人类免疫缺陷病毒重组蛋白制造技术

本申请公开了一种人类免疫缺陷病毒重组蛋白。本申请的人类免疫缺陷病毒重组蛋白其包含与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列具有至少85％的序列同一性的多肽，其中所述多肽包括与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列第53、85、98、105、109、111、132和133的八个位点相对应位点的氨基酸置换，优选的，所述多肽进一步包括与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列第106、120和139三个位点中的一个或多个相对应位点的氨基酸置换。本申请还涉及所述人类免疫缺陷病毒重组蛋白质的制备和用途。本申请的人类免疫缺陷病毒重组蛋白质能够应用于人类免疫缺陷病毒(HIV)的抗体检测，具有活性高、检出率高、特异性好等特点。

Recombinant human immunodeficiency virus recombinant protein

The present invention discloses a recombinant protein of human immunodeficiency virus. The amino acid sequence of the human immunodeficiency virus recombinant protein which contains ID NO:1 and SEQ shown with at least 85% polypeptide sequence identity, wherein the polypeptide consists of eight amino acid sequence shown in fifty-third, eighty-fifth, ninety-eighth, and SEQ ID NO:1 105, 109, 111, 132 and 133 relative should be the preferred sites of amino acid substitutions, the polypeptide further includes one or more corresponding sites of amino acid substitutions 106th, 120th amino acid sequence shown in ID NO:1 and SEQ and three loci in 139. The present application also relates to the preparation and use of recombinant proteins of the human immunodeficiency virus. The recombinant protein of human immunodeficiency virus can be used in human immunodeficiency virus (HIV) antibody detection, which has the characteristics of high activity, high detection rate and good specificity.

【技术实现步骤摘要】
人类免疫缺陷病毒重组蛋白
本专利技术涉及生物技术和医学领域，特别涉及人类免疫缺陷病毒(HIV)重组蛋白的生产和应用的生物技术和医学免疫诊断领域。
技术介绍
人类免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirus，HIV)引起的艾滋病在20世纪80年代发现以来，已传遍全球。据联合国艾滋病总署报告，截止2010年底，全球感染艾滋病人数达3700万。我国目前大约有HIV感染者70余万。HIV会破坏人体的免疫能力，导致免疫系统市区抵抗力，从而导致各种疾病和癌症在人体内生存，发展到最后导致艾滋病。迄今为止尚无有效药物及疫苗来治疗和预防艾滋病，因而HIV感染已成为当今全球威胁最严重的传染病及公共卫生问题。HIV病毒是带有包膜的RNA逆转录病毒，其单拷贝基因RNA全长约9.2-9.7Kb。HIV有三个主要结构基因：env、gag、pol，它们分别编码产生不同功能的蛋白质即抗原。HIV侵入机体后，一般在6周左右产生抗体。血清中首先出现的是HIV前体P55抗体和核心蛋白P24抗体；然后出现外包膜蛋白GP120抗体和跨膜糖蛋白gp41抗体。目前发现HIV有HIV-1、HIV-2、O型等，这几种类型在生物学特性上很相似，它们基因组有40％-50％的同源性。目前，我国流行的主要是HIV-1型。由于HIV抗原和核酸检测所使用的仪器、试剂、人力成本过高，占据HIV检测市场主流的还是HIV抗体检测。目前，HIV抗体检测原料一方面朝着提高灵敏度和特异性，缩短窗口期的方向发展，另一方面朝着简便快速的方向发展。为了顺应以上发展趋势，本专利技术公开了一种可以应用于HIV-1抗体检测的HIV-1重组蛋白。
技术实现思路
在一些实施方案中，本文提供一种人类免疫缺陷病毒重组蛋白质，其包含与SEQIDNO：1所示的氨基酸序列具有至少94％，93％，92％，91％，90％，89％，88％，87％，86％，85％，84％，83％，82％，81％，80％，75％，70％，65％，60％，55％，或50％的序列同一性的多肽，SEQIDNO：1：其中所述多肽与SEQIDNO：1所示的氨基酸序列第53、85、98、105、109、111、132和133的八个位点的氨基酸K，K，R，N，S，Q，E和S相对应的氨基酸分别置换为下述氨基酸：酸性脂肪族氨基酸E或Q，酸性脂肪族氨基酸E或D或Q，K，芳香族氨基酸F或Y，R或T，中性氨基酸L或I，碱性带正电荷的R基氨基酸K或R或H，和非羟基氨基酸V或N。在一些实施方案中，所述人类免疫缺陷病毒重组蛋白质能够特异性结合HIV的抗体(例如HIV感染者如HIV-1感染者产生的HIV抗体)。在一些实施方案中，所述人类免疫缺陷病毒重组蛋白质能够用于诊断受试者是否感染HIV如HIV-1。在一些实施方案中，所述多肽进一步包含SEQIDNO：1所示的氨基酸序列第106、120和139位点中的一个或多个氨基酸置换，其中所述置换选自T106E、R120K和N139D，其中中间的数字106、120、139表示位置，数字前面的氨基酸表示原SEQIDNO：1中的氨基酸，数字后的氨基酸表示置换后的氨基酸(本说明书其它部分进行此类描述表示同样的含义)。在一些实施方案中，所述多肽在上述第53、85、98、105、109、111、132和133的八个位点的氨基酸置换之外，进一步包含T106E。在一些实施方案中，所述多肽在上述第53、85、98、105、109、111、132和133的八个位点的氨基酸置换之外，进一步包含R120K。在一些实施方案中，所述多肽在上述第53、85、98、105、109、111、132和133的八个位点的氨基酸置换之外，进一步包含N139D。在一些实施方案中，所述多肽在上述第53、85、98、105、109、111、132和133的八个位点的氨基酸置换之外，进一步包含T106E和R120K。在一些实施方案中，所述多肽在上述第53、85、98、105、109、111、132和133的八个位点的氨基酸置换之外，进一步包含T106E和N139D。在一些实施方案中，所述多肽在上述第53、85、98、105、109、111、132和133的八个位点的氨基酸置换之外，进一步包含R120K和N139D。在一些实施方案中，所述多肽在上述第53、85、98、105、109、111、132和133的八个位点的氨基酸置换之外，进一步包含T106E、R120K和N139D。在一些实施方案中，进一步包含上述置换的所述人类免疫缺陷病毒重组蛋白质能够特异性结合HIV的抗体(例如HIV感染者如HIV-1感染者产生的HIV抗体)。在一些实施方案中，所述人类免疫缺陷病毒重组蛋白质能够优选的以更高的灵敏度用于诊断受试者是否感染HIV如HIV-1。在一些实施方案中，所述的人类免疫缺陷病毒重组蛋白质与SEQIDNO：1所示的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％或至少94％的序列同一性，例如其与SEQIDNO：1所示的氨基酸序列的区别仅在于所述八个位点的氨基酸不同，例如其与SEQIDNO：1所示的氨基酸序列的区别仅在于第53、85、98、105、109、111、132、133位点和选自第106、120和139位点三个位点中的任意一个或多个位点的氨基酸不同(即仅存在九、十或十一个位点的不同)。在一些实施方案中，本文提供一种核酸，其编码本文描述的人类免疫缺陷病毒重组蛋白质。在一些实施方案中，本文提供一种载体，其包含本文描述的核酸。在一些实施方案中，本文提供一种宿主细胞，其包含本文描述的核酸或的载体。在一些实施方案中，本文提供一种试剂盒，其包含本文描述的人类免疫缺陷病毒重组蛋白质，本文描述的核酸或本文描述的载体。在一些实施方案中，所述试剂盒还包括用于标记所述人类免疫缺陷病毒重组蛋白质的标记，如酶标记、胶体金标记等。在一些实施方案中，本文提供一种生产本文描述的人类免疫缺陷病毒重组蛋白质的方法，其包括制备本文描述的核酸或本文描述的载体的步骤。在一些实施方案中，本文提供一种组合物，其包含本文描述的人类免疫缺陷病毒重组蛋白质。在一些实施方案中，本文提供本文描述的人类免疫缺陷病毒重组蛋白质在制备用于检测人类免疫缺陷病毒感染的检测剂或试剂盒中的用途。在一些实施方案中，本文提供包含来自如下序列的部分或全部的至少30个连续氨基酸的多肽：SEQIDNo：2：其中第n位的Xaa以Xn表示，其中X53是K，E或Q，优选是E或Q，X85是K，E或D或Q，优选是E或D或Q，X98是R，K，优选是K，X105是N，F或Y，优选是F或Y，X106是T，E，优选是E，X109是S，R或T，优选是R或T，X111是Q，L或I，优选是L或I，X120是R，K，优选是K，X132是E，K或R或H，优选是K或R或H，X133是S，V或N，优选是V或N，X139是N，D，优选是D。在一些实施方案中，本文提供的所述多肽的序列包括SEQIDNO：2所示的序列，同时所述多肽相对于SEQIDNO：1所示序列存在至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11个氨基酸置换。在一些实施方案中，在SEQIDNO：2所示序列中：X53是E或Q，X85是E或D或Q，X98是R，X105是F或Y，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人类免疫缺陷病毒重组蛋白质，其包含与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列具有至少85％的序列同一性的多肽，其中所述多肽与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列第53、85、98、105、109、111、132和133的八个位点的氨基酸K，K，R，N，S，Q，E和S相对应的氨基酸分别置换为下述氨基酸：酸性脂肪族氨基酸E或Q，酸性脂肪族氨基酸E或D或Q，K，芳香族氨基酸F或Y，R或T，中性氨基酸L或I，碱性带正电荷的R基氨基酸K或R或H，和非羟基氨基酸V或N。

【技术特征摘要】
1.一种人类免疫缺陷病毒重组蛋白质，其包含与SEQIDNO：1所示的氨基酸序列具有至少85％的序列同一性的多肽，其中所述多肽与SEQIDNO：1所示的氨基酸序列第53、85、98、105、109、111、132和133的八个位点的氨基酸K，K，R，N，S，Q，E和S相对应的氨基酸分别置换为下述氨基酸：酸性脂肪族氨基酸E或Q，酸性脂肪族氨基酸E或D或Q，K，芳香族氨基酸F或Y，R或T，中性氨基酸L或I，碱性带正电荷的R基氨基酸K或R或H，和非羟基氨基酸V或N。2.权利要求1所述的人类免疫缺陷病毒重组蛋白质，其中所述多肽进一步包含SEQIDNO：1所示的氨基酸序列第106、120和139位点中的一个或多个氨基酸置换，其中所述置换选自T106E、R120K和N139D。3.权利要求1或2所述的人类免疫缺陷病毒重组蛋白质，其与SEQIDNO：1所示的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％或至少94％的序列同一性，例如其与SEQIDNO：1...

【专利技术属性】
技术研发人员：张帅，
申请(专利权)人：张帅，
类型：发明
国别省市：广东,44