一种抗hCGβ-CTP单克隆抗体及其制备方法技术

本发明专利技术实施例公开了一种抗hCGβ‑CTP单克隆抗体及其制备方法，其步骤：以CHOK1细胞系表达的偶联CTP的高糖化蛋白为免疫原；将纯化的偶联CTP的高糖化蛋白分4次注入小鼠腹腔，每次时间间隔为3周；采血，分离血清；选效价超过1：10000的小鼠，取脾细胞与骨髓瘤细胞体外融合，经过三次亚克隆筛选获得稳定分泌抗hCGβ‑CTP单抗的特异性杂交瘤细胞株；将扩大培养细胞株注入小鼠腹腔以生产腹水，提纯获得hCGβ‑CTP单克隆抗体。本发明专利技术所制备是针对hCGβ‑CTP28肽特异性单克隆抗体，具有良好的抗原特异性，进一步提高检测的敏感性和特异性，并为避孕疫苗的研制奠定基础，在早孕诊断、先兆流产的预测以及肿瘤的诊断方面上具有十分重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
一种抗hCGβ-CTP单克隆抗体及其制备方法
本专利技术涉及单克隆抗体
，尤其涉及一种抗hCGβ-CTP单克隆抗体及其制备方法。
技术介绍
人绒毛膜促性腺激素(humanchorioniegonadotrophin，HCG)是人类受孕后胎盘合体滋养层细胞分泌的维持正常妊娠必需的一种糖蛋白激素。HCG分子含有两个亚基，分别为α和β亚基。两个亚基的分子结构不同，以二硫键将两个亚基连接在一起形成二聚体结构，HCG的生物学活性和免疫学特性由β亚基决定。在妊娠早期HCG的浓度迅速增高，监测尿中的HCG即可证实妊娠。另外，HCG的含量与许多异位HCG表达的肿瘤有密切关系，可将HCG看作是相关的肿瘤标志物之一，因此，HCG的检查不仅对早孕检测具有重要意义，而且可对滋养层细胞肿瘤和非滋养层细胞肿瘤的诊断与鉴定提供依据。但用完整的抗hCG分子抗体检测hCG时会与促黄体生成激素(LH)间有免疫交叉反应，造成目前的抗hCG单克隆抗体检测的敏感性和特异性降低。因此，现有技术还有待进一步发展。
技术实现思路
针对上述技术问题，本专利技术实施例提供了一种抗hCGβ-CTP单克隆抗体及其制备方法，以解决现有抗h本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗hCGβ‑CTP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：制备免疫原：以CHOK1细胞系表达的偶联CTP的高糖化蛋白为免疫原；免疫：采用长程免疫方法，将纯化的偶联CTP的高糖化蛋白分4次注入小鼠腹腔，每次时间间隔为3周；筛选：在4次免疫后采血，分离血清，检测抗体效价；细胞融合及克隆化：选免疫效价超过1：10000的小鼠，取脾细胞与骨髓瘤细胞体外融合，经过三次亚克隆筛选获得稳定分泌抗hCGβ‑CTP单抗的特异性杂交瘤细胞株；腹水制备：将扩大培养的细胞株注入小鼠腹腔以生产大量腹水，经提取纯化获得hCGβ‑CTP单克隆抗体。

【技术特征摘要】
1.一种抗hCGβ-CTP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：制备免疫原：以CHOK1细胞系表达的偶联CTP的高糖化蛋白为免疫原；免疫：采用长程免疫方法，将纯化的偶联CTP的高糖化蛋白分4次注入小鼠腹腔，每次时间间隔为3周；筛选：在4次免疫后采血，分离血清，检测抗体效价；细胞融合及克隆化：选免疫效价超过1：10000的小鼠，取脾细胞与骨髓瘤细胞体外融合，经过三次亚克隆筛选获得稳定分泌抗hCGβ-CTP单抗的特异性杂交瘤细胞株；腹水制备：将扩大培养的细胞株注入小鼠腹腔以生产大量腹水，经提取纯化获得hCGβ-CTP单克隆抗体。2.根据权利要求1所述的抗hCGβ-CTP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，制备免疫原包括步骤：获得编码偶联CTP的高糖化蛋白基因；构建pMH3-EPO-CTP真核表达载体；以CHOK1细胞系表达偶联CTP的高糖化蛋白。3.根据权利要求1所述的抗hCGβ-CTP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述长程免疫方法包括：将纯化的偶联CTP的高糖化蛋白与弗氏完全佐剂充分混匀成乳状，小鼠腹腔注射进行首次免疫，3周后，采用免疫原与弗氏不完全佐剂充分混匀后小鼠腹腔注射，再进行3次免疫，每次时...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓兴朝，王锐，陈欢，林金昌，王翠翠，
申请(专利权)人：深圳容金科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44