大规模制备制造技术

提供了大规模制备

【技术实现步骤摘要】
大规模制备164.88
°
三螺旋结构胶原蛋白生物方法


[0001]本专利技术涉及利用大规模生物发酵实现具有
164.88
°
三螺旋结构的胶原蛋白制备方法属于合成生物学

。

技术介绍

[0002]人有
28
种不同的胶原蛋白，胶原蛋白是人和动物体内含量最多的蛋白，占体内蛋白总量的
25
‑
30
％，约占体重的6％
。
胶原蛋白是皮肤
、
骨骼
、
牙齿
、
角膜
、
肌腱
、
韧带以及各种组织器官中存在的重要的结构蛋白，起支撑和保护机体组织的功能
。
胶原蛋白是细胞外基质的主要组分，其生物学活性主要表现在促进细胞粘附
、
生长分化
、
细胞信号通路的应答
、
血小板凝集
、
细胞和组织器官功能的维护和损伤修复等功能
。
胶原蛋白在空间结构上呈现出三股本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种构建表达胶原蛋白的酵母细胞的方法，其包括将重组表达载体导入酵母细胞中，其中重组表达载体包含编码胶原蛋白的多核苷酸，所述胶原蛋白包含以
SEQ ID No.1
所示的序列的重复单元，重复单元的数目是2‑
32
，重复单元是直接连接的；优选地，胶原蛋白是重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，优选
164.88
°
三螺旋结构胶原蛋白
。2.
根据权利要求1所述的方法，其中胶原蛋白包含
SEQ ID No.2
或3所示的氨基酸序列；优选地，多核苷酸包含
SEQ ID No.4
或5所示的核苷酸序列
。3.
根据权利要求1或2所述的方法，其中重组表达载体是酵母系统表达载体，优选为
pPICZ
α
A、pPIC9、pPIC9K、pHIL
‑
S1、
或
pYAM75P
载体
。4.
根据权利要求1‑3中任一项所述的方法，其中酵母是巴斯德毕赤酵母；优选是巴斯德毕赤酵母
X33、GS115、SMD1168、KM71
或
KM71H
菌株
。5.
根据权利要求1‑4中任一项所述的方法，其包括以下一个或多个步骤：
(1)
将多核苷酸插入表达载体，优选
pPiczal
α
A
表达载体的
NotI
和
XhoI
酶切位点之间，以得到重组表达质粒；
(2)
对重组表达质粒进行酶切，优选用
sac1
进行酶切；
(3)
对酶切后的重组表达质粒进行纯化；
(4)
通过电转化，将酶切后的重组表达质粒导入酵母细胞中
。6.
表达胶原蛋白的酵母细胞，其中所述胶原蛋白包含以
SEQ ID No.1
所示的序列的重复单元，重复单元的数目是2‑
32
，重复单元是直接连接的；酵母细胞是巴斯德毕赤酵母；优选是巴斯德毕赤酵母
X33、GS115、SMD1168、KM71
或
KM71H
...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玲玲，兰小宾，刘增耀，邓鹏军，张永健，刘欣，张晓波，王颖，杨霞，何振瑞，
申请(专利权)人：山西锦波生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：