一种复合甜味剂制造技术

本发明专利技术涉及一种复合甜味剂，属于食品添加剂技术领域。本发明专利技术解决的技术问题是提供口感好的复合甜味剂。该甜味剂采用全细胞催化合成，以莱鲍迪苷A为底物，以重组微生物为催化剂，在蔗糖、氯化锌和柠檬酸三钠的存在下，催化底物进行反应，得到甜味剂组合物。本发明专利技术采用全细胞催化转化，方法简单，控制转化条件可以得到特定配比的莱鲍迪苷D和莱鲍迪苷M的组合物，可以降低生产成本。本发明专利技术复合甜味剂，与蔗糖口感相似，不引入任何人工合成成分，纯天然，无能量，水溶性也较好。

A Compound Sweetener

The invention relates to a composite sweetener, which belongs to the technical field of food additives. The technical problem solved by the invention is to provide a compound sweetener with good taste. The sweetener was synthesized by whole-cell catalysis, using lebatidin A as substrate, recombinant microorganism as catalyst, and in the presence of sucrose, zinc chloride and trisodium citrate, the sweetener composition was obtained. The invention adopts whole-cell catalytic transformation, the method is simple, and the conversion conditions can be controlled to obtain a specific ratio of the combination of lebatidin D and lebatidin M, which can reduce the production cost. The composite sweetener of the invention has the similar taste with sucrose, no artificial synthetic ingredients are introduced, and is pure natural, energy-free and water-soluble.

【技术实现步骤摘要】
一种复合甜味剂
本专利技术涉及一种复合甜味剂，属于食品添加剂

技术介绍
甜味剂是指能赋予软饮料甜味的物质。目前，人们使用最多的天然甜味剂为蔗糖，蔗糖能够为人们提供甜味，其口感也被人们普遍接受，但是，蔗糖中的热量较高，糖尿病患者以及肥胖人群均需要在饮食中进行严格控制，因此，需要无热量或者低热量的代替蔗糖的甜味剂。甜菊糖(steviolglycosides)是从甜叶菊(Steviarehaudiana)叶片中提取分离得到的一类甜菊糖苷类化合物，具有高甜度(为蔗糖的250～300倍)、低热量(为蔗糖的1/300)，无毒副作用，无致癌物质，食用安全等优点，受到了科学界、产业界等多个领域的广泛重视，成为继甘蔗糖、甜菜糖之外的第三种具有开发价值和健康推崇的天然蔗糖替代品，被国际上誉为“世界第三糖源”。甜菊糖苷类化合物组分众多，均具有四环二萜母核并且有不同程度的糖基化修饰及不同程度的甜味口感，目前，被识别的甜菊糖苷化合物主要有甜菊苷(Stevioside.ST)、莱鲍迪苷A(RA)、莱鲍迪苷C(RC)、莱鲍迪苷D(RD)、莱鲍迪苷M(RM)等，其中，仅甜菊苷和莱鲍迪苷A被商业化应用，广泛用于饮料、食品、调味剂、酒类、乳制品等食品加工领域。虽然甜菊苷和莱鲍迪苷A具有低热量、高甜度，但是还存在除甜味之外的苦后味，其口感风味无法与蔗糖相当。而莱鲍迪苷D虽然与蔗糖口味相似，但是其溶解性不好。且目前，虽然有一些甜味剂组合物，但其制备方法均是采用较纯的原料复配得到，该方法对原料的纯度要求高，需要将原料提纯后再进行复配，成本较高。因此，需要开发一种新型的、生产成本低的、口感好的复合甜味剂，使其能够达到与蔗糖相似的口感风味，被广大消费者所接受。
技术实现思路
本专利技术解决的技术问题是提供一种口感好的的复合甜味剂。本专利技术复合甜味剂，由以下方法制备而成：以莱鲍迪苷A为底物，以重组微生物为催化剂，在蔗糖、氯化锌和柠檬酸三钠的存在下，催化底物进行反应，得到甜味剂组合物，其中，重组微生物的菌体浓度OD600为80～120，莱鲍迪苷A浓度为1～80g/L；柠檬酸三钠浓度为50～80mmol/L，氯化锌浓度为0.5～2mmol/L，蔗糖浓度为30～50％(W/V)，pH值为7.5～8.5，所述重组微生物含有EUGT11编码基因和UGT76G1编码基因。优选的，反应温度为35～40℃，反应时间为20～60h。作为优选方案，重组微生物的菌体浓度OD600为100，莱鲍迪苷A浓度为30g/L；柠檬酸三钠浓度为60mmol/L，氯化锌浓度为1mmol/L，蔗糖浓度为40％(W/V)，pH值为8.0。作为优选方案，反应温度为37℃，反应时间为24h。优选的，所述重组微生物为重组大肠杆菌、重组酵母菌、重组枯草芽孢杆菌、重组谷氨酸棒状杆菌或重组链霉菌。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：1)本专利技术复合甜味剂，采用全细胞催化转化而成，方法简单，控制转化条件可以得到特定配比的莱鲍迪苷D和莱鲍迪苷M的组合物，可以降低生产成本。2)本专利技术复合甜味剂，与蔗糖口感相似，不引入任何人工合成成分，纯天然，无能量，水溶性也较好。具体实施方式本专利技术复合甜味剂，采用全细胞催化合成，以莱鲍迪苷A为底物，以重组微生物为催化剂，在蔗糖、氯化锌和柠檬酸三钠的存在下，催化底物进行反应，得到甜味剂组合物，其中，重组微生物的菌体浓度OD600为80～120，莱鲍迪苷A浓度为1～80g/L；柠檬酸三钠浓度为50～80mmol/L，氯化锌浓度为0.5～2mmol/L，蔗糖浓度为30～50％(W/V)，pH值为7.5～8.5，所述重组微生物含有EUGT11编码基因和UGT76G1编码基因。通过该方法，能够将RA转化成RD和RM的混合物。本专利技术方法中，蔗糖浓度为重量体积比，即反应体系中的蔗糖重量与整个反应体系的体积之比，即W/V。优选的，反应温度为35～40℃，反应时间为20～60h。作为优选方案，重组微生物的菌体浓度OD600为100，莱鲍迪苷A浓度为5g/L；柠檬酸三钠浓度为60mmol/L，氯化锌浓度为1mmol/L，蔗糖浓度为40％(W/V)，pH值为8.0，反应温度为37℃，反应时间为24h。通过该方法，能够将RA转化成RD和RM的混合物，经HPLC进样检测，产物中莱鲍迪苷D:莱鲍迪苷M的重量比为3:1。采用本专利技术的复合甜味剂，不仅水溶性高，还具有与蔗糖相似的口感。其中，重组微生物含有的EUGT11编码基因为现有的，在GenBank数据库中可以查到(Genbankcode：AK121682)。UGT76G1为UDP-glycosyltransferase76G1，其氨基酸序列号为AAR06912.1，UGT76G1编码基因如序列1所示。该重组微生物可以采用现有的基因工程方法得到，比如，将水稻EUGT11编码基因、甜菊UGT76G1编码基因与载体连接构建重组质粒，然后转化到微生物中，得到重组微生物。为了提高RA的转化率，优选的，所述重组微生物为重组大肠杆菌、重组酵母菌、重组枯草芽孢杆菌、重组谷氨酸棒状杆菌或重组链霉菌。下面结合实施例对本专利技术的具体实施方式做进一步的描述，并不因此将本专利技术限制在所述的实施例范围之中。实施例11、重组微生物的制备：提取水稻(Oryzasativa)叶总RNA并通过反转录获得水稻cDNA。根据GeneBank数据库中的EUGT11基因序列(AccessionNo.AK121682)，设计PCR扩增引物，上下游引物分别引入BamHI、HindIII位点，PCR扩增得到EUGT11编码基因。提取甜叶菊总RNA并通过反转录获得水稻cDNA。根据GeneBank数据库中的EUGT11基因序列(AccessionNo.AK121682)，设计PCR扩增引物，上下游引物分别引入NdeI、XhoIII位点，PCR扩增得到UGT76G1编码基因。将EUGT11片段与表达载体pETDuet分别用BamHI和HindIII双酶切，回收目的片段后以连接酶进行连接，得到pETDuet-EUGT11。将UGT76G1片段与pETDuet-EUGT11分别用NdeI和XhoIII双酶切，回收目的片段后以连接酶进行连接，得到pETDuet-EUGT11-UGT76G1。将重组质粒pETDuet-EUGT11-UGT76G1转化至感受态细胞E.coliBL21(DE3)中，通过氨苄霉素抗性筛选，获得重组微生物。2、菌体培养及蛋白表达：挑单克隆接种于2mL含Amp(氨苄霉素，100μg/mL)的LB培养基中(20mL小试管)，37℃培养4h，然后1％接种于100mLM9培养基中(500mL三角瓶)，37℃，250r/m条件培养2h(OD600～0.6)，用自来水浸泡，冷却10min，加IPTG(工作浓度100mM)，置于22℃，180r/m条件下诱导表达20h，收菌，冰浴。M9培养基组分如表1：表1M9培养基组分1L用量备注5×M9盐200mL可合并灭菌(121℃20min)甘油4mL0.1MMgSO4(0.6g定容50mL)20mL单独灭菌(121℃20min)0.02MCACl2(0.11g定容50mL)5mL单独灭菌(121℃20min)5×M9盐组分为：Na2HPO4·12H2O本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复合甜味剂，其特征在于：由以下方法制备而成：以莱鲍迪苷A为底物，以重组微生物为催化剂，在蔗糖、氯化锌和柠檬酸三钠的存在下，催化底物进行反应，得到甜味剂组合物，其中，重组微生物的菌体浓度OD600为80～120，莱鲍迪苷A浓度为1～80g/L；柠檬酸三钠浓度为50～80mmol/L，氯化锌浓度为0.5～2mmol/L，蔗糖浓度为30～50％(W/V)，pH值为7.5～8.5，所述重组微生物含有EUGT11编码基因和UGT76G1编码基因。

【技术特征摘要】
1.一种复合甜味剂，其特征在于：由以下方法制备而成：以莱鲍迪苷A为底物，以重组微生物为催化剂，在蔗糖、氯化锌和柠檬酸三钠的存在下，催化底物进行反应，得到甜味剂组合物，其中，重组微生物的菌体浓度OD600为80～120，莱鲍迪苷A浓度为1～80g/L；柠檬酸三钠浓度为50～80mmol/L，氯化锌浓度为0.5～2mmol/L，蔗糖浓度为30～50％(W/V)，pH值为7.5～8.5，所述重组微生物含有EUGT11编码基因和UGT76G1编码基因。2.根据权利要求1所述的复合甜味剂，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：王勇，吕华军，孙雨伟，李建华，裴亮，华君，寇彦杰，
申请(专利权)人：四川盈嘉合生科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51