RIPOR3在制备用于乳腺癌检测和治疗的生物制品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了乳腺癌分子标记物RIPOR3在制备用于乳腺癌检测和治疗的生物制品中的应用，本发明专利技术人发现RIPOR3在乳腺癌组织或乳腺癌细胞中的表达下调。本发明专利技术还公开了用于乳腺癌检测或预后的试剂盒，所述试剂盒包括特异性扩增RIPOR3的引物序列。利用本发明专利技术的试剂盒进行乳腺癌的辅助诊断和预后评估，对后续临床治疗具有指导意义。另外，将RIPOR3用来制备治疗乳腺癌的药物组合物也可用于乳腺癌的基因治疗、药物治疗等临床应用。

【技术实现步骤摘要】
RIPOR3在制备用于乳腺癌检测和治疗的生物制品中的应用
本专利技术涉及肿瘤分子生物学
，具体涉及RIPOR3在制备用于乳腺癌检测和治疗的生物制品中的应用。
技术介绍
乳腺癌已成为世界上女性中发病率最高的肿瘤，严重影响女性的生命健康。尽管筛查方案和辅助疗法的发展取得了成功，但相当大比例的乳腺癌患者死于癌症转移。与其他大多数国家一样，乳腺癌也成为了中国女性最常见的癌症；每年中国乳腺癌新发数量占全球的12.2％，死亡数量占全球的9.6％。90年代以来，中国的乳腺癌发病率增长速度是全球的两倍多，城市地区尤为显著。乳腺癌诊治的关键在于早发现、早诊断和早治疗。癌基因的激活，或者抑癌基因的失活在肿瘤发生发展过程中起着关键作用。随着大规模、高通量测序技术的推广应用，发现新的癌基因和抑癌基因不仅为肿瘤的诊断和预后提供了颇具价值的标准，同时也为寻找新的肿瘤生物治疗靶点奠定基础。FAM65蛋白家族包括成员FAM65A(也称为Rho家族相互作用细胞极化调节蛋白1)，FAM65B(也称为Rho家族相互作用细胞极化调节蛋白2)和FAM65C(也称为Rho家族相互作用细胞极化调节蛋白3，即Rhofamily-interactingcellpolarizationregulator3,RIPOR3)。已显示FAM65A定位于足细胞主要过程和肾细胞体。FAM65B在肌细胞分化期间早期下调，并且以两种长和短的同种型发生，其在不同组织中差异表达。FAM65C(RIPOR3)似乎也发生在两种同种型中，通过可变剪接产生。RIPOR3基因位于染色体20的NC_000020.11位置，RIPOR3的参考包括NCBI(GenBank)参考序列转录变体1(NM_080829.3)及其编码的较短蛋白同种型1(NP_543019.2)；以及NCBI(GenBank)参考序列转录变体2(NM_001290268.1)及其编码的具有更长N-末端的较长蛋白同种型2(NP_001277197.1)，与变体1相比该变体2在5'UTR中不同并且使用替代的上游AUG。目前，关于RIPOR3基因或蛋白在乳腺癌中的作用机制尚不清楚，其功能和表达变化的临床意义尚未有报道。因此，分析RIPOR3基因与乳腺癌发生发展的关系，探索针对RIPOR3途径的肿瘤治疗和预警策略至关重要。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术一个目的是提供乳腺癌分子标记物RIPOR3在制备用于乳腺癌检测、预后或治疗的生物制品中的应用，其中所述分子标记物为RIPOR3基因或蛋白，其具有NCBI数据库的基因ID:140876所示人RIPOR3的NM_001290268.1或NP_001277197.1所示序列。如本专利技术所用，术语RIPOR3(Rho家族相互作用的细胞极化调节蛋白3)是指人RIPOR3基因或蛋白、或其同源物、或具有其生物活性的变体形式。本专利技术采用RT-PCR方法检测了RIPOR3基因在人乳腺癌组织和癌旁组织中的表达，并验证了RIPOR3基因在乳腺癌组织或乳腺癌细胞中表达下调。如本专利技术所用，术语“表达下调”是指所表达基因的序列量测量证明，相对于癌旁正常乳腺组织或健康人乳腺组织，所检测的患者乳腺癌组织中测量的该基因表达量具有至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％或更多的表达降低，例如乳腺癌组织中该基因表达量为正常乳腺组织中的90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％或更低。本专利技术一个方面提供了分子标记物RIPOR3在制备用于乳腺癌检测或预后的试剂盒中的应用，在一些实施方案中，所述RIPOR3为人RIPOR3。在本专利技术的一些实施方案中，所述检测或预后为根据所检测对象的生物样本中的RIPOR3表达水平来判断对象中乳腺癌的疾病状况、进行疗效评估或转移复发监控，优选所述生物学样本为乳腺癌组织或乳腺癌细胞。本专利技术另一个方面提供了用于乳腺癌检测或预后的试剂盒，其包含特异性扩增人RIPOR3基因的引物对，其中正向引物为如SEQIDNO.1所示的序列，反向引物为如SEQIDNO.2所示的序列；另外，用于扩增内参GAPDH的引物对为如SEQIDNO.3所示的正向引物和如SEQIDNO.4所示的反向引物。进一步地，所述试剂盒还包括RNA提取试剂、反转录试剂，以及PCR反应常用试剂如逆转录酶、缓冲液、dNTPs、MgCl2、DEPC水和Taq酶等，还可以含有标准品和/或对照品。本专利技术又一个方面提供了RIPOR3或其类似物或激动剂在制备预防或治疗乳腺癌的药物组合物中的应用，其中所述类似物或激动剂为具有RIPOR3生物活性的其变体形式。在本专利技术的一些实施方案中，所述药物组合物包括有效量的RIPOR3或其类似物或激动剂和药学上可接受的载体，进一步地所述药物组合物还包括预防或治疗乳腺癌的其他药剂。如本文所用，所述“有效量”是指可对哺乳动物(优选人)产生功能或活性的且可被哺乳动物(优选人)所接受的量。所述“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂；所述载体本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。所述合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。所述药物组合物中的药学上可接受的载体可含有液体如水、盐水、缓冲液，并且还可能存在辅助性物质如填充剂、润滑剂、助流剂、润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质等。所述载体中还可以含有细胞(如宿主细胞)转染试剂。本专利技术可以采用本领域熟知的多种方法来将RIPOR3蛋白、其类似物或激动剂、或其编码基因、或其药物组合物施用于患者如哺乳动物，优选人。包括但不限于：皮下注射、肌肉注射、经皮给予、局部给予、植入、缓释给予等；优选的，所述给药方式是非肠道给予的。也可选择采用基因治疗的手段进行乳腺癌的治疗，如直接将RIPOR3、其类似物或激动剂通过诸如注射等方法施用于患者；或者，可通过一定的途径将携带RIPOR3、其类似物或激动剂的表达单位如表达载体或病毒等递送到靶点上，并使之表达具有活性的RIPOR3、其类似物或激动剂，具体情况需视所述的药剂类型而定，这些均是本领域技术人员所熟知的。本专利技术的药物组合物可以进一步包含一种或多种抗癌剂。在具体的实施方案中，药物组合物包含至少一种促进RIPOR3基因表达的化合物和至少一种化疗剂。用于本专利技术的药物组合物中的化疗剂，包括但不限于：DNA-烷化剂、抗肿瘤抗生素剂、抗代谢剂、微管蛋白稳定剂、微管蛋白去稳定剂、激素拮抗剂、拓扑异构酶抑制剂、蛋白激酶抑制剂、HMG-COA抑制剂、CDK抑制剂、细胞周期蛋白抑制剂、胱天蛋白酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂、反义核酸、三链螺旋DNA、核酸适体和分子修饰的病毒、细菌和外毒素试剂。在本专利技术中，“预后”是指癌症患者在通过手术、化疗、药物治疗或其组合处理等抑制或缓解肿瘤生长后的过程或结果。预后可以是通过手术、化疗、药物治疗或其组合处理抑制或缓解乳腺癌生长后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20年或更久时的生机状态。预后可以通过检测标志物来评估，所述标志物为一个或多个基因。预后评估可以这样进行：根据标志物的有或无，或者升高或降低，确定患者的预后是否良好，或者确定良好预后或不良预后的概率。本专利技术的药物组合物还可与其他治疗乳腺癌的药物联用，其他治疗性化合物可以与本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.乳腺癌分子标记物RIPOR3在制备用于乳腺癌检测、预后或治疗的生物制品中的应用，其特征在于，所述分子标记物为RIPOR3基因或蛋白，其具有NCBI数据库的基因ID:140876所示人RIPOR3的NM_001290268.1或NP_001277197.1所示序列。

【技术特征摘要】
1.乳腺癌分子标记物RIPOR3在制备用于乳腺癌检测、预后或治疗的生物制品中的应用，其特征在于，所述分子标记物为RIPOR3基因或蛋白，其具有NCBI数据库的基因ID:140876所示人RIPOR3的NM_001290268.1或NP_001277197.1所示序列。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述分子标记物RIPOR3在患者的乳腺癌组织或乳腺癌细胞中表达下调。3.如权利要求1或2所述应用，其特征在于，所述生物制品为用于乳腺癌检测或预后的试剂盒。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测或预后为根据所检测对象的生物样本中的RIPOR3表达水平来判断对象中乳腺癌的疾病状况、进行疗效评估或转移复发监控。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：何劲松，韦伟，杨子健，李锋，刘宝儿，高睿，阳莉萍，
申请(专利权)人：北京大学深圳医院北京大学深圳临床医学院，
类型：发明
国别省市：广东,44