一种与肺腺癌相关的lncRNA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种与肺腺癌相关的基因的应用，所述基因为LINC02014，本发明专利技术首次发现了LINC02014的差异表达与肺腺癌的发生发展相关，并通过QPCR验证了LINC02014在肺腺癌患者中显著上调，提示该基因可作为诊断肺腺癌的指标应用于临床。本发明专利技术还公开了通过降低LINC02014的表达，可以有效的抑制肺腺癌细胞的增殖，降低肺腺癌细胞的迁移和侵袭率，提示LINC02014可作为药物靶点用于治疗肺腺癌及其转移。

【技术实现步骤摘要】
一种与肺腺癌相关的lncRNA及其应用
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种与肺腺癌相关的lncRNA及其应用，具体地涉及LINC02014在肺腺癌诊断和治疗中的应用。
技术介绍
自20世纪80年代起，肺癌已经逐步成为全球范围内发病率及致死率最高的癌症之一，而且发病率和致死率呈现逐年上升的趋势，跟据2016年美国癌症学会的调查统计数据显示，肺癌在男性和女性患者中的平均致死率分别为27％和26％，位居恶性肿瘤致死率之首。在我国，肺癌的发病率和病死率逐年上升，已经成为对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤。近年来，随着肺癌突变基因研究的不断深入和大量靶向药物的研究应用，肺癌的治疗逐步向以基因为导向的个体化治疗转变。在过去，人们将肺癌个体化治疗研究的重点放在编码基因上，而随着研究的不断深入人们发现长链非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)在恶性肿瘤发生发展过程中起着不可忽视的重要作用，同时其显著的肿瘤组织特异性及其应用于肿瘤诊断的可能性也使其日益成为肿瘤研究中新的热点。随着测序技术的不断发展，越来越多的研究者采用高通量基因组筛选技术，根据基因功能来鉴别新型肺癌。试图在对肺癌进行有效分型的基础上开发更精确的诊断工具，从而对肺癌进行更好的治疗。疾病的病理生理过程受基因的调控，真核细胞基因组由庞大复杂的DNA序列构成，通过转录成RNA表达和传递生物遗传信息。人类全基因组测序结果发现，仅有不到2％的基因序列参与蛋白质编码，而绝大多数非编码序列被转录成长度大于200个碱基的长链非编码RNA，参与基因表达的调控，促进或抑制多种肿瘤的发生、发展。一直以来，分子生物学研宄的焦点均集中在编码蛋白质的信使RNA(messengerRNA，mRNA)，而大量无蛋白编码功能的非编码RNA(non-codingRNA，ncRNA)被视为无生物学功能的“垃圾序列”而被长期忽视。ncRNA不具备典型的启始密码子、开放阅读框、启动子保守区及终止密码子等特性。根据ncRNA长度不同，ncRNA被分为小非编码RNA(smallnon-codingRNA，snRNA)和长链非编码RNA，其中lncRNA占80％。lncRNA由RNA聚合酶Ⅱ转录，参与表观遗传、可变剪接、入核转运等过程，其转录和功能失调可作为肿瘤抑制因子或促癌因子行使功能。因此，深入研究lncRNA生物学功能及其与疾病关系可为临床诊治提供新的思路。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的之一是提供一种与肺腺癌发生发展相关的分子标志物。本专利技术的目的之二是提供一种肺腺癌的诊断产品和手段，通过检测分子标志物的表达水平来判断患者是否患有肺腺癌或者患肺腺癌的风险。本专利技术的目的之三，提供一种治疗肺腺癌的药物组合或方法，通过特异性的下调分子标志物来治疗肺腺癌。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了检测LINC02014基因表达的试剂在制备诊断早期肺腺癌的产品中的应用。进一步，所述试剂选自：特异性识别LINC02014的探针；或特异性扩增LINC02014的引物。较佳的，所述的特异性扩增LINC02014基因的引物序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。本专利技术提供了一种诊断肺腺癌的产品，所述产品包括通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术检测样本中LINC02014基因的表达水平。其中，所述产品包括(但不限于)芯片、制剂或试剂盒。进一步，所述核酸扩增技术选自聚合酶链式反应、逆转录聚合酶链式反应、转录介导的扩增、连接酶链式反应、链置换扩增和基于核酸序列的扩增。本专利技术提供了LINC02014基因在制备预防或治疗肺腺癌的药物组合物中的应用。进一步，所述药物组合物包括LINC02014的下调剂。所述下调剂选自：以LINC02014或其转录本为靶序列、且能够抑制LINC02014基因表达或基因转录的干扰分子，包括：shRNA(小发夹RNA)、小干扰RNA(siRNA)、dsRNA、微小RNA、反义核酸，或能表达或形成所述shRNA、小干扰RNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸的构建物。进一步，所述的下调剂为siRNA。优选的所述siRNA序列如SEQIDNO.8、SEQIDNO.9所示。进一步，所述药物组合物还包括与所述下调剂配伍的其他药类以及药学上可接受的载体和/或辅料。本专利技术提供了LINC02014基因在筛选预防或治疗肺腺癌的潜在物质中的应用。本专利技术提供了一种筛选预防或治疗肺腺癌的潜在物质的方法，所述方法包括：用候选物质处理表达或含有LINC02014基因的体系；和检测所述体系中LINC02014基因的表达；其中，若所述候选物质可降低LINC02014基因的表达或活性，(优选显著降低，如低20％以上，较佳的低50％以上；更佳的低80％以上)，则表明该候选物质是预防或治疗肺腺癌的潜在物质。所述体系选自：细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系。所述潜在物质包括(但不限于)：针对LINC02014基因或其上游或下游基因设计的干扰分子、核酸抑制物、小分子化合物等。附图说明图1是利用QPCR检测LINC02014基因在肺腺癌组织中的表达情况图；图2是利用QPCR检测LINC02014在肺腺癌细胞中的转染情况图；图3是用CCK-8法检测LINC02014基因对肺腺癌细胞增殖的影响图；图4是用流式细胞仪检测LINC02014基因对肺腺癌细胞凋亡的影响图；图5-1是利用Transwell小室检测LINC02014对肺腺癌细胞迁移的影响图；图5-2是利用Transwell小室检测LINC02014对肺腺癌细胞侵袭的影响图。具体的实施方式本专利技术经过广泛而深入的研究，通过高通量方法，采用目前覆盖数据库最广的lncRNA芯片，检测肺腺癌标本中lncRNA在肿瘤组织和癌旁组织的表达，发现其中具有明显表达差异的lncRNA片段，探讨其与肺腺癌的发生之间的关系，从而为肺腺癌的早期检测及靶向治疗寻找更好的途径和方法。通过筛选，本专利技术首次发现了肺腺癌中LINC02014显著性上调。实验证明，siRNA干扰沉默LINC02014，能够有效地抑制肺腺癌细胞的增殖和侵袭，为肺腺癌的个性化治疗提供了新途径。分子标志物“分子标志物”是其在组织或细胞中的表达水平与正常或健康细胞或组织的表达水平相比发生改变的任何基因。本领域技术人员将认识到，本专利技术的实用性并不局限于对本专利技术的标志物基因的任何特定变体的基因表达进行定量。作为非限制性的实例，标志物基因可具有SEQIDNO.1指定的核苷酸序列。本专利技术可以利用本领域内已知的任何方法测定基因表达。本领域技术人员应当理解，测定基因表达的手段不是本专利技术的重要方面。可以在转录水平上检测生物标志物的表达水平。LINC02014基因LINC02014是位于人3号染色体上，NC_000003.12(130088863..130094304,complement)，核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术中的LINC02014包括野生型、突变型或其片段。本领域技术人员将认识到，本专利技术的实用性并不局限于对本专利技术的靶标基因的任何特定变体的基因表达进行定量。如果当核酸或其片段与其它核酸(或其互补链)最佳比对时(具有适当的核苷酸插入或缺失本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测LINC02014基因表达的试剂在制备诊断早期肺腺癌的产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测LINC02014基因表达的试剂在制备诊断早期肺腺癌的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂选自：特异性识别LINC02014的探针；或特异性扩增LINC02014的引物。3.一种诊断肺腺癌的产品，其特征在于，所述产品包括通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术检测样本中LINC02014基因的表达水平。4.根据权利要求3所述的产品，其特征在于，所述核酸扩增技术选自聚合酶链式反应、逆转录聚合酶链式反应、转录介导的扩增、连接酶链式反应、链置换扩增和基于核酸序列的扩增。5.LINC02014基因在制备预防或治疗肺腺癌的药物组合物中的应用。6.根据权利要求5所述的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄露宁，杨承刚，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11