The invention discloses a method for preparing artificial hematopoietic stem cells by using artificial hematopoietic progenitor cells, which includes the following steps: S1 obtains CD34+CD90, CD34+CD45RA+umbilical cord blood hematopoietic progenitor cells from human umbilical cord blood; S2 CD34+CD90, CD34+CD45RA+umbilical cord blood hematopoietic progenitor cells are suspended and inoculated in a special transformation medium for umbilical cord blood hematopoietic stem cells, and the umbilical cord blood hematopoietic stem cells are specially StemSpan SFEM II serum-free medium was used in the transformation medium, adding 100ng/ml SCF, 100ng/ml FLT3, 50ng/ml TPO, and the cell inoculation density in 24-well plate was 0.55x10.
【技术实现步骤摘要】
一种将人造血祖细胞转变为造血干细胞的方法
本专利技术涉及造血干细胞
,特别涉及利用化学小分子由人造血祖细胞制备人造血干细胞的方法。
技术介绍
造血干细胞是成体内极其重要的一类干细胞,尽管其仅占人体血细胞比例不到万分之一,但具备极强的自我更新能力和分化能力,能长期重建机体整个血液系统和免疫系统,具备各世系血细胞和免疫细胞的分化潜能。因此,造血干细胞被广泛应用于白血病、淋巴瘤等恶性血液疾病的临床治疗。不仅如此,造血干细胞移植还能帮助治疗代谢性疾病、先天性免疫缺陷、糖尿病等病症。据统计,每年全世界有超过40,000例造血干细胞移植手术。目前,造血干细胞的供体主要来源于患者自体或者与患者HLA匹配的捐献者的骨髓和动员的外周血造血干细胞。尽管该移植技术疗效很好,但由于其存在HLA配型的严格配对要求,仍有大约70%的患者不能获得合适的供体而无法接受治疗;即使接受了治疗,多数患者也会经受程度各异的移植物抗宿主病(GVHD)的折磨。脐带血造血干细胞对于HLA配型的要求相对较低,且免疫原性低,再加上其获取方便、来源丰富,逐渐成为造血干细胞移植供体的一大来源。然而由于单份脐带血所含造血干细胞数量少,不足以短时间内重建成人患者的免疫系统,从而增高机会性感染致死率,急需一种增加脐带血造血干细胞数量的方法。造血祖细胞是一类自我更新能力和分化潜能低于造血干细胞的细胞类型,虽然表达CD34表面抗原,但不表达造血干细胞特异的CD90表面分子,而为CD45RA阳性。因此,可以利用CD90和CD45RA区分造血干细胞和造血祖细胞。造血祖细胞具备短期(不到一个月)的体内移植能力,能分化为 ...
【技术保护点】
1.一种利用人造血祖细胞制备人造血干细胞的方法,包括以下步骤:S1从人脐带血获取CD34+CD90‑和CD34+CD45RA+脐带血造血祖细胞;S2将所述CD34+CD90‑和CD34+CD45RA+脐带血造血祖细胞悬浮接种于脐带血造血干细胞专用转化培养基中培养,所述脐带血造血干细胞专用转化培养基采用StemSpan SFEM II无血清培养基,添加100ng/ml SCF,100ng/mlFLT3,50ng/ml TPO;24孔板中细胞接种密度为:CD34+CD90‑细胞为0.55x104/孔,CD34+CD45RA+细胞为0.13x104/孔;添加丁酸钠1μM;置于37℃,5%CO2培养箱培养。
【技术特征摘要】
1.一种利用人造血祖细胞制备人造血干细胞的方法,包括以下步骤:S1从人脐带血获取CD34+CD90-和CD34+CD45RA+脐带血造血祖细胞;S2将所述CD34+CD90-和CD34+CD45RA+脐带血造血祖细胞悬浮接种于脐带血造血干细胞专用转化培养基中培养,所述脐带血造血干细胞专用转化培养基采用StemSpanSFEMII无血清培养基,添加100ng/mlSCF,100ng/mlFLT3,50ng/mlTPO;24孔板中细胞接种密度为:CD34+CD90-细胞为0.55x104/孔,CD34+CD45RA+细胞为0.13x104/孔;添加丁酸钠1μM;置于37℃,5%CO2培养箱培养。2.根据权利要求1所述的利用人造血祖细胞制备人造血干细胞的方法,其特征在于,进一步包括:S3根据细胞培养状态,每隔2天补加所述脐带血造血干细胞专用转化培养基500μl,7~10天获得数量较多的细胞,扩增倍数为4~20倍。3.根据权利要求2所述的利用人造血祖细胞制备人造血干细胞的方法,其特征在于,步骤S1所述的从人脐带血获取CD34+CD90-和CD34+CD45RA+脐带血造血祖细胞进一步包括以下步骤:S11获取外周血单个核细胞PBMC;S12利用磁珠分选MACS从上述PBMC中获得CD34+脐带血造血干、祖细胞;和S13将CD34+细胞利用流式抗体CD34、CD90、CD45RA染色半小时,通过流式分选仪分选得到CD34+CD90-和CD34+CD45RA+造血祖细胞。4.根据权利要求3所述的利用人造血祖细胞制备人造血干细胞的方法,其特征在于,步骤S11所述的获取外周血单个核细胞PBMC进一步包括以下步骤:S111用含肝素钠等抗凝剂的一次性血袋采集脐带血80~120ml,将脐带血由血袋转移至...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘德芳,陈立功,杨欢,郭潇,齐海龙,王晓芳,
申请(专利权)人:诺未科技北京有限公司,诺未科技银川有限公司,
类型:发明
国别省市:北京,11
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