河豚毒素免疫荧光快速检测试纸条及制备方法与检测方法技术

河豚毒素免疫荧光快速检测试纸条及制备方法与检测方法，属于河豚毒素检测技术领域。试纸条包括载体垫、样品垫、结合垫、吸水垫、层析膜、检测线和质控线，检测线上包被有河豚毒素人工抗原，质控线上包被有羊抗鼠二抗，结合垫上喷有荧光聚苯乙烯乳胶结合的河豚毒素抗体，取几滴待测溶液滴加于样品垫上，5～15min后，把试纸条插入荧光读卡仪，记录荧光读卡仪显示的浓度即为检测溶液中河豚毒素的含量。该检测方法对河豚毒素提取液中河豚毒素的最低检出限为1ng/mL，检测线性范围为10～200ng/mL。实现对河豚毒素的快速定量检测，可以满足日常对河豚毒素的快速检测需求。

Test strip for rapid immunofluorescence detection of tetrodotoxin and its preparation method and detection method

The invention relates to a test strip for rapid detection of tetrodotoxin by immunofluorescence, a preparation method and a detection method, belonging to the technical field of detection of tetrodotoxin. The test strip includes carrier pad, sample pad, binding pad, absorbent pad, chromatography film, detection line and quality control line. The test strip is coated with tetrodotoxin artificial antigen, the quality control line is coated with goat anti-rat antibody, and the test strip is sprayed with tetrodotoxin antibody bound by fluorescent polystyrene latex on the test pad. A few drops of the solution to be tested are added to the sample pad. After 5-15 minutes, the test strip is inserted into the fluorescent reading card. The concentration of tetrodotoxin in solution was determined by fluorescence card reader. The detection limit for tetrodotoxin in tetrodotoxin extract is 1 ng/mL, and the detection linear range is 10-200 ng/mL. The rapid quantitative detection of tetrodotoxin can meet the daily needs of rapid detection of tetrodotoxin.

【技术实现步骤摘要】
河豚毒素免疫荧光快速检测试纸条及制备方法与检测方法
本专利技术涉及河豚毒素检测
，尤其涉及河豚毒素免疫荧光快速检测试纸条及制备方法与检测方法。
技术介绍
我国许多地方有食用河豚鱼的习惯，仅福建省河豚鱼的产量就达到了5000t，产值5亿，河豚鱼的养殖还带动周边的餐饮业、旅游业的发展，形成良好的社会效益。由于野生的河豚鱼与养殖的河豚鱼分辨不清，野生河豚鱼经常含有致死剂量的河豚毒素，食用河豚鱼中毒的事件时有发生，因此非常有必要对河豚毒素的快速检测进行研究。河豚毒素是一种非蛋白，低分子量的神经毒素，其可以与钠离子通道结合，进而影响到动物的肌肉与神经功能。目前国内外对河豚毒素的检测主要有:1、生物检测法，具体为小鼠检测法或组织培养检测法等；2、理化检测法，具体为荧光分析法、薄层层析法、高效液相色谱法或气相色谱法等；3、免疫学检测法，如直接竞争酶联免疫法等。目前检测河豚毒素主要是应用小鼠检测法(DB35/531-2004《棕斑腹刺鲀、暗鳍腹刺鲀加工品》附录B河豚毒素检验)，由小鼠检测法直接测定毒性，对于水产品安全性检测是很重要的，尤其是对于未知的毒素和污染物是难以替代的直观测定方法。但小鼠本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.河豚毒素免疫荧光快速检测试纸条，其特征在于：包括载体垫、样品垫、结合垫、吸水垫、层析膜、检测线和质控线；所述载体垫设于最底层，载体垫上从一侧到另一侧依次铺设有样品垫、结合垫、层析膜和吸水垫；结合垫的一端设于样品垫下面，结合垫的另一端盖设于层析膜一端的上面，层析膜的另一端设于吸水垫的下面，检测线和质控线设于层析膜上，且检测线设于靠近结合垫的一端，质控线设于靠近吸水垫的一端；检测线上包被有河豚毒素人工抗原，质控线上包被有羊抗鼠二抗，结合垫上喷有荧光聚苯乙烯乳胶结合的河豚毒素抗体。

【技术特征摘要】
1.河豚毒素免疫荧光快速检测试纸条，其特征在于：包括载体垫、样品垫、结合垫、吸水垫、层析膜、检测线和质控线；所述载体垫设于最底层，载体垫上从一侧到另一侧依次铺设有样品垫、结合垫、层析膜和吸水垫；结合垫的一端设于样品垫下面，结合垫的另一端盖设于层析膜一端的上面，层析膜的另一端设于吸水垫的下面，检测线和质控线设于层析膜上，且检测线设于靠近结合垫的一端，质控线设于靠近吸水垫的一端；检测线上包被有河豚毒素人工抗原，质控线上包被有羊抗鼠二抗，结合垫上喷有荧光聚苯乙烯乳胶结合的河豚毒素抗体。2.如权利要求1所述的河豚毒素免疫荧光快速检测试纸条，其特征在于：所述检测线和质控线的间距为0.4～0.6cm。3.河豚毒素免疫荧光快速检测试纸条的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1、样品垫和结合垫的制备：首先取河豚毒素人工抗原免疫过小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合培养，筛选阳性杂交瘤细胞体外培养，克隆扩大培养后冻存，选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡进行小鼠腹腔注射，6～8天后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中，然后在5～12天后收集腹水，收集饱合度为30％～50％硫酸铵的沉淀即为纯化后的抗体，用Eu微球标记，并用0.01MPBS溶解，最后真空干燥；步骤2、层析膜的加工：用划膜仪将形成检测线的河豚毒素人工抗原与形成质控线的质控抗体均匀地划在层析膜中间，干燥；步骤3、组装：将载体垫、层析膜、样品垫、结合垫和吸水垫拼接成层状结构，所述载体垫位于底部，载体垫的上方设有层析膜，样品垫和吸水垫分别设置于层析膜的两端，结合垫设于层析膜和样品垫之间，且结合垫和吸水垫分别与层析膜部分重叠，检测线设置在靠近结合垫的...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏捷，
申请(专利权)人：福建省水产研究所福建水产病害防治中心，
类型：发明
国别省市：福建,35