【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学和免疫学领域。具体地，本专利技术涉及一种包含编码cd4辅助性t细胞表位融合肽的多核苷酸的重组病毒载体、包含其的免疫组合物以及用途。
技术介绍
1、t辅助细胞(th细胞)是一种在免疫系统中起重要作用的t细胞，特别是在适应性免疫系统中。它们通过释放t细胞细胞因子来帮助其他免疫细胞的活性。这些细胞有助于抑制或调节免疫反应。它们在b细胞抗体类别的转换、细胞毒性t细胞的活化和生长以及吞噬细胞如巨噬细胞的杀菌活性最大化中是必需的。
2、成熟th细胞表达蛋白cd4，称为cd4+t细胞。通常将这样的cd4+t细胞作为免疫系统内的辅助t细胞进行预定义的处理。例如，当抗原呈递细胞在ii类mhc上表达抗原时，cd4+细胞将通过细胞与细胞相互作用的组合(例如cd40(蛋白质)和cd40l)和细胞因子来帮助这些细胞。
3、可以从hiv(一种主要感染cd4+t细胞的病毒)中看到辅助t细胞的重要性。在艾滋病毒感染的晚期阶段，功能性cd4+t细胞的丧失导致被称为获得性免疫缺陷综合征(aids)的感染症状阶段。当血液或其他体液早期发现hiv病毒时，连续治疗可能会延迟发生这种情况的时间。如果发生艾滋病，治疗也可以更好地管理艾滋病的过程。还有其他罕见的疾病，如淋巴细胞减少症，导致cd4+t细胞的缺失或功能障碍。这些疾病产生类似的症状，其中许多是致命的。
4、抗原表位(antigenic epitope)，简称“表位”(epitope)，也称为“抗原决定簇”(antigenic determinant)，是指
5、蛋白质抗原的表位根据它们的结构以及与互补位的交互作用，被分为构象表位和线性表位这两种类型。其中构象表位由抗原氨基酸序列中的不连续部分组成，因此互补位和抗原表位的交互作用是基于表面的三维特征和形状，或者是抗原的三级结构。大部分的抗原表位都属于构象表位。与此相反，线性表位是由一段连续的抗原氨基酸序列构成，与抗原的交互作用的基础是其一级结构。
6、t细胞表位(t cell epitope)主要是由8-17氨基酸组成的短肽构成，出现在抗原呈递细胞(antigen-presenting cell,apc)上，这种抗原表位将会和主要组织相容性复合体(mhc)相结合形成复合体，并与相应的t细胞表位受体结合，从而活化t细胞，产生相应细胞免疫应答(shimonkevitz et al.,1984；babbitt et al.,1985；buus et al.,1986；townsend and bodmer,1989)。与表位结合的mhc主要有两类分子，其中，i类主要组织相容性复合体所呈现的t细胞抗原表位通常是由8至11个氨基酸长度的多肽，而ii类主要组织相容性复合体所呈现的t细胞抗原表位相对更长，由13-17个氨基酸组成。
7、辅助t细胞表位(th epitope，即th表位)是指t细胞表位中的，与mhc分子结合形成的复合体能被cd4辅助性t细胞受体识别的一类t细胞表位。th表位主要与存在于由主要组织相容性复合体(mhc)的ii类基因编码的抗原呈递细胞(antigen-presenting cell,apc)表面上的分子结合。然后，ii类分子和肽表位的复合物被t辅助淋巴细胞表面上的特异性t细胞受体(tcr)识别。以这种方式，在mhc分子的环境中呈现抗原表位的t细胞可以被激活，并为b淋巴细胞分化提供必要的信号。传统上，肽免疫原的辅助t细胞表位的来源是肽共价偶联的载体蛋白，但是该偶联过程可引入其他问题，例如在偶联过程中抗原决定簇的修饰和以针对肽的抗体为代价的针对载体的抗体的诱导(schutze,m.p.,leclerc,c.jolivet,m.audibert,f.chedid,l.carrier-induced epitopic suppression,a major issue forfuture synthetic vaccines.j immunol.1985,135,2319-2322；dijohn,d.,torrese,j.r.murillo,j.herrington,d.a.et al.effect of priming with carrier on responseto conjugate vaccine.the lancet.1989,2,1415-1416)。此外，在制备中使用无关蛋白引入质量控制问题。合适的载体蛋白的选择在设计肽疫苗时非常重要，其选择受到其大规模生产的毒性和可行性等因素的限制。这种方法还有其他限制，包括可偶联的肽负载的大小和可以安全施用的载体的剂量(audibert,f.a.c.,l.1984.modern approaches tovaccines.molecular and chemical basis of virus virulence and immunogenicity.,cold spring harbor laboratory,new york.)。虽然载体分子允许诱导强的免疫应答，但它们也与不利影响相关，例如抑制抗肽抗体应答(herzenberg,l.a.and tokuhisa,t.1980.carrier-priming leads to hapten-specific suppression.nature 285:664；schutze,m.p.,leclerc,c.,jolivet,m.,audibert,f.,and chedid,l.1985.carrier-induced epitopic suppression,a major issue for future synthetic vaccines.jimmunol 135:2319；etlinger,h.m.,felix,a.m.,gillessen,d.,heimer,e.p.,just,m.,pink,j.r.,sinigaglia,f.,sturchler,d.,takacs,b.,trzeciak,a.,and et al.,1988.assessment in humans of a synthetic peptide-based vaccine against thesporozoite stage of the human malaria parasite,plasmodium falciparum.jimmunol 140:626)。
8、一般来说，免疫原必须包含辅助t细胞表位，除了将被表面ig识别的表位或存在于细胞毒性t细胞上的受体之外。应该意识到，这些类型的表位可能是非常不同的。对于b细胞表位，构象是重要的，因为b细胞受体直接与天然免疫原结合。相比之下，由t细胞识别的表位不依赖于表位的构象完整性，并且由针对ct本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组病毒载体，所述重组病毒载体包含编码肿瘤抗原的多核苷酸，所述肿瘤抗原选自LAGE抗原、MAGE抗原或NY-ESO-1抗原中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的重组病毒载体，其中，所述LAGE抗原为LAGE-1抗原；优选地，所述LAGE-1抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示；进一步优选地，所述LAGE-1抗原的编码核酸序列如SEQ ID NO:27或38所示；
3.根据权利要求1或2所述的重组病毒载体，其中，所述重组病毒载体还包含霍乱毒素B亚单位多肽；优选地，所述霍乱毒素B亚单位多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示；进一步优选地，所述霍乱毒素B亚单位多肽的编码核酸序列如SEQ ID NO:31或41所示。
4.根据权利要求1至3任一项所述的重组病毒载体，其中，所述肿瘤抗原包含LAGE-1抗原、MAGE-A3抗原和NY-ESO-1抗原；优选地，所述肿瘤抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO:59所示。
5.根据权利要求1至4任一项所述的重组病毒载体，其中，所述肿瘤抗原和霍乱毒素B亚单位多肽的氨基酸序列如
6.根据权利要求1至5任一项所述的重组病毒载体，其中，所述重组病毒是痘苗病毒载体，优选为复制型痘苗病毒载体，例如痘苗病毒天坛株，例如752-1株，或者为非复制型痘苗病毒载体，例如痘苗病毒减毒疫苗安卡拉株(Modified Vaccinia Ankara，MVA)。
7.一种免疫组合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1-6中任一项所述的重组病毒载体，以及药学上可接受的载体。
8.一种肿瘤疫苗，其包含治疗有效量的根据权利要求1-6中任一项所述的重组病毒载体，以及药学上可接受的载体。
9.一种药盒，其包含根据权利要求1-6中任一项所述的重组病毒载体、根据权利要求7所述的免疫组合物、根据权利要求8所述的肿瘤疫苗以及其使用说明。
10.根据权利要求1-6中任一项所述的重组病毒载体、根据权利要求7所述的免疫组合物、根据权利要求8所述的肿瘤疫苗在制备治疗或预防肿瘤的药物中的用途；优选地，所述肿瘤为恶性肿瘤；更优选地，所述恶性肿瘤为乳腺癌或结肠癌。
...【技术特征摘要】
1.一种重组病毒载体，所述重组病毒载体包含编码肿瘤抗原的多核苷酸，所述肿瘤抗原选自lage抗原、mage抗原或ny-eso-1抗原中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的重组病毒载体，其中，所述lage抗原为lage-1抗原；优选地，所述lage-1抗原的氨基酸序列如seq id no:24所示；进一步优选地，所述lage-1抗原的编码核酸序列如seq id no:27或38所示；
3.根据权利要求1或2所述的重组病毒载体，其中，所述重组病毒载体还包含霍乱毒素b亚单位多肽；优选地，所述霍乱毒素b亚单位多肽的氨基酸序列如seq id no:30所示；进一步优选地，所述霍乱毒素b亚单位多肽的编码核酸序列如seq id no:31或41所示。
4.根据权利要求1至3任一项所述的重组病毒载体，其中，所述肿瘤抗原包含lage-1抗原、mage-a3抗原和ny-eso-1抗原；优选地，所述肿瘤抗原的氨基酸序列如seq id no:59所示。
5.根据权利要求1至4任一项所述的重组病毒载体，其中，所述肿瘤抗原和霍乱毒...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐建青，黄杨，张晓燕，王璐，郜明泉，孙甲浩，
申请(专利权)人：苏州工业园区唯可达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。