本发明专利技术公开了一种腰果再生体系构建的方法，腰果又名槚如树。属漆树科，常年乔木，在印尼、马来西亚、斯里兰卡、印度有种栽培，我国南方各省也有栽培成功的，人类栽培也有百年历史，属世界“四大干果”之一。本发明专利技术涉及腰果的组织培养快速繁殖方法，以腰果为最初外植体，通过无菌体系建立、初代培养、丛生芽增殖培养、丛生芽壮苗培养、试管苗生根以及试管苗驯化移栽等过程建立了腰果的再生体系，为腰果优质种源的快速繁殖提供生产方法。
【技术实现步骤摘要】
一种腰果再生体系的构建方法
本专利技术涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种腰果再生体系构建的方法。
技术介绍
腰果为又名槚如树，属漆树科，常年乔木，高可达12米，具乳汁。单叶，互生，长圆状卵形或倒卵形，革质，长10~20厘米，宽5~10厘米，无毛。大形圆锥花序，被锈色毛。花黄色，含一胚珠。坚果肾形，两附则压扁，长约2.5厘米，有坚硬的含苦树脂的外果皮，里面包含着油质的可食种子；果梗膨大形成大而肉质的梨状构造（假果），长5~9厘米，熟时亮黄色或红色。膨大果梗味酸甜，可食或酿酒，坚果种子味香可炒食，通称腰果；果壳榨油，可制绝缘油漆、防水纸。在印尼、马来西亚、斯里兰卡、印度有种栽培，我国南方各省也有栽培成功的，人类栽培也有百年历史，属世界“四大干果”之一。目前，腰果主要依靠种子繁殖方式进行种苗生产，存在繁殖周期长、效率低、繁殖系数低等问题，尚未形成健全的产业化生产机制。近年来，由于腰果需求量逐渐增加，野生资源逐渐减少，其种子本身又具深度休眠特性，自然繁殖率普遍较低。因此，非常有必要建立一套完整的腰果组织培养快繁体系。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种腰果再生体系构建的方法，本专利技术以腰果为最初外植体，通过无菌体系建立、初代培养、丛生芽增殖培养、丛生芽壮苗培养、试管苗生根以及试管苗驯化移栽等过程建立了腰果的再生体系，为腰果优质种源的快速繁殖提供生产方法，进而实现了本专利技术的目的。本专利技术的一种腰果再生体系构建的方法，包括以下的工艺步骤：步骤1,无菌体系建立：选取成熟饱满、完整无病虫害的腰果种子，在自来水下初步清洗干净,种子以0.1%～0.5%高锰酸钾溶液浸泡6h，直至高锰酸钾溶液的颜色变浅至粉红色，经自来水冲洗干净后在75%乙醇溶液中消毒10min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸沥干，人工去外种皮，接种到萌发培养基上进行启动培养；萌发培养基为：3/4B5+0.8mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+8.8%蔗糖+0.9%琼脂+2.2%活性炭，pH值为5.9;步骤2,初代培养：将无菌体系培养的萌发子叶未脱落的无菌苗接种到初代培养基上进行培养，接种后先在24℃条件下全暗培养19天，然后置于每天光照21小时，光照强度为2900lx，培养温度为24℃的条件下培养，40天转接一次；初代培养基为：B5+4mg/L6-BA+1.5mg/L2,4-D+2.5%蔗糖+0.9%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.9;步骤3,丛生芽增殖培养：将初代培养的无菌苗无顶芽长度为5cm的茎段接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在24℃条件下全暗培养19天，然后置于每天光照21小时，光照强度为2900lx，培养温度为24℃的条件下培养，46天转接一次；增殖培养基为：MS+2mg/LKT+1mg/LNAA+4mg/L6-BA+4.8%蔗糖+0.9%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.9;步骤4,丛生芽壮苗培养：将丛生芽增殖得到的不定芽，切除基部少量愈伤组织，去除底部叶片后接种到壮苗培养基上进行壮苗培养，接种后先在24℃条件下全暗培养19天，然后置于每天光照20小时，光照强度为2800lx，培养温度为24℃的条件下培养，41天转接一次；壮苗培养基为MS+0.8mg/LNAA+1.3mg/L6-BA+4.8%蔗糖+0.6%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.9;步骤5,试管苗生根：将长至5cm的,叶片数不少于8片，植株较健壮的无根苗分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在24℃条件下全暗培养19天，然后置于每天光照20小时，光照强度为3500lx，培养温度为24℃的条件下培养至生根；生根培养基为1/2MS+0.8mg/LNAA+3.8%蔗糖+1.0%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.9。步骤6,试管苗驯化移栽：将长至3cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗11天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由黄沙土和火碳泥=3：1混合成的基质中并定植于大田中。与现有技术相比本专利技术的优点是：本专利技术克服了腰果组织培养中存在的污染率高、褐化率高、生根困难、移栽成活率低等问题，构建了腰果再生体系，从而促进了腰果的商业化进程。具体实施方式以下实施例是对本专利技术的进一步说明，不是对本专利技术的限制。实施例1：（1）无菌体系建立：选取成熟饱满、完整无病虫害的腰果种子，在自来水下初步清洗干净。种子以0.1%高锰酸钾溶液浸泡4h，直至高锰酸钾溶液的颜色变浅至粉红色，经自来水冲洗干净后在75%乙醇溶液中消毒9min，无菌水冲洗5次，无菌滤纸沥干，人工去外种皮，接种到萌发培养基上进行启动培养。所述萌发培养基为3/4B5+0.5mg/L6-BA+0.4mg/LNAA4.5%蔗糖+0.4%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.6。（2）初代培养：将无菌体系培养的萌发子叶未脱落的无菌苗接种到初代培养基上进行培养，接种后先在24℃条件下全暗培养10天，然后置于每天光照15小时，光照强度为2800lx，培养温度为24℃的条件下培养，31天转接一次。所述初代培养基为B5+5mg/L6-BA+1.5mg/L2,4-D+2.8%蔗糖+0.5%琼脂+0.06%活性炭，pH值为5.6。（3）丛生芽增殖培养：将初代培养的无菌苗无顶芽长度为4cm的茎段接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在24℃条件下全暗培养15天，然后置于每天光照20小时，光照强度为2800lx，培养温度为24℃的条件下培养，41天转接一次。所述增殖培养基为MS+2mg/LKT+2mg/LNAA+3mg/L6-BA+3.6%蔗糖+0.8%琼脂+0.05%活性炭，pH值为5.6。（4）丛生芽壮苗培养：将丛生芽增殖得到的不定芽，切除基部少量愈伤组织，去除底部叶片后接种到壮苗培养基上进行壮苗培养，接种后先在24℃条件下全暗培养15天，然后置于每天光照20小时，光照强度为2800lx，培养温度为24℃的条件下培养，31天转接一次。所述壮苗培养基为MS+0.6mg/LNAA+0.6mg/L6-BA+3.5%蔗糖+0.3%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.6。（5）试管苗生根：将长至6cm的,叶片数不少于8片，植株较健壮的无根苗分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在24℃条件下全暗培养20天，然后置于每天光照18小时，光照强度为2800lx，培养温度为28℃的条件下培养至生根，生根率达到91%。所述生根培养基为1/2MS+0.6mg/LNAA+2.8%蔗糖+0.56%琼脂+0.4%活性炭，pH值为5.6。（6）试管苗驯化移栽：将长至10cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗10天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由黄沙土和火碳泥=2：1混合成的基质中并定植于大田中，成活率达95%以上。实施例2：（1）无菌体系建立：选取成熟饱满、完整无病虫害的腰果种子，在自来水下初步清洗干净。种子以0.3%高锰酸钾溶液浸泡3h，直至高锰酸钾溶液的颜色变浅至粉红色，经自来水冲洗干净后在75%乙醇溶液中消毒5min，无菌水冲洗3次，无菌滤纸沥干，人工去外种皮，接种到萌发培养基上进行启动培养。所述萌发培养基为3/4B5+0.6mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+3.8%蔗糖+0.5本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种腰果再生体系构建的方法，其特征在于包括以下工艺步骤： 步骤1,无菌体系建立：选取成熟饱满、完整无病虫害的腰果种子，在自来水下初步清洗干净,种子以0.1%～0.5%高锰酸钾溶液浸泡6h，直至高锰酸钾溶液的颜色变浅至粉红色，经自来水冲洗干净后在75%乙醇溶液中消毒10min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸沥干，人工去外种皮，接种到萌发培养基上进行启动培养；萌发培养基为：3/4B5 + 0.8mg/L 6‑BA+0.3mg/L NAA +8.8%蔗糖+0.9%琼脂+2.2%活性炭，pH值为5.9;步骤2,初代培养：将无菌体系培养的萌发子叶未脱落的无菌苗接种到初代培养基上进行培养，接种后先在24℃条件下全暗培养19天，然后置于每天光照21小时，光照强度为2900lx，培养温度为24℃的条件下培养，40天转接一次；初代培养基为：B5+4mg/L 6‑BA+1.5mg/L 2,4‑D+2.5%蔗糖+0.9%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.9;步骤3,丛生芽增殖培养：将初代培养的无菌苗无顶芽长度为5cm的茎段接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在24℃条件下全暗培养19天，然后置于每天光照21小时，光照强度为2900lx，培养温度为24℃的条件下培养，46天转接一次；增殖培养基为：MS+2mg/L KT+1mg/L NAA+4mg/L 6‑BA+4.8%蔗糖+0.9%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.9;步骤4,丛生芽壮苗培养：将丛生芽增殖得到的不定芽，切除基部少量愈伤组织，去除底部叶片后接种到壮苗培养基上进行壮苗培养，接种后先在24℃条件下全暗培养19天，然后置于每天光照20小时，光照强度为2800lx，培养温度为24℃的条件下培养，41天转接一次；壮苗培养基为MS+0.8mg/L NAA+1.3mg/L 6‑BA+4.8%蔗糖+0.6%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.9;步骤5,试管苗生根：将长至5cm的,叶片数不少于8片，植株较健壮的无根苗分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在24℃条件下全暗培养19天，然后置于每天光照20小时，光照强度为3500lx，培养温度为24℃的条件下培养至生根；生根培养基为1/2MS+0.8mg/L NAA+3.8%蔗糖+1.0%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.9；步骤6,试管苗驯化移栽：将长至3cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗11天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由黄沙土和火碳泥=3：1混合成的基质中并定植于大田中。...
【技术特征摘要】
1.一种腰果再生体系构建的方法，其特征在于包括以下工艺步骤：步骤1,无菌体系建立：选取成熟饱满、完整无病虫害的腰果种子，在自来水下初步清洗干净,种子以0.1%～0.5%高锰酸钾溶液浸泡6h，直至高锰酸钾溶液的颜色变浅至粉红色，经自来水冲洗干净后在75%乙醇溶液中消毒10min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸沥干，人工去外种皮，接种到萌发培养基上进行启动培养；萌发培养基为：3/4B5+0.8mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+8.8%蔗糖+0.9%琼脂+2.2%活性炭，pH值为5.9;步骤2,初代培养：将无菌体系培养的萌发子叶未脱落的无菌苗接种到初代培养基上进行培养，接种后先在24℃条件下全暗培养19天，然后置于每天光照21小时，光照强度为2900lx，培养温度为24℃的条件下培养，40天转接一次；初代培养基为：B5+4mg/L6-BA+1.5mg/L2,4-D+2.5%蔗糖+0.9%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.9;步骤3,丛生芽增殖培养：将初代培养的无菌苗无顶芽长度为5cm的茎段接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在24℃条件下全暗培养19天，然后置于每天光照21小时，光照强度为2900lx，培养温度为24℃的条件下培养，46...
【专利技术属性】
技术研发人员：王小宇，王露，
申请(专利权)人：广西玉林玖旺农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广西,45
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