多肽、其制备方法及抑制艾滋病病毒的用途技术

本发明专利技术提供了多肽、其制备方法及抑制艾滋病病毒的用途。多肽包含根据X‑W/A‑E/A‑A/E‑L/A‑X‑Y/A‑L/A‑W/A‑N/A‑L/A‑L/A‑Q/A‑Y/A‑W/A所示的氨基酸序列。还提供了编码多肽的核酸、包含所述核酸的载体、宿主、制备或使用方法及用途。还提供了包含多肽的融合蛋白、药物组合物或缀合物。

【技术实现步骤摘要】
多肽、其制备方法及抑制艾滋病病毒的用途
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及用于灭活艾滋病病毒的治疗剂。
技术介绍
据联合国艾滋病规划署(UNAIDS)提供的资料显示，从上世纪80年代被发现以来，人类免疫缺陷病毒(HIV)已经造成了累计超过七千万人被感染以及超过三千万人死亡，现在，每年仍有约两百万的新增感染病例出现。由于到目前为止仍没有治愈药物以及疫苗面世，所以艾滋病仍然是人类公共卫生领域的重大威胁。有效治疗一直是该领域研究的关注热点。高效联合抗逆转录病毒治疗(HAART)的出现已使HIV感染者发生AIDS的发病率和死亡大为降低，但现在临床使用的药物都还存在毒副作用强、易诱导抗药性病毒株等缺点。并且，它们均无法清除HIV潜伏库及治愈艾滋病，需终身使用，一旦停药艾滋病患者体内的病毒载量将会快速反弹。因此，研发靶向HIV新靶点、并可清除HIV潜伏细胞库从而治愈艾滋病的新型药物成为全球研究领域的热点及前沿。本专利技术提出的来源于HIV包膜蛋白gp41亚单位胞内段的多肽，靶向gp41更为保守的胞内段，是一个全新的抑制HIV靶点。同时，以前的艾滋病药物均作用于HIV感染靶细胞的过程中，不能靶向游离的HIV病毒。本专利技术提出的多肽能直接灭活HIV游离病毒，用于HIV的预防。更为重要的是现在提出的蛋白类灭活剂以及广谱中和抗体均只能中和HIV，仍无法杀灭HIV感染的细胞，特别是HIV潜伏感染的细胞，因此无法清除HIV潜伏库和治愈艾滋病。本专利技术提出一种具有灭活HIV病毒颗粒和杀灭HIV感染细胞(特别是被激活的HIV潜伏细胞)双功能的新型多肽类灭活剂，与HIV潜伏激活剂联用时，有希望通过当前国际上的热点策略-“ShockandKill”，达到清除HIV潜伏库治愈艾滋病的目的。
技术实现思路
本专利技术提供以下内容：本专利技术提供了多肽及其衍生物、立体异构体、或其盐，其特异性结合HIV包膜蛋白胞内段，优选是包含以SEQIDNO:28所示的氨基酸序列的慢病毒裂解肽-1LLP1(lentivirallyticpeptides-1)结构域。多肽破坏脂质双分子层，优选地HIV病毒颗粒包膜以及受HIV感染的宿主细胞膜，并且造成HIV病毒颗粒、HIV感染细胞以及激活的HIV潜伏细胞的裂解。提及多肽包括其衍生物、立体异构体、或其盐。在一个实施方案中，多肽包含根据以下通式所示的氨基酸序列：X-W/A-E/A-A/E-L/A-X-Y/A-L/A-W/A-N/A-L/A-L/A-Q/A-Y/A-W/A。在一个实施方案中，多肽包含以SEQIDNO:1所示的氨基酸序列：X-W-E-A-L-X-Y-L-W-N-L-L-Q-Y-W(式1)；其中X表示任何氨基酸，优选为G或A或与它们具有相似特性的氨基酸残基；符号“-”表示氨基酸残基之间的肽键，符号“/”表示所示的氨基酸能互换使用；优选地，多肽包含以SEQIDNO:2所示的氨基酸序列：GWEALKYLWNLLQYW；以SEQIDNO:3所示的氨基酸序列：AWEALKYLWNLLQYW；以SEQIDNO:4所示的氨基酸序列：GAEALKYLWNLLQYW；以SEQIDNO:5所示的氨基酸序列：GWAALKYLWNLLQYW；以SEQIDNO:6所示的氨基酸序列：GWEELKYLWNLLQYW；以SEQIDNO:7所示的氨基酸序列：GWEAAKYLWNLLQYW；以SEQIDNO:8所示的氨基酸序列：GWEALAYLWNLLQYW；以SEQIDNO:9所示的氨基酸序列：GWEALKALWNLLQYW；以SEQIDNO:10所示的氨基酸序列：GWEALKYAWNLLQYW；以SEQIDNO:11所示的氨基酸序列：GWEALKYLANLLQYW；以SEQIDNO:12所示的氨基酸序列：GWEALKYLWALLQYW；以SEQIDNO:13所示的氨基酸序列：GWEALKYLWNALQYW；以SEQIDNO:14所示的氨基酸序列：GWEALKYLWNLAQYW；以SEQIDNO:15所示的氨基酸序列：GWEALKYLWNLLAYW；以SEQIDNO:16所示的氨基酸序列：GWEALKYLWNLLQAW；以SEQIDNO:17所示的氨基酸序列：GWEALKYLWNLLQYA。优选地，所述多肽包含(1)与以SEQIDNO:1-17中任一种所示的氨基酸序列至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、93％、94％、95％相同的氨基酸序列或(2)以SEQIDNO:1-17中任一种所示的氨基酸序列中取代、添加、缺失或插入1个或多个，优选2、3、4或5个氨基酸残基的氨基酸序列，所述取代优选是保守氨基酸取代。序列骨架来源于HIV-1groupM包膜蛋白，位于其包膜蛋白的789-803位，属于其包膜内LLP3(lentivirallyticpeptides-3,aa789-815)结构域。在本专利技术中，多肽F9170包含式1骨架，具有灭活病毒以及感染细胞的作用。在一个实施方案中，衍生物选自：经马来酰亚胺修饰得到的衍生物；在氨基末端连接氨基端保护基和/或羧基末端连接羧基端保护基得到的衍生物；经蛋白质或聚乙二醇修饰得到的衍生物；在氨基末端和/或羧基末端连接寡肽或亲脂性基团或胆固醇得到的衍生物；或者用构象为D-型的氨基酸，人工修饰的氨基酸以及自然界存在的稀有氨基酸取代后获得的衍生物以提高多肽的生物利用度、稳定性和/或抗病毒活性。在一个实施方案中，氨基端保护基为乙酰基、氨基、马来酰基、琥珀酰基、叔丁氧羰基、或苄基或其他疏水基团，所述羧基端保护基为NH2、羧基、酰胺基、叔丁氧羰基或其他疏水性基团。在一个实施方案中，寡肽包含2-10个氨基酸，所述亲脂性基团是含有3-20个碳原子的脂肪酸链。另一方面，本专利技术提供了融合蛋白、药物组合物或缀合物。所述融合蛋白可以包含根据本专利技术的多肽或所述多肽的衍生物、立体异构体或盐和用于治疗或预防HIV感染的另一种蛋白质，或针对HIV包膜蛋白胞内段，优选地包含以SEQIDNO:28所示的氨基酸序列的慢病毒裂解肽-1LLP1结构域的抗体。药物组合物可以包含根据本专利技术的多肽或所述多肽的衍生物、立体异构体或盐和表2中列出的一种或多种HIV治疗剂或HIV潜伏细胞激活剂。缀合物可以包含根据本专利技术的多肽和载体蛋白。载体蛋白可以选自血清白蛋白、免疫球蛋白、铁蛋白、转铁蛋白、α-2-巨球蛋白、甲状腺素结合蛋白和类固醇结合蛋白。在一个实施方案中，融合蛋白或缀合物特异性结合HIV包膜蛋白胞内段，优选是包含以SEQIDNO:28所示的氨基酸序列的慢病毒裂解肽-1LLP1结构域，且优选破坏脂质双分子层，优选是HIV病毒颗粒包膜以及受HIV感染的宿主细胞膜，并且造成HIV病毒颗粒、HIV感染细胞以及激活的HIV潜伏细胞的裂解。另一方面，本专利技术提供了核苷酸序列，其编码根据本专利技术的多肽或所述多肽的衍生物、立体异构体或盐或融合蛋白。另一方面，本专利技术提供了载体，其包含根据本专利技术的核苷酸序列。另一方面，本专利技术提供了宿主细胞，其包含根据本专利技术的载体。另一方面，本专利技术提供了生成根据本专利技术的多肽或融合蛋白的方法，其包括：(1)将根据本专利技术的载体导入宿主细胞中；(2)在合适的培养基中培养所述宿主细胞；并且(3)收获并分离根据本专利技术的多肽或融合蛋白；或者本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.多肽，所述多肽包含以下通式所示的氨基酸序列：X‑W/A‑E/A‑A/E‑L/A‑X‑Y/A‑L/A‑W/A‑N/A‑L/A‑L/A‑Q/A‑Y/A‑W/A；优选以SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列：X‑W‑E‑A‑L‑X‑Y‑L‑W‑N‑L‑L‑Q‑Y‑W；其中X表示任何氨基酸，优选为G或A或与它们具有相似特性的氨基酸残基；符号“‑”表示氨基酸残基之间的肽键，符号“/”表示所示的氨基酸能互换使用，或所述多肽的衍生物、立体异构体或盐。

【技术特征摘要】
1.多肽，所述多肽包含以下通式所示的氨基酸序列：X-W/A-E/A-A/E-L/A-X-Y/A-L/A-W/A-N/A-L/A-L/A-Q/A-Y/A-W/A；优选以SEQIDNO:1所示的氨基酸序列：X-W-E-A-L-X-Y-L-W-N-L-L-Q-Y-W；其中X表示任何氨基酸，优选为G或A或与它们具有相似特性的氨基酸残基；符号“-”表示氨基酸残基之间的肽键，符号“/”表示所示的氨基酸能互换使用，或所述多肽的衍生物、立体异构体或盐。2.根据权利要求1所述的多肽，其包含以SEQIDNO:2所示的氨基酸序列：GWEALKYLWNLLQYW；以SEQIDNO:3所示的氨基酸序列：AWEALKYLWNLLQYW；以SEQIDNO:4所示的氨基酸序列：GAEALKYLWNLLQYW；以SEQIDNO:5所示的氨基酸序列：GWAALKYLWNLLQYW；以SEQIDNO:6所示的氨基酸序列：GWEELKYLWNLLQYW；以SEQIDNO:7所示的氨基酸序列：GWEAAKYLWNLLQYW；以SEQIDNO:8所示的氨基酸序列：GWEALAYLWNLLQYW；以SEQIDNO:9所示的氨基酸序列：GWEALKALWNLLQYW；以SEQIDNO:10所示的氨基酸序列：GWEALKYAWNLLQYW；以SEQIDNO:11所示的氨基酸序列：GWEALKYLANLLQYW；以SEQIDNO:12所示的氨基酸序列：GWEALKYLWALLQYW；以SEQIDNO:13所示的氨基酸序列：GWEALKYLWNALQYW；以SEQIDNO:14所示的氨基酸序列：GWEALKYLWNLAQYW；以SEQIDNO:15所示的氨基酸序列：GWEALKYLWNLLAYW；以SEQIDNO:16所示的氨基酸序列：GWEALKYLWNLLQAW；或以SEQIDNO:17所示的氨基酸序列：GWEALKYLWNLLQYA；或所述多肽的衍生物、立体异构体或盐，优选地，所述多肽包含(1)与以SEQIDNO:1-17中任一种所示的氨基酸序列至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、93％、94％或95％相同的氨基酸序列或(2)以SEQIDNO:1-17中任一种所示的氨基酸序列中取代、添加、缺失或插入1个或多个，优选2、3、4或5个氨基酸残基的氨基酸序列，所述取代优选是保守氨基酸取代，条件是所述多肽特异性结合HIV包膜蛋白胞内段，优选是包含以SEQIDNO:28所示的氨基酸序列的慢病毒裂解肽-1LLP1结构域，且优选破坏脂质双分子层，优选是HIV病毒颗粒包膜以及受HIV感染的宿主细胞膜，并且造成HIV病毒颗粒、HIV感染细胞以及激活的HIV潜伏细胞的裂解。3.根据权利要求1或2所述的多肽或所述多肽的衍生物、立体异构体或盐，其中所述衍生物选自：经马来酰亚胺修饰得到的衍生物；在氨基末端连接氨基端保护基和/或羧基末端连接羧基端保护基得到的衍生物；经蛋白质或聚乙二醇修饰得到的衍生物；在氨基末端和/或羧基末端连接寡肽或亲脂性基团或胆固醇得到的衍生物；或者用构象为D-型的氨基酸，人工修饰的氨基酸以及自然界存在的稀有氨基酸取代后获得的衍生物；其中优选地，所述氨基端保护基为乙酰基、氨基、马来酰基、琥珀酰基、叔丁氧羰基、或苄基或其他疏水基团，所述羧基端保护基为NH2、羧基、酰胺基、叔丁氧羰基或其他疏水性基团；优选地，所述寡肽包含2-10个氨基酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆路，姜世勃，王茜，苏珊，杨霞，
申请(专利权)人：山西锦波生物医药股份有限公司，复旦大学，
类型：发明
国别省市：山西,14