陈侃俊，李冉，陈亮，陆薇，
申请(专利权)人：章毅，中国干细胞集团上海生物科技有限公司，重庆市干细胞技术有限公司，中国干细胞集团海南博鳌附属干细胞医院有限公司，上海市干细胞技术有限公司，陕西省干细胞技术有限公司，苏州市干细胞技术有限公司，三亚市干细胞技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31