The invention discloses a method for separating crude papain enzymes, which comprises the following steps: (1) pretreatment of papaya; (2) grinding and crushing of wet beads; (3) freezing centrifugal primary filtration; (4) low temperature vacuum drying; (5) saturated salting-out. The technological process of the invention is more optimized, more papaya milk can be obtained, browning can be effectively prevented in the preparation process, sulfhydryl group of papaya protease can be effectively protected, enzyme activity can be reduced, and finally the activity of papaya protease can reach more than 600,000 u/g.
【技术实现步骤摘要】
一种木瓜蛋白酶粗酶的分离方法
本专利技术属于植物酶提取
,具体涉及一种木瓜蛋白酶粗酶的分离方法。
技术介绍
木瓜蛋白酶是一类巯基蛋白酶,广泛地存在于番木瓜(Carieapapaya)的茎叶和果实中,未成熟的乳汁中含量最高。因其含量高、稳定性好、蛋白水解能力强,对多种蛋白质均具有很好的降解作用,目前已被广泛应用于各个行业。在食品中,木瓜蛋白酶被用于肉类嫩化、啤酒澄清和鱼类加工等工艺中。由于其为纯天然产物,因此开发前景广阔。现有文献表明提取和利用木瓜蛋白酶已成为当今科技研究的热点之一。以番木瓜未成熟果实的新鲜乳汁为原科生产木瓜蛋白酶,由于番木瓜种植区主要分布于经济不发达地区,因此蛋白酶生产工艺相对落后。在木瓜蛋白酶的制备过程中,要提高木瓜蛋白酶的质和量,必须要加入酶活性保护剂,减少酶失活,干燥过程中温度不宜过高,同时去除杂质。常用的酶保护剂有亚硫酸氢钠、EDTA、焦亚硫酸钠等。目前,木瓜蛋白酶的提取主要采用化学方法,化学方法一方面工艺条件要求很多,操作过程比较繁琐,耗时耗能均较多;另一方面,需要使用大量的化学试剂,成本很高。木瓜蛋白酶传统提取方法存在严重缺陷:木瓜青果乳汁割收方法落后,卫生条件差,乳汁损失大,褐变严重,酶活性低。目前,市场对木瓜蛋白酶需求量增长迅速,而目前的生产方式又不能满足市场的需求。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种通过湿法珠磨法有效提高木瓜乳汁割收量,并通过DTNB硝基苯甲酸二硫化合物作为保护剂,有效提高木瓜蛋白酶酶活性的木瓜蛋白酶粗酶的分离方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的:一种木瓜蛋白酶粗酶的分离方法,包括如下步 ...
【技术保护点】
1.一种木瓜蛋白酶粗酶的分离方法,其特征在于:包括如下步骤,(1)木瓜预处理:将木瓜鲜果洗净、切成碎块,浸泡在水中;(2)湿法珠磨破碎:待木瓜充分吸收水分后将其倒入珠磨机中,并按体积比加入10‑20%研磨剂,进行珠磨破碎,研磨时间10‑30min,研磨剂与细胞之间进行相互剪切、碰撞,使细胞破碎,释放出内含物;破碎后通过珠液分离器,将研磨剂与乳汁分离,并将果肉纤维滤去,得到滤液;(3)低温真空干燥:在滤液中加入保护剂,将滤液置于低温真空干燥机中干燥,干燥10‑30min即得粗酶;(4)饱和盐析:通过饱和硫酸铵盐析对其进一步分离纯化,去除其他蛋白质和小分子物质,即得木瓜蛋白酶产品。
【技术特征摘要】
1.一种木瓜蛋白酶粗酶的分离方法,其特征在于:包括如下步骤,(1)木瓜预处理:将木瓜鲜果洗净、切成碎块,浸泡在水中;(2)湿法珠磨破碎:待木瓜充分吸收水分后将其倒入珠磨机中,并按体积比加入10-20%研磨剂,进行珠磨破碎,研磨时间10-30min,研磨剂与细胞之间进行相互剪切、碰撞,使细胞破碎,释放出内含物;破碎后通过珠液分离器,将研磨剂与乳汁分离,并将果肉纤维滤去,得到滤液;(3)低温真空干燥:在滤液中加入保护剂,将滤液置于低温真空干燥机中干燥,干燥10-30min即得粗酶;(4)饱和盐析:通过饱和硫酸铵盐析对其进一步分离纯化,去除其他蛋白质和小分子物质,即得木瓜蛋白酶产品。2.根据权利要求1所述的木瓜蛋白酶粗酶的分离方法,其特征在于:所述步骤(2)中的研磨剂为玻璃小珠、石英砂、氧化铝中的一种或其互相组合的磨球。3.根据权利要求2所述的木瓜蛋白酶粗酶的分离方法,其特征在于:所述磨球之间的质量比为玻璃小珠或石英砂∶氧化...
【专利技术属性】
技术研发人员:磨光庭,卢福燊,
申请(专利权)人:广西南宁天绿生物制品有限公司,
类型:发明
国别省市:广西,45
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