神经元蜡样脂褐质沉积症的基因治疗制造技术

本发明专利技术部分地提供了用于治疗神经元蜡样脂褐质沉积症(NCL)的组合物和方法。本发明专利技术进一步部分地提供了用于治疗、预防或减轻NCL的至少一种症状的基因治疗组合物和方法。特定实施例提供了一种药物组合物，其包括药学上可接受的载剂和慢病毒载体或用慢病毒载体转导的哺乳动物细胞。其它实施例提供了一种治疗NCL的方法，其包括施用慢病毒载体或用慢病毒载体转导的哺乳动物细胞。

Gene therapy of neuronal ceroid lipofuscinosis

Compositions and methods for the treatment of neuronal ceroid lipofuscinosis (NCL) are provided in part. The present invention further partially provides gene therapy compounds and methods for treating, preventing or alleviating at least one symptom of NCL. Specific embodiments provide a pharmaceutical composition comprising pharmaceutically acceptable carriers and lentiviral vectors or mammalian cells transduced with lentiviral vectors. Other embodiments provide a method for treating NCL, including mammalian cells transduced with lentiviral vectors or lentiviral vectors.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】神经元蜡样脂褐质沉积症的基因治疗相关申请的交叉引用本申请要求于2017年2月10日提交的美国临时申请号62/457,498和于2016年6月13日提交的美国临时申请号62/349,505在35U.S.C.§119(e)下的权益，所述美国临时申请各自通过引用以其全文并入本文。关于序列表的声明与本申请相关联的序列表以文本格式提供以代替纸质副本并且在此通过并入本说明书中。包含序列表的文本文件的名称是BLBD_070_02WO_ST25.txt。文本文件为33KB，于2017年6月13日创建并通过EFS-Web以电子方式提交，与本说明书同时提交。
本专利技术涉及基因治疗。更具体地说，本专利技术涉及使用基因治疗治疗神经元蜡样脂褐质沉积症的基因治疗组合物和方法。
技术介绍
神经元蜡样脂褐质沉积症(NCL)是一组神经系统致命遗传性病症。大部分NCL是常染色体隐性疾病。NCL通常在儿童早期开始并且影响每100,000个个体中估计2到4个个体。这些病症较常见于芬兰、瑞典、北欧的其它地区和加拿大纽芬兰。这些病症的早期症状包含微妙的人格和行为改变、学习迟缓、笨拙或绊倒。随着疾病进展，受影响儿童遭受认知缺损、癫痫发作恶化以及视力和运动技能的进行性丧失。最终，患有NCL的儿童变盲、卧床不起且痴呆。贝敦氏病(Battendisease)(Spielmeyer-Vogt-Sjogren-Batten病)是最常见的NCL。虽然贝敦氏病最初具体地指代青少年形式的NCL(JNCL)，但是术语贝敦氏病被儿科医生越来越来地用于描述所有形式的NCL。有四种其它主要NCL类型，包含更早地在儿童时期开始的三种形式和危害成人的非常罕见的形式。这些儿童期类型的症状类似于贝敦氏病引起的那些，但是症状在不同年龄变得显而易见并以不同的速率进展。先天性NCL是非常罕见且严重的NCL形式；婴儿患有小头畸形和癫痫并在出生后很快死亡。婴儿型NCL(INCL或Santavuori-Haltia病)在约6个月与2岁之间开始并且标记为发育停滞、小头畸形和肌肉阵挛性收缩。这些儿童通常在5岁前死亡。晚期婴儿型NCL(LINCL或Jansky-Bielschowsky病)在2岁与4岁之间开始并且导致肌肉协调丧失(共济失调)、癫痫发作并最终在8岁与12岁之间死亡。成人型NCL(库夫斯病(Kufsdisease)、帕里氏病(Parry'sdisease)和ANCL)通常出现在40岁之前，引起进展迟缓的较温和症状并且不导致失明。尽管死亡年龄在受影响的个体中有所不同，但是这一形式确实缩短了预期寿命。迄今为止，已知并无可用停止或逆转NCL的症状的特异性治疗。虽然最近提供了稍微鼓励了改进贝敦氏病的某些形式的神经表现的结果的酶替换治疗，但是其并未处理全范围的贝敦氏病表现，并且其施用显著不便。干细胞治疗已经产生了令人失望的结果。大多数可用治疗仅治疗NCL的症状：可以通过抗惊厥药物来控制癫痫发作，物理和职业治疗可以帮助患者尽可能长地保留功能，并且支持和鼓励可以帮助患者和家人应对由NCL引起的深度残疾和痴呆。最后，由于缺乏有效治疗，NCL疾病是致命的。
技术实现思路
本专利技术总体上部分涉及用于治疗、预防或减轻神经元蜡样脂褐质沉积症的至少一种症状的基因治疗组合物和方法。在各个实施例中，提供了一种多核苷酸，其包括：左(5′)慢病毒LTR；Psi(ψ)包装信号；逆转录病毒输出元件；中心多嘌呤区/DNA皮瓣(cPPT/FLAP)；与编码三肽基肽酶1(TPP1)多肽的多核苷酸可操作地连接的启动子；以及右(3′)慢病毒LTR。在特定实施例中，慢病毒选自由以下组成的群组：HIV(人类免疫缺陷病毒；包含HIV1型和HIV2型)；维斯纳-梅迪病毒(VMV)；山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)；马传染性贫血病毒(EIAV)；猫免疫缺陷病毒(FIV)；牛免疫缺陷病毒(BIV)；以及猿猴免疫缺陷病毒(SIV)。在某些实施例中，所述慢病毒是HIV-1或HIV-2。在一些实施例中，所述慢病毒是HIV-1。在另外的实施例中，所述5′LTR的启动子用选自由以下组成的群组的异源启动子替换：巨细胞病毒(CMV)启动子、劳斯肉瘤病毒(RSV)启动子和猿猴病毒40(SV40)启动子。在其它实施例中，所述3′LTR包括一个或多个修饰。在一些实施例中，所述3′LTR包括防止病毒转录超出第一轮病毒复制的一个或多个缺失。在特定实施例中，所述3′LTR包括所述3′LTR的U3区域中TATA框以及Sp1和NF-κB转录因子结合位点的缺失。在一些实施例中，所述3′LTR是自身失活(SIN)LTR。在某些实施例中，所述与编码TPP1多肽的多核苷酸可操作地连接的启动子包括骨髓增生性肉瘤病毒增强子、缺失的阴性对照区域、dl587rev引物结合位点取代的(MND)启动子或其转录活性片段。在特定实施例中，所述与编码TPP1多肽的多核苷酸可操作地连接的启动子选自由以下组成的群组：整合素亚单元αM(ITGAM；CD11b)、CD68、C-X3-C基序趋化因子受体1(CX3CR1)、离子钙结合衔接分子(IBA1)、跨膜蛋白119(TMEM119)、碎裂样转录因子1(spaltliketranscriptionfactor1)(SALL1)和粘附G蛋白偶联受体E1(F4/80)。在另外的实施例中，所述与编码TPP1多肽的多核苷酸可操作地连接的启动子包括延伸因子1α(EF1α)启动子或其转录活性片段。在特定实施例中，所述与编码TPP1多肽的多核苷酸可操作地连接的启动子是短EF1α启动子。在一些实施例中，所述与编码TPP1多肽的多核苷酸可操作地连接的启动子是长EF1α启动子。在其它实施例中，编码所述TPP1多肽的所述多核苷酸是cDNA。在特定实施例中，编码所述TPP1多肽的所述多核苷酸是经过优化用于表达的密码子。在特定实施例中，提供了一种多核苷酸，其包括：左(5′)HIV-1LTR；Psi(ψ)包装信号；RRE逆转录病毒输出元件；cPPT/FLAP；与编码TPP1多肽的多核苷酸可操作地连接的MND启动子或EF1α启动子；以及右(3′)HIV-1LTR。在特定实施例中，提供了一种多核苷酸，其包括：左(5′)CMV启动子/HIV-1嵌合LTR；Psi(ψ)包装信号；RRE逆转录病毒输出元件；cPPT/FLAP；与编码TPP1多肽的多核苷酸可操作地连接的MND启动子或EF1α启动子；以及右(3′)SINHIV-1LTR。在特定实施例中，所述多核苷酸进一步包括牛生长激素聚腺苷酸化信号或兔β-珠蛋白聚腺苷酸化信号。在各个实施例中，提供了一种用慢病毒载体转导的哺乳动物细胞，其包括本文所设想的多核苷酸。在一些实施例中，所述细胞是造血细胞。在某些实施例中，所述细胞是CD34+细胞。在特定实施例中，所述细胞是干细胞或祖细胞。在各个实施例中，一种生产细胞包括：编码gag的第一多核苷酸、编码pol的第二多核苷酸、编码env的第三多核苷酸和本文所设想的多核苷酸。在各个特定实施例中，提供了一种通过本文所设想的生产细胞产生的慢病毒载体。在某些实施例中，提供了一种组合物，其包括慢病毒载体，所述慢病毒载体包括本文所设想的多核苷酸或哺乳动物细胞。在各个其它实施例中，提供了一种药物组合物，其包括药学上可接受本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多核苷酸，其包括：(a)左(5′)慢病毒LTR；(b)Psi(ψ)包装信号；(c)逆转录病毒输出元件；(d)中心多嘌呤区/DNA皮瓣(cPPT/FLAP)；(e)与编码三肽基肽酶1(TPP1)多肽的多核苷酸可操作地连接的启动子；以及(f)右(3′)慢病毒LTR。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.06.13 US 62/349,505;2017.02.10 US 62/457,4981.一种多核苷酸，其包括：(a)左(5′)慢病毒LTR；(b)Psi(ψ)包装信号；(c)逆转录病毒输出元件；(d)中心多嘌呤区/DNA皮瓣(cPPT/FLAP)；(e)与编码三肽基肽酶1(TPP1)多肽的多核苷酸可操作地连接的启动子；以及(f)右(3′)慢病毒LTR。2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中慢病毒选自由以下组成的群组：HIV(人类免疫缺陷病毒；包含HIV1型和HIV2型)；维斯纳-梅迪病毒(VMV)；山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)；马传染性贫血病毒(EIAV)；猫免疫缺陷病毒(FIV)；牛免疫缺陷病毒(BIV)；以及猿猴免疫缺陷病毒(SIV)。3.根据权利要求1或权利要求2所述的多核苷酸，其中所述慢病毒是HIV-1或HIV-2。4.根据权利要求1到3中任一项所述的多核苷酸，其中所述慢病毒是HIV-1。5.根据权利要求1到4中任一项所述的多核苷酸，其中所述5′LTR的启动子用选自由以下组成的群组的异源启动子替换：巨细胞病毒(CMV)启动子、劳斯肉瘤病毒(RSV)启动子和猿猴病毒40(SV40)启动子。6.根据权利要求1到5中任一项所述的多核苷酸，其中所述3′LTR包括一个或多个修饰。7.根据权利要求1到6中任一项所述的多核苷酸，其中所述3′LTR包括防止病毒转录超出第一轮病毒复制的一个或多个缺失。8.根据权利要求1到6中任一项所述的多核苷酸，其中所述3′LTR包括所述3′LTR的U3区域中TATA框以及Sp1和NF-κB转录因子结合位点的缺失。9.根据权利要求1到6中任一项所述的多核苷酸，其中所述3′LTR是自身失活(SIN)LTR。10.根据权利要求1到9中任一项所述的多核苷酸，其中所述与编码TPP1多肽的多核苷酸可操作地连接的启动子选自由以下组成的群组：整合素亚单元αM(ITGAM；CD11b)、CD68、C-X3-C基序趋化因子受体1(CX3CR1)、离子钙结合衔接分子(IBA1)、跨膜蛋白119(TMEM119)、碎裂样转录因子1(spaltliketranscriptionfactor1)(SALL1)和粘附G蛋白偶联受体E1(F4/80)。11.根据权利要求1到9中任一项所述的多核苷酸，其中所述与编码TPP1多肽的多核苷酸可操作地连接的启动子包括骨髓增生性肉瘤病毒增强子、缺失的阴性对照区域、dl587rev引物结合位点取代的(MND)启动子或其转录活性片段。12.根据权利要求1到9中任一项所述的多核苷酸，其中所述与编码TPP1多肽的多核苷酸可操作地连接的启动子包括延伸因子1α(EF1α)启动子或其转录活性片段。13.根据权利要求1到9中任一项所述的多核苷酸，其中所述与编码TPP1多肽的多核苷酸可操作地连接的启动子是短EF1α启动子。14.根据权利要求1到9中任一项所述的多核苷酸，其中所述与编码TPP1多肽的多核苷酸可操作地连接的启动子是长EF1α启动子。15.根据权利要求1到14中任一项所述的多核苷酸，其中编码所述TPP1多肽的所述多核苷酸是cDNA。16.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：肯德里克·A·戈斯，杰弗里·B·帕森斯，阿西娅·吉尼亚图林，
申请(专利权)人：蓝鸟生物公司，
类型：发明
国别省市：美国,US