The present invention provides an insect instantaneous expression vector of exogenous protein based on the promoter of actin gene of the black-tailed leafhopper, and the promoter sequence is shown as SEQ ID NO.1. Based on the promoter sequence of cloning and amplification, a plasmid vector, Nc_Hr5cyto GFP, was successfully constructed by modifying pEGFP N1 vector. Promoter of Actin gene will be optimized to construct instantaneous expression vectors suitable for medium cicada culture cells, which will open up new technical means for studying the infection mechanism of plant viruses.
【技术实现步骤摘要】
基于黑尾叶蝉actin基因启动子的昆虫细胞外源蛋白表达载体
本专利技术属于生物技术，具体涉及基于黑尾叶蝉actin基因启动子的昆虫细胞外源蛋白瞬时表达载体。
技术介绍
由于昆虫介体本身体积小，寿命短，各种器官组织非常精细复杂，而且很多病毒基因组结构复杂，目前尚不易得到侵染性克隆，不能利用反向遗传学的手段进行研究。这导致在昆虫个体中研究病毒基因功能非常困难。昆虫细胞系的出现为研究昆虫病毒提供了有力的平台。到目前为止,全世界建立的昆虫细胞系有800多株,分别来源于鳞翅目、双翅目、鞘翅目、蜚蠊目、膜翅目、直翅目、同翅目和半翅目等8个目的170多种昆虫,然而其中大部分来自鳞翅目和双翅目,来源于其他目的昆虫细胞系仅占1/10左右(张寰等，2007)。很多昆虫细胞系已经商业化，例如果蝇的胚胎S2细胞系、草地贪夜蛾细胞sf9/sf21细胞系和白纹伊蚊C6/36细胞株等。这些细胞系作为模式昆虫平台已广泛应用于研究动植物病毒侵染及其与介体昆虫的互作关系的基础科学研究。适应于植物病毒侵染的蚜虫、叶蝉、粉虱、蓟马和稻飞虱的原代和继代细胞体系也已建立（Adametal.,1976;Kim...
【技术保护点】
1.黑尾叶蝉actin基因启动子，其特征在于：所述启动子序列如SEQ ID NO.1所示。
【技术特征摘要】
1.黑尾叶蝉actin基因启动子，其特征在于：所述启动子序列如SEQIDNO.1所示。2.一种含有权利要求1所述的黑尾叶蝉actin基因启动子的昆虫细胞外源蛋白瞬时表达载体。3.如权利要求1所述的昆虫细胞外源蛋白瞬时表达载体的构建方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：（1）瞬时表达载体构建：以真核表达载体pEGFP-N1作为骨架，利用AseI/XhoI酶切删除已有的CMV的启动子序列；利用改造后的载体中的EcoRI/BamHI酶切位点将扩增的黑尾叶蝉actin基因启动子序列整合到载体中；构建得到以叶蝉Actin基因上游序列为启动子，以SV40病毒ployA区域作为终止子，表达绿色荧光蛋白的叶蝉细胞转染载体Nc_Cyto-GFP载体；（2）瞬时表达载体优化：在actin启动子5’段整合...
【专利技术属性】
技术研发人员：张晓峰，魏太云，谢云杰，王海涛，王娟，陈红燕，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建,35
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