一种三七毛状根的扩大培养以及三七皂苷的积累方法技术

本发明专利技术提供了一种三七毛状根的扩大培养以及三七皂苷的积累方法，该方法包括如下步骤：（1）毛状根的活化；（2）一级摇瓶培养；（3）二级摇瓶培养；（4）低温胁迫和等离子体辐照处理；（5）生物反应器培养。本发明专利技术通过对影响三七毛状根生长和次生代谢产物积累的主要因素的研究，摸索出了三七毛状根扩大培养的最优条件；通过对三七毛状根种子进行低温胁迫处理和等离子体辐照处理，并结合特定的培养基，达到促进三七毛状根生长和代谢，从而提高三七皂苷含量的目的，为三七毛状根的规模化生产以及三七皂苷的获得提供新途径。

A Method for Expanding Culture of Hairy Roots of Panax notoginseng and Accumulation of Panax notoginseng Saponins

The invention provides a method for expanding cultivation of hairy roots of Panax notoginseng and accumulation of Panax notoginseng saponins. The method comprises the following steps: (1) activation of hairy roots; (2) primary shaking flask culture; (3) secondary shaking flask culture; (4) low temperature stress and plasma irradiation treatment; (5) bioreactor culture. By studying the main factors affecting the growth of hairy roots and the accumulation of secondary metabolites of Panax notoginseng, the optimum conditions for the enlarged culture of hairy roots of Panax notoginseng were found. The hairy roots of Panax notoginseng seeds were treated by low temperature stress and plasma irradiation, and the growth and metabolism of hairy roots of Panax notoginseng were promoted, thus the content of Panax notoginseng saponins was increased OBJECTIVE To provide a new way for the large-scale production of hairy roots of Panax notoginseng and the acquisition of Panax notoginseng saponins.

【技术实现步骤摘要】
一种三七毛状根的扩大培养以及三七皂苷的积累方法
本专利技术属于药材植物生产
，具体涉及一种三七毛状根的扩大培养以及三七皂苷的积累方法。
技术介绍
三七（Panaxnotoginseng（Burk）F.H.Chen）为五加科人参属多年生草本植物，别名山膝、金不换、田三七、田漆、田七、参三七、血参、人参三七、滇三七，其干燥的根和根茎入药，是我国的传统珍贵药材。据文献记载，三七在我国已有近500年的药用历史，在早期的医学典籍《医门秘旨》、《跌损妙方》中已有记载。在《本草纲目》中记载三七可止血、散血、定痛。三七还是驰名中外的“云南白药”的主要成分。中医认为三七味苦微甘、性平，具有显著的活血化瘀、消肿定痛功效，咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹刺痛，跌扑肿痛。现代药理研究表明，三七中含有多种化学成分，如皂苷类、多糖类、黄酮类、炔类、醇类等，其中主要有效成分为三七皂苷。三七皂苷的药理作用包括抗炎、抗肿瘤、提高免疫力、保护心血管等，三七多糖主要具有提高免疫力的作用，三七黄酮具有改善血液循环、稳定心率、防止血栓等功效。三七醇类对小鼠肝肿瘤细胞有一定的抑制转移作用、对体外的氧化损伤模型本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种三七毛状根的扩大培养以及三七皂苷的积累方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（1）毛状根的活化将继代保存的三七毛状根接种到添加酵母提取物1.0g/L、葡萄糖20g/L的1/2MS液体培养基中，置于温度24‑26℃、转速70‑90r/min的摇床上避光培养6‑8d；（2）一级摇瓶培养将活化后的三七毛状根在无菌条件下用解剖刀切碎至2‑3mm，在装有种子培养基的500mL三角瓶中，按2.5%的接种量接入切碎的毛状根，置于温度24‑26℃、转速90‑110r/min的摇床上避光培养14‑18d，获得毛状根一级种子；（3）二级摇瓶培养在装有种子培养基的1L三角瓶中，按5.0%的接种量接入毛状根一...

【技术特征摘要】
1.一种三七毛状根的扩大培养以及三七皂苷的积累方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（1）毛状根的活化将继代保存的三七毛状根接种到添加酵母提取物1.0g/L、葡萄糖20g/L的1/2MS液体培养基中，置于温度24-26℃、转速70-90r/min的摇床上避光培养6-8d；（2）一级摇瓶培养将活化后的三七毛状根在无菌条件下用解剖刀切碎至2-3mm，在装有种子培养基的500mL三角瓶中，按2.5%的接种量接入切碎的毛状根，置于温度24-26℃、转速90-110r/min的摇床上避光培养14-18d，获得毛状根一级种子；（3）二级摇瓶培养在装有种子培养基的1L三角瓶中，按5.0%的接种量接入毛状根一级种子，置于24-26℃、转速90-110r/min的摇床上避光培养14-18d，获得毛状根二级种子；（4）低温胁迫和等离子体辐照处理将毛状根二级种子先放入5℃冰箱中低温胁迫处理1-2d，取出后再进行常压室温等离子体辐照处理45min；（5）生物反应器培养采用气升环流式生物反应器，向反应器中装入50-60%体积的毛状根培养基，采用原位高压蒸汽灭菌法进行灭菌，当反应器中的培养基冷却至室温后，用火焰接种法将经过处理的毛状根二级种子接入反应器中开始培养，培养18-22d后，利用装设于反应器的滤网过滤放出部分体积的培养液，并补加相同体积的新鲜毛状根培养基，继续培养23-25d后结束培养，培养过程中温度控制在24-26℃，通气量控制在0.05-0.07VVM。2.根据权利要求1所述的一种三七毛状根的扩大培养以及三七皂苷的积累方法，其特征在于，所述种子培养基的装液量为三角瓶体积的40%。3.根据权利要求1所述的一种三七毛状根的扩大培养以及三七皂苷的积累方法，其特征在于，所述种子培养基的配方为：1/2MS液体培养基+酵母提取物1.0g/L+腐胺2.1-2.5mg/L+水解酪蛋白0.4g/L+IBA0.5mg/L+N-苯基邻羧基苯甲酰胺0.1mg/L+葡萄糖20g/L+玉米汁34ml/L。4.根据权利要求1所述的一种三七毛状根的扩大培养以及三七皂苷的积累方法，其特征在于，所述常压室温等离子体处理的条件为：处理功率为120W，工作气体为99.99%高纯氦气，等离子体距辐照样品距离为3mm。5.根据权利要求1所述的一种三七毛状根的扩大培养以及三七皂苷的积累方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑淑红，
申请(专利权)人：郑淑红，
类型：发明
国别省市：云南,53