一种CD4辅助性T细胞表位融合肽及其疫苗制造技术

本发明专利技术提供了一种CD4辅助性T细胞的表位融合肽、其编码核酸以及包含其的免疫组合物。所述表位融合肽包含巨细胞病毒表位和流感病毒表位。本发明专利技术提供的表位融合肽能大幅度提高目的免疫原，尤其是弱免疫原的细胞免疫应答水平，是克服免疫系统对抗原免疫耐受性，尤其是肿瘤抗原或感染相关抗原的有效手段，适用于高效增强疫苗的效力。

【技术实现步骤摘要】
一种CD4辅助性T细胞表位融合肽及其疫苗
本专利技术属于分子生物学和免疫学领域。具体地，本专利技术涉及一种CD4辅助性T细胞表位融合肽，尤其涉及包含该表位融合肽的疫苗及其应用。
技术介绍
T辅助细胞(Th细胞)是一种在免疫系统中起重要作用的T细胞，特别是在适应性免疫系统中。它们通过释放T细胞细胞因子来帮助其他免疫细胞的活性。这些细胞有助于抑制或调节免疫反应。它们在B细胞抗体类别的转换、细胞毒性T细胞的活化和生长以及吞噬细胞如巨噬细胞的杀菌活性最大化中是必需的。成熟Th细胞表达蛋白CD4，称为CD4+T细胞。通常将这样的CD4+T细胞作为免疫系统内的辅助T细胞进行预定义的处理。例如，当抗原呈递细胞在II类MHC上表达抗原时，CD4+细胞将通过细胞与细胞相互作用的组合(例如CD40(蛋白质)和CD40L)和细胞因子来帮助这些细胞。可以从HIV(一种主要感染CD4+T细胞的病毒)中看到辅助T细胞的重要性。在艾滋病毒感染的晚期阶段，功能性CD4+T细胞的丧失导致被称为获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的感染症状阶段。当血液或其他体液早期发现HIV病毒时，连续治疗可能会延迟发生这种情况的时间。如果发生艾滋病，治疗也可以更好地管理艾滋病的过程。还有其他罕见的疾病，如淋巴细胞减少症，导致CD4+T细胞的缺失或功能障碍。这些疾病产生类似的症状，其中许多是致命的。抗原表位(antigenicepitope)，简称“表位”(epitope)，也称为“抗原决定簇”(antigenicdeterminant)，是指抗原表面上决定抗原特异性的化学基团。抗原表位可被免疫系统(尤其是抗体、B细胞或者T细胞)所识别。抗体中能识别抗原表位的区域叫做“互补位”或“抗体决定簇”。尽管通常抗原表位是指外来蛋白质等物质的其中一部分，但只要能被自身免疫系统所识别的表位，也被归为抗原表位。蛋白质抗原的表位根据它们的结构以及与互补位的交互作用，被分为构象表位和线性表位这两种类型。其中构象表位由抗原氨基酸序列中的不连续部分组成，因此互补位和抗原表位的交互作用是基于表面的三维特征和形状，或者是抗原的三级结构。大部分的抗原表位都属于构象表位。与此相反，线性表位是由一段连续的抗原氨基酸序列构成，与抗原的交互作用的基础是其一级结构。T细胞表位(Tcellepitope)主要是由8-17氨基酸组成的短肽构成，出现在抗原呈递细胞(antigen-presentingcell,APC)上，这种抗原表位将会和主要组织相容性复合体(MHC)相结合形成复合体，并与相应的T细胞表位受体结合，从而活化T细胞，产生相应细胞免疫应答(Shimonkevitzetal.,1984；Babbittetal.,1985；Buusetal.,1986；TownsendandBodmer,1989)。与表位结合的MHC主要有两类分子，其中，I类主要组织相容性复合体所呈现的T细胞抗原表位通常是由8至11个氨基酸长度的多肽，而II类主要组织相容性复合体所呈现的T细胞抗原表位相对更长，由13-17个氨基酸组成。辅助T细胞表位(Thepitope，即Th表位)是指T细胞表位中的，与MHC分子结合形成的复合体能被CD4辅助性T细胞受体识别的一类T细胞表位。Th表位主要与存在于由主要组织相容性复合体(MHC)的II类基因编码的抗原呈递细胞(antigen-presentingcell,APC)表面上的分子结合。然后，II类分子和肽表位的复合物被T辅助淋巴细胞表面上的特异性T细胞受体(TCR)识别。以这种方式，在MHC分子的环境中呈现抗原表位的T细胞可以被激活，并为B淋巴细胞分化提供必要的信号。传统上，肽免疫原的辅助T细胞表位的来源是肽共价偶联的载体蛋白，但是该偶联过程可引入其他问题，例如在偶联过程中抗原决定簇的修饰和以针对肽的抗体为代价的针对载体的抗体的诱导(Schutze,M.P.,Leclerc,C.Jolivet,M.Audibert,F.Chedid,L.Carrier-inducedepitopicsuppression,amajorissueforfuturesyntheticvaccines.JImmunol.1985,135,2319-2322；DiJohn,D.,Torrese,J.R.Murillo,J.Herrington,D.A.etal.Effectofprimingwithcarrieronresponsetoconjugatevaccine.TheLancet.1989,2,1415-1416)。此外，在制备中使用无关蛋白引入质量控制问题。合适的载体蛋白的选择在设计肽疫苗时非常重要，其选择受到其大规模生产的毒性和可行性等因素的限制。这种方法还有其他限制，包括可偶联的肽负载的大小和可以安全施用的载体的剂量(Audibert,F.a.C.,L.1984.Modernapproachestovaccines.Molecularandchemicalbasisofvirusvirulenceandimmunogenicity.,ColdSpringHarborLaboratory,NewYork.)。虽然载体分子允许诱导强的免疫应答，但它们也与不利影响相关，例如抑制抗肽抗体应答(Herzenberg,L.A.andTokuhisa,T.1980.Carrier-primingleadstohapten-specificsuppression.Nature285:664；Schutze,M.P.,Leclerc,C.,Jolivet,M.,Audibert,F.,andChedid,L.1985.Carrier-inducedepitopicsuppression,amajorissueforfuturesyntheticvaccines.JImmunol135:2319；Etlinger,H.M.,Felix,A.M.,Gillessen,D.,Heimer,E.P.,Just,M.,Pink,J.R.,Sinigaglia,F.,Sturchler,D.,Takacs,B.,Trzeciak,A.,andet,al.1988.Assessmentinhumansofasyntheticpeptide-basedvaccineagainstthesporozoitestageofthehumanmalariaparasite,Plasmodiumfalciparum.JImmunol140:626)。一般来说，免疫原必须包含辅助T细胞表位，除了将被表面Ig识别的表位或存在于细胞毒性T细胞上的受体之外。应该意识到，这些类型的表位可能是非常不同的。对于B细胞表位，构象是重要的，因为B细胞受体直接与天然免疫原结合。相比之下，由T细胞识别的表位不依赖于表位的构象完整性，并且由针对CTL的约9个氨基酸的短序列和针对辅助T细胞的稍长的序列(长度限制较小)组成。这些表位的唯一要求是它们可以分别容纳在I类或II类分子的结合裂口中，并且然后复合物能够与T细胞受体结合。II类分子的结合位点在两端是开放的，允许与报道的短至8个氨基酸残基(Fahrer,A.M.,Geysen,H.M.,Whi本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CD4辅助性T细胞的表位融合肽，其包含选自巨细胞病毒表位和/或流感病毒表位。

【技术特征摘要】
1.一种CD4辅助性T细胞的表位融合肽，其包含选自巨细胞病毒表位和/或流感病毒表位。2.根据权利要求1所述的表位融合肽，所述表位融合肽包含选自SEQIDNO：1-10所示的巨细胞病毒表位中的一种或多种，和/或选自SEQIDNO：11-23所示的流感病毒表位中的一种或多种。3.根据权利要求1或2所述的表位融合肽，所述表位融合肽由选自SEQIDNO：1-10所示的巨细胞病毒表位中的一种或多种，和/或选自SEQIDNO：11-23所示的流感病毒表位中的一种或多种组成；优选地，所述表位融合肽由5个或10个巨细胞病毒表位和/或由8个或13个流感病毒表位组成，例如SEQIDNO:34或44所示的表位融合肽；优选地，所述表位融合肽由13个流感病毒表位组成，例如SEQIDNO:48所示的表位融合肽。4.根据权利要求1或3任一项所述的表位融合肽，所述表位融合肽诱导体液或细胞免疫应答。5.一种融合蛋白，其包含权利要求1-4任一项所述的表位融合肽和目的免疫原。6.根据权利要求5所述的融合蛋白，其中，所述目的免疫原选自肽、抗原、半抗原、碳水化合物、蛋白质、核酸、过敏原、病毒或病毒的一部分、细菌、寄生虫或其它完整的微生物；优选地，所述抗原为肿瘤抗原或感染相关免疫原；进一步优选地，所述肿瘤抗原选自肺癌抗原、睾丸癌抗原或黑色素瘤抗原中的一种或多种；优选地；所述肿瘤抗原选自LAGE抗原、MAGE抗原或NY-ESO-1抗原中的一种或多种；进一步优选地，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐建青，黄杨，张晓燕，
申请(专利权)人：苏州工业园区唯可达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32