一种诊断和治疗膀胱癌的分子标志物LncRNA DANCR及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种诊断和治疗膀胱癌的分子标志物，所述分子标志物为LncRNA DANCR。本发明专利技术还公开了所述分子标志物在筛选或制备用于诊断膀胱癌、膀胱癌淋巴转移、膀胱癌预后复发或膀胱癌临床分期的试剂中的用途以及所述分子标志物在筛选或制备治疗膀胱癌药物中的用途。本申请发现LncRNA DANCR在淋巴结转移的膀胱癌病例中高表达，与患者总体生存预后呈负相关，是诊断膀胱癌、判断膀胱癌进展和生存预后的独立指标；且沉默LncRNA DANCR能够抑制膀胱癌细胞体外的增殖、细胞迁移和侵袭，以及体内的成瘤和淋巴转移。本申请首次证实LncRNA DANCR是膀胱癌的一个重要致癌因子，可作为膀胱癌预后诊断的分子标志物和治疗的新靶点。

【技术实现步骤摘要】
一种诊断和治疗膀胱癌的分子标志物LncRNADANCR及其用途
本专利技术属于分子诊断和生物医药
，具体涉及一种诊断和治疗膀胱癌的分子标志物LncRNADANCR及其用途。
技术介绍
膀胱癌(BladderCancer，BCa)是我国泌尿男生殖系统最常见的恶性肿瘤。根据肿瘤细胞浸润深度分为非肌层浸润膀胱癌(Ta-1)和肌层浸润性膀胱癌(T2-4)，后者容易转移，进展和术后复发。膀胱癌致死的主要原因是转移，而淋巴转移是主要和首发的方式。淋巴转移是影响患者预后最重要的因素之一。一旦发生淋巴转移，5年生存率只有25-35％。因此，膀胱癌淋巴转移的早期诊断、准确预测和合理治疗对延长患者生存极为重要。虽然膀胱癌淋巴转移治疗取得了一些进展，但十几年来总体上患者生存率和生活质量提高并不明显。所以，临床上亟待发现预测膀胱癌淋巴转移和生存预后的标记物，以及开发减少或阻断膀胱癌转移的新治疗靶点。近年来大量研究表明，长链非编码RNA(LongNoncodingRNA，lncRNA)是指转录本长度大于200个核苷酸、不编码蛋白的非编码RNA亚类。目前已知lncRNA作为功能蛋白质的诱导分子、诱饵分子、支架分子等多种方式，在染色质重构、基因转录、翻译及蛋白修饰等多重水平调控基因表达网络。lncRNA在多种恶性肿瘤中表达异常，并通过对下游靶基因的调控，在肿瘤发生、发展中行使着重要的癌基因或抑癌基因的功能。最近的研究发现lncRNA也在膀胱癌中发挥重要作用。例如linc-UNMIBC在膀胱癌中高表达而且与复发相关，linc-UNMIBC通过PRC2复合物调控调控细胞周期，促进膀胱癌细胞的增殖。linc-UBC1在膀胱癌组织中过表达，与淋巴结转移和生存预后密切相关，它通过PRC2复合物而促进膀胱癌细胞增殖和迁移能力。目前的研究虽然揭示了lncRNA参与了膀胱癌的增殖、转移、凋亡等生物学功能，但是仍未能清楚阐明膀胱癌淋巴转移的发生机制。
技术实现思路
基于此，本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种诊断和治疗膀胱癌的分子标志物，所述分子标志物为LncRNADANCR，本申请首次发现LncRNADANCR是膀胱癌的一个重要致癌因子，可作为膀胱癌诊断和预后的分子标记物以及膀胱癌治疗的新靶点。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：LncRNADANCR基因或其表达产物作为分子标志物在筛选或制备用于诊断膀胱癌、膀胱癌淋巴转移、膀胱癌预后复发或膀胱癌临床分期的试剂或芯片中的用途。所述LncRNADANCR基因序列如SEQIDNO:1所示，基因ID为57291。本专利技术还提供了检测LncRNADANCR基因表达产物的试剂在制备用于诊断膀胱癌、膀胱癌淋巴转移、膀胱癌预后复发或膀胱癌临床分期的试剂盒中的用途。优选地，所述检测LncRNADANCR基因表达产物的试剂包括如SEQIDNO:2所示的探针和/或如SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示的引物。本专利技术还提供了一种诊断膀胱癌、膀胱癌淋巴转移、膀胱癌预后复发或膀胱癌临床分期的试剂盒，包含如SEQIDNO:2所示的探针和/或SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示的引物。本专利技术还提供了LncRNADANCR基因或其表达产物作为靶点在筛选或制备用于治疗膀胱癌药物中的用途。本专利技术还提供了LncRNADANCR基因表达的抑制剂在制备治疗膀胱癌药物中的用途。LncRNADANCR基因表达的抑制剂，如小干扰RNA(siRNA),反义核苷酸(ASO)和CRISPR/Cas9基因编辑等，可通过抑制LncRNADANCR基因表达或降低LncRNADANCR表达水平来治疗膀胱癌。优选地，所述抑制剂为抑制LncRNADANCR基因表达的siRNA。优选地，所述抑制LncRNADANCR基因表达的siRNA选自siRNA1、siRNA2和siRNA3中的至少一种；所述siRNA1序列如SEQIDNO:5所示；所述siRNA2的序列如SEQIDNO:6所示；所述siRNA3的序列如SEQIDNO:7所示。本专利技术还提供了一种治疗膀胱癌的药物，所述药物包含LncRNADANCR基因表达的抑制剂和药物学可接受的载体。优选地，所述抑制剂为抑制LncRNADANCR基因表达的siRNA。优选地，所述抑制LncRNADANCR基因表达的siRNA选自siRNA1、siRNA2和siRNA3中的至少一种；所述siRNA1序列如SEQIDNO:5所示；所述siRNA2的序列如SEQIDNO:6所示；所述siRNA3的序列如SEQIDNO:7所示。优选地，所述治疗膀胱癌的药物的剂型包括注射剂型或口服剂型。优选地，所述注射剂型包括注射液和冻干粉。优选地，所述口服剂型包括片剂、粉剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂和溶液剂。相对于现有技术，本专利技术的有益效果为：(1)本申请通过膀胱癌临床标本分析发现LncRNADANCR在淋巴结转移的膀胱癌病例中高表达，与总体生存预后呈负相关，是诊断膀胱癌、判断膀胱癌进展和生存预后的独立指标；(2)通过体内外功能实验发现沉默LncRNADANCR能够抑制膀胱癌细胞体外的增殖、细胞迁移和侵袭，以及体内的成瘤和淋巴转移；(3)本申请首次发现LncRNADANCR是膀胱癌的一个重要致癌因子，LncRNADANCR可作为膀胱癌诊断和预后的分子标志物以及膀胱癌治疗的新靶点。附图说明图1为LncRNADANCR在膀胱癌组织中的表达结果图，其中，图1A为LncRNADANCR在膀胱癌组织和正常组织中的表达结果图；图1B为LncRNADANCR在有淋巴结转移的膀胱癌组织和无淋巴结转移的膀胱癌组织中的表达结果图；图1C为LncRNADANCR表达水平与膀胱癌患者存活率相关性分析结果图；图1D为LncRNADANCR在细胞中的表达量和亚细胞定位结果图。图2为沉默LncRNADANCR抑制膀胱癌细胞的体外增殖能力结果图，其中，图2A为siRNA抑制LncRNADANCR表达的实验结果图；图2B为MTT实验结果图；图2C为克隆形成实验结果图。图3为沉默LncRNADANCR抑制膀胱癌细胞体外的迁移和侵袭能力结果图，其中，图3A为细胞迁移实验结果图；图3B为细胞侵袭实验结果图。图4为沉默LncRNADANCR抑制膀胱癌细胞体内成瘤实验结果图，其中，图4A为肿瘤体积检测结果图；图4B为肿瘤重量检测结果图；图4C为肿瘤大小检测结果图。图5为沉默LncRNADANCR抑制膀胱癌细胞体内淋巴转移实验结果图，其中，图5A为阳性淋巴结检测结果图；图5B为肿瘤重量检测结果图。具体实施方式为更好的说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。本申请中提及的细胞株及实验试剂等均有商品供应或以别的途径能为公众所得，它们仅做举例，对本专利技术不是唯一的，可分别用其他适合的工具和生物材料来代替。实施例1LncRNADANCR在膀胱癌中高表达，且与淋巴转移及预后不良相关本实施例利用实时荧光定量PCR法和RNA荧光原位杂交法检测LncRNADANCR在膀胱癌组织中的表达情况。(一)RNA提取及逆转录-实时荧光定量PCR实验1、总RNA提取：①组织RNA裂解：膀胱癌冰冻的新鲜组织是在液氮中研成小颗粒，再加1mlTrizol裂解本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.LncRNA DANCR基因或其表达产物作为分子标志物在筛选或制备用于诊断膀胱癌、膀胱癌淋巴转移、膀胱癌预后复发或膀胱癌临床分期的试剂或芯片中的用途。

【技术特征摘要】
2018.07.25 CN 20181083123151.LncRNADANCR基因或其表达产物作为分子标志物在筛选或制备用于诊断膀胱癌、膀胱癌淋巴转移、膀胱癌预后复发或膀胱癌临床分期的试剂或芯片中的用途。2.检测LncRNADANCR基因表达产物的试剂在制备用于诊断膀胱癌、膀胱癌淋巴转移、膀胱癌预后复发或膀胱癌临床分期的试剂盒中的用途。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述检测LncRNADANCR基因表达产物的试剂包括如SEQIDNO:2所示的探针和/或如SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示的引物。4.一种诊断膀胱癌、膀胱癌淋巴转移、膀胱癌预后复发或膀胱癌临床分期的试剂盒，其特征在于，包含如SEQIDNO:2所示的探针和/或SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示的引物。5.LncRNADANCR基因或其表达产物作为靶点在筛选或制备用于治疗膀胱癌药物中的用途。6.LncRNADANCR基因表达的抑制剂在制备治疗膀胱癌药物中的用途。7.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈旭，谢锐辉，林天歆，陈子月，
申请(专利权)人：中山大学孙逸仙纪念医院，
类型：发明
国别省市：广东,44