本发明专利技术公开了一种Plk3前列腺癌预后诊断检测试剂及其试剂盒，其试剂组成如下(20人份)：H2O21‑1.5ml、非免疫羊血清工作液1‑1.5ml、一抗：兔源抗Plk3多克隆抗体2.5‑20ul、二抗：生物素标记的羊抗兔的IgG工作液1ml、链霉菌抗生物素‑过氧化物酶溶液1ml、DAB显色剂2‑3ml。本Plk3前列腺癌预后诊断检测试剂盒，包含检测Plk3检测试剂。本发明专利技术能预测前列腺癌复发。
【技术实现步骤摘要】
Plk3前列腺癌预后诊断检测试剂及其试剂盒
本专利技术属于生物
，具体来说涉及的是一种Plk3前列腺癌预后诊断的检测试剂，同时还涉及该Plk3前列腺癌预后诊断检测试剂盒。
技术介绍
前列腺癌是全球男性生殖系统最常见的恶性肿瘤疾病，对老年男性而言，其发病率在所有恶性肿瘤中居第二位。不同国家的前列腺癌的发病率存在较大差异。美国的前列腺癌发病率已经超越肺癌，成为发病率最高的男性恶性肿瘤。而我国的前列腺癌发病率虽然远低于欧美国家，但近年来呈明显的上升趋势。当前对于局部前列腺癌主要治疗方法主要为手术治疗。然而，手术治疗后仍然会有部分患者会发生局部复发和(或)远处转移。对于发生临床复发的患者，其前期可能会发生生化复发。目前可以通过PSA预测作为前列腺癌的生化复发。尽管PSA的敏感性较强，但仍存在不足，其无法准确预测临床复发，而且无法预测患者是否会发生转移。而且其特异性不足，研究显示前列腺增生、前列腺炎、急性尿潴留等多种疾病均可引起血浆中PSA增多。因此，开发敏感性高、特异性强、结果稳定的肿瘤标记物是预测前列腺癌复发的重点研究方向。Polo样激酶(Polo-likekinases，Plks)家族是高度保守的丝-苏氨酸激酶，成员包括Plk1,Plk2,Plk3,Plk4和Plk5,在细胞周期中发挥重要作用。人细胞增殖相关激酶Prk(Proliferation-relatedkinase),1996年由WeiDai等首次克隆发现。是Plks家族的新成员,现已命名为Plk3(polo-likekinase3)。Plk3主要在细胞周期和应激反应中发挥重要作用。许多研究表明Plk3可通过影响细胞的G1/S和(或)G2/M期而影响其增殖。而前列腺癌的复发就与细胞休眠具有重要关系，休眠主要是因细胞周期阻滞而停止生长，因此Plk3可能通过影响细胞周期而导致其进入休眠转态。另外还有少量文献报道Plk3与癌症的转移相关。目前尚未见Plk3在前列腺癌中的表达及生物学作用方面的研究。而我们前期研究表明Plk3在前列腺癌组织的表达比癌旁增高，因此Plk3可能在前列腺癌的增殖和转移中发挥重要作用。有望对前列腺癌复发诊断提供新的辅助诊断标记物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能预测前列腺癌复发的Plk3前列腺癌预后诊断检测试剂。本专利技术的另一目的在于提供包含该Plk3前列腺癌预后诊断检测试剂的试剂盒。本专利技术的Plk3前列腺癌预后诊断检测试剂，其试剂组成如下(20人份)：本专利技术的Plk3前列腺癌预后诊断检测试剂盒，包含检测Plk3检测试剂。本试剂盒使用方法如下：(1)将经拷片脱蜡、水化和抗原修复后的切片置于孵育盒中，用阻水笔把组织圈住，以免滴加后的试剂扩散，吸水纸将切片上的水稍吸去，不要碰到组织，加H2O250ul覆盖组织后室温孵育30min，以阻断内源性过氧化物酶的活性；(2)PBS冲洗3min，重复3次；(3)吸水纸将切片上的PBS液稍吸去，滴加50ul非免疫羊血清工作液，室温下孵育15分钟；(4)轻轻甩去血清，不漂洗，滴加50ul一抗(2μg/ml兔源抗Plk3多克隆抗体)(Plk3抗体:PBS＝1:100)，室温下孵育60分钟或4℃过夜；(5)PBS冲洗5min，重复3次；(6)吸水纸将切片上的PBS液稍吸去，滴加50ul二抗：生物素标记的羊抗兔的IgG工作液，室温下孵育20分钟；(7)PBS冲洗5min，重复3次；(8)吸水纸将切片上的PBS液稍吸去，每张切片滴加50ul链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液，室温下孵育15分钟；(9)PBS冲洗3min，重复3次；(10)吸水纸将切片上的PBS液稍吸去，滴加100ul新鲜配制的DAB显色剂(20×DAB缓冲液、20×DAB底物、20×DAB色原各50μl滴加至850μl双蒸水中配制成1ml新鲜显色液，有效使用时间为30min)显色，自来水充分冲洗，复染，脱水透明，封片；(11)免疫组织化学检测结果判断结果判定标准：Leica荧光显微镜下，每张切片随机选取五个高倍镜视野观察细胞，细胞质和(或)细胞核出现棕黄或棕褐色颗粒为阳性细胞，根据阳性细胞染色强度以及阳性细胞在总细胞中所占数量比例判定实验结果。按染色强度评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；然后按阳性细胞率评分：肿瘤细胞内无阳性染色者为0分，阳性细胞率≤10％为1分，11％-50％为2分，51％-75％为3分，＞75％为4分.两者积分的乘积作为染色结果的评判标准：0定为-，阴性；1～4分为+，弱阳性；5～8分为++，阳性；9～12分为+++，强阳性。本专利技术与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知：本专利技术以Plk3作为预测前列腺癌复发的生物标记物，为前列腺癌的诊断及前列腺癌患者术后复发转移率、术后复发转移时间和生存时间的预测提供了一种切实可行的方法。附图说明图1—前列腺癌组织与癌旁组织中Plk3的表达情况。图2—前列腺癌中Plk3表达与无病生存预后相关。图3—前列腺癌中敲低Plk3抑制细胞的增殖。图4—前列腺癌中敲低Plk3抑制细胞的迁移。具体实施方式以下通过实验例来进一步证实本专利技术的有益效果。实施例：本试剂盒使用方法如下：(1)将经拷片脱蜡、水化和抗原修复后的切片置于孵育盒中，用阻水笔把组织圈住，以免滴加后的试剂扩散，吸水纸将切片上的水稍吸去，不要碰到组织，加H2O250ul覆盖组织后室温孵育30min，以阻断内源性过氧化物酶的活性；(2)PBS冲洗3min，重复3次；(3)吸水纸将切片上的PBS液稍吸去，滴加50ul非免疫羊血清工作液，室温下孵育15分钟；(4)轻轻甩去血清，不漂洗，滴加50ul一抗(2μg/ml兔源抗Plk3多克隆抗体)(Plk3抗体:PBS＝1:100)，室温下孵育60分钟或4℃过夜；(5)PBS冲洗5min，重复3次；(6)吸水纸将切片上的PBS液稍吸去，滴加50ul二抗：生物素标记的羊抗兔的IgG工作液，室温下孵育20分钟；(7)PBS冲洗5min，重复3次；(8)吸水纸将切片上的PBS液稍吸去，每张切片滴加50ul链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液，室温下孵育15分钟；(9)PBS冲洗3min，重复3次；(10)吸水纸将切片上的PBS液稍吸去，滴加100ul新鲜配制的DAB显色剂(20×DAB缓冲液、20×DAB底物、20×DAB色原各50μl滴加至850μl双蒸水中配制成1ml新鲜显色液，有效使用时间为30min)显色，自来水充分冲洗，复染，脱水透明，封片；(11)免疫组织化学检测结果判断结果判定标准：Leica荧光显微镜下，每张切片随机选取五个高倍镜视野观察细胞，细胞质和(或)细胞核出现棕黄或棕褐色颗粒为阳性细胞，根据阳性细胞染色强度以及阳性细胞在总细胞中所占数量比例判定实验结果。按染色强度评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；然后按阳性细胞率评分：肿瘤细胞内无阳性染色者为0分，阳性细胞率≤10％为1分，11％-50％为2分，51％-75％为3分，＞75％为4分.两者积分的乘积作为染色结果的评判标准：0定为-，阴性；1～4分为+，弱阳性；5～8分为++，阳性；9～12分为+++，强阳性。实验例：指示前列腺癌的增殖和转移的标记物的选择实验一：本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种Plk3前列腺癌预后诊断检测试剂，其试剂组成如下(20人份)：H2O2 1‑1.5ml非免疫羊血清工作液 1‑1.5ml一抗：兔源抗Plk3多克隆抗体 2.5‑20ul二抗：生物素标记的羊抗兔的IgG 工作液 1ml链霉菌抗生物素‑过氧化物酶溶液 1mlDAB显色剂 2‑3ml。
【技术特征摘要】
1.一种Plk3前列腺癌预后诊断检测试剂，其试剂组成如下(20人份)：H2O21-1.5ml非免疫羊血清工作液1-1.5ml一抗：兔源抗Plk3多克隆抗体2.5-20ul二抗：生物素标记的羊抗兔的IgG工作液1ml链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液1mlDAB显色剂2-3ml。2.如权利要求1所述的Plk3前列腺癌预后诊断检测试剂盒，包含检测Plk3检测试剂。3.如权利要求2所述的Plk3前列腺癌预后诊断检测试剂盒，其使用方法如下：(1)将经拷片脱蜡、水化和抗原修复后的切片置于孵育盒中，用阻水笔把组织圈住，以免滴加后的试剂扩散，吸水纸将切片上的水稍吸去，不要碰到组织，加H2O250ul覆盖组织后室温孵育30min，以阻断内源性过氧化物酶的活性；(2)PBS冲洗3min，重复3次；(3)吸水纸将切片上的PBS液稍吸去，滴加50ul非免疫羊血清工作液，室温下孵育15分钟；(4)轻轻甩去血清，不漂洗，滴加50ul一抗（2μg/ml兔源抗Plk3多克隆抗体）（Plk3抗体:PBS=1:100），室温下孵育60分钟或4℃过夜；(5)PBS冲洗5min，重复3次；(6)吸水纸将切片上的PBS液稍吸去，滴加50ul二抗：生物素标记的羊抗兔的...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄海，郭正辉，林春浩，赖义明，彭圣萌，
申请(专利权)人：中山大学孙逸仙纪念医院，
类型：发明
国别省市：广东,44
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