一种小鼠关节软骨细胞分离、培养、鉴定试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种小鼠关节软骨细胞分离、培养、鉴定试剂盒，包括大箱体和箱盖，所述大箱体内部的一侧设有第一小盒体，大箱体内部的另一侧并列设置有第二小盒体和冰袋放置区，所述大箱体的上方安装有箱盖。本实用新型专利技术该试剂盒提供了小鼠关节软骨细胞分离、培养、鉴定过程中涉及到的所有试剂，并且提供了一套高效的细胞分离、培养方案，实验人员可参照试剂盒说明书、使用试剂盒内的试剂，方便、快捷地完成相关细胞分离、培养实验；既减少了时间、精力的消耗，又提高了目的细胞的活性及质量；同时，提供了一套鉴定方法及相关试剂，确保最终实验结果的准确性。

A Kit for Isolation, Culture and Identification of Mouse Articular Chondrocyte

The utility model discloses a kit for isolation, culture and identification of mouse articular chondrocyte, which comprises a large box body and a box cover. One side of the box body is provided with a first small box body, and the other side of the box body is arranged side by side with a second small box body and an ice bag placement area. The box cover is arranged above the large box body. The kit of the utility model provides all the reagents involved in the process of isolation, culture and identification of mouse articular chondrocyte, and provides a set of efficient cell separation and culture program. The experimenter can conveniently and quickly complete the related cell separation and culture experiments by referring to the kit instructions and using the reagents in the kit, which reduces the consumption of time and energy. At the same time, a set of identification methods and related reagents were provided to ensure the accuracy of the final experimental results.

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠关节软骨细胞分离、培养、鉴定试剂盒
本技术涉及生物
，具体为一种小鼠关节软骨细胞分离、培养、鉴定试剂盒。
技术介绍
骨关节炎（Osteoarthritis，OA）为一种退行性病变，系由于增龄、肥胖、劳损、创伤、关节先天性异常、关节畸形等诸多因素引起的关节软骨退化损伤、关节边缘和软骨下骨反应性增生，又称骨关节病、退行性关节炎、老年性关节炎、肥大性关节炎等。临床表现为缓慢发展的关节疼痛、压痛、僵硬、关节肿胀、活动受限和关节畸形等。骨关节炎是全球范围内最常见的疾病之一，其病变部位产生的肿胀、疼痛、肌肉萎缩及肌无力等功能障碍严重影响着患者的生活质量。随着年龄的增长，骨关节炎的发生率逐渐增加，它是老年人疼痛和致残的主要原因。随着社会老龄化进程，该病的防治变得越来越重要。目前，防治该病的重点之一即保护退变的关节软骨。软骨组织由软骨细胞和软骨基质构成，软骨细胞是软骨组织中唯一的细胞成分；软骨基质由软骨细胞产生和分泌，主要成分为Ⅱ型胶原和蛋白多糖，其中多糖以酸性糖胺多糖为主。在软骨移植修复及软骨病变发生机制的研究中，常常需要借助体外培养技术获得保持着分化特性的软骨细胞。由于临床病例标本获得较为困难，因此，众多关于该病的发病机制、药物预防及治疗的研究多建立于动物模型中进行。从实验动物关节中获取关节软骨细胞，并进行体外培养，而后对体外培养细胞进行干预就变得尤为重要。但软骨细胞包埋于软骨陷窝内，周围包裹着大量的Ⅱ型胶原和蛋白多糖等大分子结构，因此软骨细胞的获得与体外培养存在一定的难度。目前，软骨组织多通过酶解的方式从中游离出软骨细胞，然后经细胞筛网过滤得到最终目的细胞，但所需相关酶甚多(睾丸透明质酸酶、胰蛋白酶、胶原酶等)，且消化时间较长，容易破坏软骨细胞的活性，导致最终细胞得率及存活率较低，关节软骨细胞生长周期慢。
技术实现思路
本技术的目的在于提供一种小鼠关节软骨细胞分离、培养、鉴定试剂盒，该试剂盒包含小鼠关节软骨细胞分离、培养、鉴定所需的各种试剂，可供实验人员直接使用。为实现上述目的，本技术提供如下技术方案：一种小鼠关节软骨细胞分离、培养、鉴定试剂盒，包括大箱体和箱盖，所述大箱体内部的一侧设有第一小盒体，大箱体内部的另一侧并列设置有第二小盒体和冰袋放置区，所述第一小盒体内固定有第一泡沫试剂架，第一泡沫试剂架上设有组织清洗液放置区、消化酶Ⅰ放置区、消化酶Ⅱ放置区、消化酶Ⅲ放置区、细胞洗涤液放置区、细胞培养液放置区、生长添加剂放置区，所述第二小盒体内固定有第二泡沫试剂架，第二泡沫试剂架上设有固定液放置区、表面活性剂放置区、封闭液放置区、洗液放置区、一抗放置区、荧光二抗放置区、细胞核染料放置区、封片液放置区，所述大箱体的上方安装有箱盖，且箱盖的内侧设有与第一小盒体、第二小盒体、冰袋放置区相互配合的凹槽。优选的，所述第一小盒体与第二小盒体和冰袋放置区之间、第二小盒体与冰袋放置区之间均固定有防震泡沫板。优选的，所述组织清洗液放置区内放置有一个盛放100mL组织清洗液的无菌、密封塑料方瓶，且组织清洗液主要由磷酸盐缓冲液、青-链霉素组成。优选的，所述消化酶Ⅰ放置区内放置有一个盛放50mL消化酶Ⅰ的无菌、密封试剂瓶，且消化酶Ⅰ主要由胰蛋白酶组成。优选的，所述消化酶Ⅱ放置区内放置有一个盛放50mL消化酶Ⅱ的无菌、密封试剂瓶，且消化酶Ⅱ主要由Ⅱ型胶原酶组成。优选的，所述消化酶Ⅲ放置区内放置有一个盛放25mL消化酶Ⅲ的无菌、密封试剂瓶，且消化酶Ⅲ主要由分散酶（中性蛋白酶）组成。优选的，所述细胞洗涤液放置区内放置有一个盛放100mL细胞洗涤液的无菌、密封塑料方瓶，且细胞洗涤液主要由DMEM/F12基础培养基、胎牛血清、青-链霉素组成。优选的，所述细胞培养液放置区内放置有两个盛放100mL细胞培养液的无菌、密封塑料方瓶，且细胞培养液主要由DMEM/F12基础培养基、胎牛血清、GlutaMAX、青-链霉素组成。优选的，所述生长添加剂放置区内放置有一个装有2mL生长添加剂的无菌离心管，且生长添加剂主要由胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸钠、维生素添加剂、维生素C组成。优选的，所述固定液放置区内放置有一个盛放10mL固定液的无菌、密封试剂瓶，且固定液主要由多聚甲醛组成。优选的，所述表面活性剂放置区内放置有一个盛放10mL表面活性剂放的无菌、密封试剂瓶，且表面活性剂主要由TritonX-100组成。优选的，所述封闭液放置区内放置有一个盛放2mL封闭液的无菌离心管，且封闭液主要由正常山羊血清组成。优选的，所述洗液放置区内放置有一个盛放100mL洗液的无菌、密封塑料方瓶，且洗液主要由PBS、Tween-20组成。优选的，所述一抗放置区内放置有一个盛放1mL一抗的无菌离心管，且一抗主要由Anti-CollagenⅡ兔抗组成。优选的，所述荧光二抗放置区内放置有一个盛放1mL荧光二抗的无菌离心管，且荧光二抗主要由荧光（Cy3）标记羊抗兔IgG组成。优选的，所述细胞核染料放置区内放置有一个盛放1mL细胞核染料的无菌、棕色避光离心管，且细胞核染料主要由Hoechst33342组成。优选的，所述封片液放置区内放置有一个盛放1mL封片液的无菌离心管，且封片液主要由抗荧光淬灭封片液组成。与现有技术相比，本技术的有益效果是：该试剂盒提供了小鼠关节软骨细胞分离、培养、鉴定过程中涉及到的所有试剂，并且提供了一套高效的细胞分离、培养方案，实验人员可参照试剂盒说明书、使用试剂盒内的试剂，方便、快捷地完成相关细胞分离、培养实验；既减少了时间、精力的消耗，又提高了目的细胞的活性及质量；同时，提供了一套鉴定方法及相关试剂，确保最终实验结果的准确性。附图说明图1为本技术的大箱体内部结构示意图；图2为本技术的第一小盒体内部结构示意图；图3为本技术的第二小盒体内部结构示意图。图中：1、大箱体；2、箱盖；3、第一小盒体；4、第二小盒体；5、冰袋放置区；6、防震泡沫板；7、组织清洗液放置区；8、消化酶Ⅰ放置区；9、消化酶Ⅱ放置区；10、消化酶Ⅲ放置区；11、细胞洗涤液放置区；12、细胞培养液放置区；13、生长添加剂放置区；14、固定液放置区；15、表面活性剂放置区；16、洗液放置区；17、封闭液放置区；18、一抗放置区；19、荧光二抗放置区；20、细胞核染料放置区；21、封片液放置区。具体实施方式下面将结合本技术实施例中的附图，对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本技术保护的范围。请参阅图1-3，本技术提供的一种实施例：一种小鼠关节软骨细胞分离、培养、鉴定试剂盒，包括大箱体1和箱盖2，所述大箱体1内部的一侧设有第一小盒体3，大箱体1内部的另一侧并列设置有第二小盒体4和冰袋放置区5，第一小盒体3与第二小盒体4和冰袋放置区5之间、第二小盒体4与冰袋放置区5之间均固定有防震泡沫板6，所述第一小盒体3内固定有第一泡沫试剂架，第一泡沫试剂架上设有组织清洗液放置区7、消化酶Ⅰ放置区8、消化酶Ⅱ放置区9、消化酶Ⅲ放置区10、细胞洗涤液放置区11、细胞培养液放置区12、生本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小鼠关节软骨细胞分离、培养、鉴定试剂盒，包括大箱体（1）和箱盖（2），其特征在于：所述大箱体（1）内部的一侧设有第一小盒体（3），大箱体（1）内部的另一侧并列设置有第二小盒体（4）和冰袋放置区（5），所述第一小盒体（3）内固定有第一泡沫试剂架，第一泡沫试剂架上设有组织清洗液放置区（7）、消化酶Ⅰ放置区（8）、消化酶Ⅱ放置区（9）、消化酶Ⅲ放置区（10）、细胞洗涤液放置区（11）、细胞培养液放置区（12）、生长添加剂放置区（13），所述第二小盒体（4）内固定有第二泡沫试剂架，第二泡沫试剂架上设有固定液放置区（14）、表面活性剂放置区（15）、封闭液放置区（17）、洗液放置区（16）、一抗放置区（18）、荧光二抗放置区（19）、细胞核染料放置区（20）、封片液放置区（21），所述大箱体（1）的上方安装有箱盖（2），且箱盖（2）的内侧设有与第一小盒体（3）、第二小盒体（4）、冰袋放置区（5）相互配合的凹槽。

【技术特征摘要】
1.一种小鼠关节软骨细胞分离、培养、鉴定试剂盒，包括大箱体（1）和箱盖（2），其特征在于：所述大箱体（1）内部的一侧设有第一小盒体（3），大箱体（1）内部的另一侧并列设置有第二小盒体（4）和冰袋放置区（5），所述第一小盒体（3）内固定有第一泡沫试剂架，第一泡沫试剂架上设有组织清洗液放置区（7）、消化酶Ⅰ放置区（8）、消化酶Ⅱ放置区（9）、消化酶Ⅲ放置区（10）、细胞洗涤液放置区（11）、细胞培养液放置区（12）、生长添加剂放置区（13），所述第二小盒体（4）内固定有第二泡沫试剂架，第二泡沫试剂架上设有固定液放置区（14）、表面活性剂放置区（15）、封闭液放置区（17）、洗液放置区（16）、一抗放置区（18）、荧光二抗放置区（19）、细胞核染料放置区（20）、封片液放置区（21），所述大箱体（1）的上方安装有箱盖（2），且箱盖（2）的内侧设有与第一小盒体（3）、第二小盒体（4）、冰袋放置区（5）相互配合的凹槽。2.根据权利要求1所述的一种小鼠关节软骨细胞分离、培养、鉴定试剂盒，其特征在于：所述第一小盒体（3）与第二小盒体（4）和冰袋放置区（5）之间、第二小盒体（4）与冰袋放置区（5）之间均固定有防震泡沫板（6）。3.根据权利要求1所述的一种小鼠关节软骨细胞分离、培养、鉴定试剂盒，其特征在于：所述组织清洗液放置区（7）内放置有一个盛放100mL组织清洗液的无菌、密封塑料方瓶。4.根据权利要求1所述的一种小鼠关节软骨细胞分离、培养、鉴定试剂盒，其特征在于：所述消化酶Ⅰ放置区（8）内放置有一个盛放50mL消化酶Ⅰ的无菌、密封试剂瓶。5.根据权利要求1所述的一种小鼠关节软骨细胞分离、培养、鉴定试剂盒，其特征在于：所述消化酶Ⅱ放置区（9）内放置有一个盛放50mL消化酶Ⅱ的无菌、密封试剂瓶。6.根据权利要求1所述的一种小鼠关节软骨细胞分离、培养、鉴定试剂盒，其特征在于：所述消化酶Ⅲ放置区（10）内放置有一个盛放25mL消化酶Ⅲ的无菌、密封试剂瓶。7.根据权利要求1所述的一种小...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：武汉普诺赛生命科技有限公司，
类型：新型
国别省市：湖北,42