一种胎盘血造血干细胞的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种胎盘血造血干细胞的培养方法，包括以下步骤：(1)采集胎盘血，通过0.3‑1.0wt％的氯化钠溶液稀释，0.3‑1.0wt％的甲基纤维素溶液沉淀，再用浓度为12‑16％的人AB血浆重悬和分离液分离纯化，获得单个核细胞；(2)向单个核细胞重悬液中加入CD34

【技术实现步骤摘要】
一种胎盘血造血干细胞的培养方法
本专利技术属于细胞培养
，具体涉及一种胎盘血造血干细胞的培养方法。
技术介绍
造血干细胞是血液系统中的成体干细胞，是一个异质性的群体，具体长期自我更新的能力和分化成各类成熟血细胞的潜能。它是研究历史最长且最为深入的一类成体干细胞，对研究各类干细胞，包括肿瘤干细胞，具有重要指导意义。由于造血干细胞具有多向分化的潜能，将造血干细胞移植到体内是治疗白血病、淋巴瘤等恶性肿瘤、代谢性疾病、自身免疫性疾病及先天免疫缺陷等严重危害人类健康疾病的有效方法，可以有效的减轻患者的痛苦。但是，由于造血干细胞在体内的数量极少，大大的限制了造血干细胞在临床中的应用。随着医学和生物技术的发展，近年来发现胎盘含有大量的造血干细胞，且所含造血干细胞数量很高，而且移植胎盘造血干细胞的配型要求不需要很严格，移植后反应较轻且不需要采用药物等优点，从胎盘血中提取造血干细胞的方向成为领域内的研究方向。目前，提取出的造血干细胞的体位增殖途径主要有两种，一种是通过基质的灌注进行体外培养；第二种是将造血干细胞接种于造血干细胞培养基进行体外培养。但采用这两种方法培养的造血干细胞大多存在活性和增殖本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胎盘血造血干细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采集胎盘血，加入等体积的稀释液进行稀释，得胎盘血稀释液，接着向胎盘血稀释液中加入质量百分数为4‑8％的沉淀液进行沉淀，然后离心，弃除上清液，得沉淀，向沉淀中加入重悬液，混匀，然后再加入分离液，离心，取云雾层，向云雾层中加入重悬液，混匀，离心，得单个核细胞，向单个核细胞中加入重悬液，得细胞重悬液，细胞重悬液中单个核细胞密度为1‑2×108个/mL；(2)向细胞重悬液中加入CD34+抗体，混匀，室温下孵育10‑20min，然后加入CD34+免疫磁珠，混匀，室温下孵育10‑20min，用新洗涤液洗涤后置于磁场中，静置3‑5min后弃...

【技术特征摘要】
1.一种胎盘血造血干细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采集胎盘血，加入等体积的稀释液进行稀释，得胎盘血稀释液，接着向胎盘血稀释液中加入质量百分数为4-8％的沉淀液进行沉淀，然后离心，弃除上清液，得沉淀，向沉淀中加入重悬液，混匀，然后再加入分离液，离心，取云雾层，向云雾层中加入重悬液，混匀，离心，得单个核细胞，向单个核细胞中加入重悬液，得细胞重悬液，细胞重悬液中单个核细胞密度为1-2×108个/mL；(2)向细胞重悬液中加入CD34+抗体，混匀，室温下孵育10-20min，然后加入CD34+免疫磁珠，混匀，室温下孵育10-20min，用新洗涤液洗涤后置于磁场中，静置3-5min后弃去上清液，得造血干细胞CD34+细胞；其中，CD34+抗体加入量为80-100μL/mL，CD34+免疫磁珠加入量为40-60μL/mL细胞重悬液；(3)将造血干细胞CD34+细胞接种于胎盘血造血干细胞培养基中，使造血干细胞CD34+细胞密度为1-3×105个/mL，置于37℃，5％CO2饱和湿度培养箱中培养5-7天，收获细胞。2.根据权利要求1所述的胎盘血造血干细胞的培养方法，其特征在于，所述稀释液为0.3-1.0wt％的氯化钠溶液；沉淀液为0.3-1.0wt％的甲基纤维素溶液；重悬液为浓度为12-16％的人AB血浆；分离液为密度为1.075-1.085g/mL聚乙烯吡咯烷酮处理的硅胶颗粒混悬液；细胞洗涤液为添加有1.5-2.0％FBS和0.01-0.03％EDTA的PBS溶液。3.根据权利要求1所述的胎盘血造血干细胞的培养方法，其特征在于，所述胎盘血造血干细胞培养基包括基础培养基和添加剂，按终浓度计，添加剂包括以下含量的组分：海藻糖60-80ng/mL、维生素C50-65ng/mL、小蘖碱1-3mg/mL、千金藤碱30-50μmol/mL、第一细胞因子缓释球体1.2-2.5mg/mL、第二细胞因子缓释球体15-30mg/mL、氯化钠3-8mg/mL、谷胱甘肽20-30mg/mL、透明质酸5-10μg/mL、葡萄籽提取物2-5mg/mL、人参皂苷6-12mg/mL和银耳多糖5-10mg/mL。4.根据权利要求3所述的胎盘血造血干细胞的培养方法，其特征在于，所述胎盘血造血干细胞培养基包括基础培养基和添加剂，按终浓度计，添加剂包括以下含量的组分：海藻糖70ng/mL、维生素C55ng/mL、小蘖碱2mg/mL、千金藤碱38μmol/mL、第一细胞因子缓释球体2.0mg/mL、第二细胞因子缓释球体22mg/mL、氯化钠4mg/mL、谷胱甘肽25mg/mL、透明质酸6μg/mL、葡萄籽提取物3mg/mL、人参皂苷7mg/mL和银耳多糖6mg/mL。5.根据权利要求3或4所述的胎盘血造血干细胞的培养方法，其特征在于，所述基础培养基为DMEM培养基。6.根据权利要求3或4所述的胎盘血造血干细胞的培养方法，其特征在于，所述第一细胞因子缓释球体通过以下方法制备得到：...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵翔，宋彩霞，曹玉昊，叶劲涛，王仁杰，黄启程，邱阳，李国焱，唐玲，胡小东，
申请(专利权)人：重庆金时代生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50