双特异性CD20-CD19-CAR及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种基于人源化CD20抗体和CD19抗体的新型双特异CD20‑CD19‑CAR载体的构建及应用。具体地，本发明专利技术提供了一种嵌合抗原受体CAR，所述CAR含有靶向CD19的scFv和靶向CD20的scFv，靶向CD19的scFv含有SEQ ID No.:8所示的重链可变区和SEQ ID No.:9所示的轻链可变区，靶向CD20的scFv含有SEQ ID No.:10所示的重链可变区和SEQ ID No.:11所示的轻链可变区。利用本发明专利技术构建的双特异CD20‑CD19‑CAR载体的CAR‑T细胞展现出非常好的体外杀伤效果。

【技术实现步骤摘要】
双特异性CD20-CD19-CAR及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种基于人源化CD20抗体和CD19抗体的新型双特异CD20-CD19-CAR载体的构建及应用。
技术介绍
近年来，嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法作为一种强大的新型过继免疫治疗技术，已显示出非常有效的治疗效果，被用于治疗多种实体和血液癌症，特别是针对B细胞淋巴细胞白血病和淋巴瘤的CD19-CAR-T疗法在临床上展现出非常好的治疗效果，另外，CD20也是B细胞肿瘤的一个理想靶点。但是单靶点治疗的缺点是当肿瘤细胞下调抗原表达后很容易产生复发，因此构建可以同时靶向双靶点的双特异性CAR-T可以降低肿瘤细胞的逃逸，降低复发率，此外，如果双特异CAR中的抗体序列都是人源化的序列，可以进一步降低双特异CAR-T的免疫原性。因此，本领域迫切需要开发一种基于人源化CD20抗体和CD19抗体的新型双特异CD20-CD19-CAR载体。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种基于人源化CD20抗体和CD19抗体的新型双特异CD20-CD19-CAR载体的构建及应用。在本专利技术的第一方面，提供了一种嵌合抗原受体CAR，所述CAR含有靶向CD19的scFv和靶向CD20的scFv，其中，所述靶向CD19的scFv含有SEQIDNo.:8所示的重链可变区和SEQIDNo.:9所示的轻链可变区，所述靶向CD20的scFv含有SEQIDNo.:10所示的重链可变区和SEQIDNo.:11所示的轻链可变区。QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGVSLPDYGVSWIRQPPGKALEWLAVIWGSETTYYNSALKSRLTISKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTTVTVSS(SEQIDNo.:8)EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQDISKYLNWYQQKPGQAPRLLIYHTSRLHSGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDIAVYYCQQGNTLPYTFGQGTKLEI(SEQIDNo.:9)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYNMHWVRQTPGQRLEWMGAIYPGNGDTSYNQKFKGRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGQGTTVTVS(SEQIDNo.:10)DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASSSVSYIHWYQQKPGKAPKLLIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTSFTLTISSLQPEDFATYYCQQWTSNPPTFGGGTKVEIKRTV(SEQIDNo.:11)在另一优选例中，所述CAR的结构如下式I所示：L-scFv1-I-scFv2-H-TM-C-CD3ζ(I)式中，各“-”独立地为连接肽或肽键；L为任选的信号肽序列；I为柔性接头；H为任选的铰链区；TM为跨膜结构域；C为共刺激信号分子；CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列；scFv1和scFv2两者中一个为靶向CD19的抗原结合结构域，另一个为靶向CD20的抗原结合结构域。在另一优选例中，所述的scFv1为靶向CD20的抗原结合结构域，所述scFv2为靶向CD19的抗原结合结构域。在另一优选例中，所述的scFv1和scFv2可以是各自独立的，也可以是串联的结构。在另一优选例中，L的序列如SEQIDNO.:1所示。MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP(SEQIDNo.:1)在另一优选例中，H的序列如SEQIDNO.:2所示。ESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQIDNo.:2)在另一优选例中，TM的序列包括源于ICOS的跨膜区，优选地TM的序列如SEQIDNO.:3所示。WLPIGCAAFVVVCILGCILICWL(SEQIDNo.:3)在另一优选例中，所述共刺激信号分子包括ICOS来源的共刺激信号分子，和/或4-1BB来源的共刺激信号分子。在另一优选例中，所述ICOS来源的共刺激信号分子的氨基酸序列如SEQIDNO.:4所示。TKKKYSSSVHDPNGEYMFMRAVNTAKKSRLTDVTL(SEQIDNo.:4)在另一优选例中，所述4-1BB来源的共刺激信号分子的氨基酸序列如SEQIDNO.:5所示。KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL(SEQIDNo.:5)在另一优选例中，所述CD3ζ的序列如SEQIDNO.:6所示。RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQIDNo.:6)在另一优选例中，所述嵌合抗原受体的序列如SEQIDNO.:7所示。MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYNMHWVRQTPGQRLEWMGAIYPGNGDTSYNQKFKGRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGQGTTVTVSGGGGSGGGGSGGGGSDIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASSSVSYIHWYQQKPGKAPKLLIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTSFTLTISSLQPEDFATYYCQQWTSNPPTFGGGTKVEIKRTVGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGVSLPDYGVSWIRQPPGKALEWLAVIWGSETTYYNSALKSRLTISKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQDISKYLNWYQQKPGQAPRLLIYHTSRLHSGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDIAVYYCQQGNTLPYTFGQGTKLEIESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种嵌合抗原受体CAR，其特征在于，所述CAR含有靶向CD19的scFv和靶向CD20的scFv，其中，所述靶向CD19的scFv含有SEQ ID No.:8所示的重链可变区和SEQ ID No.:9所示的轻链可变区，所述靶向CD20的scFv含有SEQ ID No.:10所示的重链可变区和SEQ ID No.:11所示的轻链可变区。

【技术特征摘要】
1.一种嵌合抗原受体CAR，其特征在于，所述CAR含有靶向CD19的scFv和靶向CD20的scFv，其中，所述靶向CD19的scFv含有SEQIDNo.:8所示的重链可变区和SEQIDNo.:9所示的轻链可变区，所述靶向CD20的scFv含有SEQIDNo.:10所示的重链可变区和SEQIDNo.:11所示的轻链可变区。2.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述CAR的结构如下式I所示：L-scFv1-I-scFv2-H-TM-C-CD3ζ(I)式中，各“-”独立地为连接肽或肽键；L为任选的信号肽序列；I为柔性接头；H为任选的铰链区；TM为跨膜结构域；C为共刺激信号分子；CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列；scFv1和scFv2两者中一个为靶向CD19的抗原结合结构域，另一个为靶向CD20的抗原结合结构域。3.一种嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)，其特征在于，所述CAR-T细胞表达如权利要求1所述的嵌合抗原受体CAR。4.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码如权利要求1所述的嵌合抗原受体。5.一种载体，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨林，游凤涛，
申请(专利权)人：博生吉医药科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32