The invention relates to a preparation method of hemoglobin antibody, which comprises the following steps: separating and purifying hemoglobin from human whole blood, encapsulating hemoglobin with liposome, and immunizing animals to prepare hemoglobin antibody. The method is simple and easy to operate, and the antibody titer is high.
【技术实现步骤摘要】
一种血红蛋白抗体的制备方法
本专利技术涉及抗体制备领域，具体涉及一种血红蛋白抗体的制备方法。
技术介绍
结直肠癌(CRC)是一种常见的恶性肿瘤，其发病率在我国恶性肿瘤中居第五位，一般由良性腺瘤发展而来，早期发现对提高结直肠癌患者的治愈率和生存期有重要帮助。结直肠癌的早期筛查方法最常用的是粪便隐血试验，与传统的粪便隐血检测方法相比，免疫化学方法直接对粪便中的血红蛋白进行检测(粪便免疫化学检测法，FIT)具有很多优势。免疫法粪便隐血试验是结直肠癌筛查的新方法，使用针对血红蛋白中的珠蛋白成分的抗体，来检测粪便中的血红蛋白。FDA已经建议60岁以上人群，每年检查一侧FIT。FIT是利用单克隆抗体或多克隆抗体直接检测人粪便中的血红蛋白，不受进食食物的影响。定性FIT是在粪便中血红蛋白含量超过一定阈值后会产生可视性的颜色变化，定量FIT则可测量数值，当超过一定的正常范围后被定义为阳性，因此，制备需要高效价的血红蛋白抗体。在制备血红蛋白抗体的过程中，需要提取纯化血红蛋白，血红蛋白是一种构象不稳定的蛋白质分子，是一种结合蛋白血红素的四聚体蛋白质，在血红蛋白的提取过程中由于2,3-...
【技术保护点】
1.一种血红蛋白抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1:自人全血中分离纯化血红蛋白；S2:用脂质体包裹血红蛋白，得到脂质体包裹的血红蛋白；S3:用脂质体包裹的血红蛋白作为抗原免疫动物制备血红蛋白抗体。
【技术特征摘要】
1.一种血红蛋白抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1:自人全血中分离纯化血红蛋白；S2:用脂质体包裹血红蛋白，得到脂质体包裹的血红蛋白；S3:用脂质体包裹的血红蛋白作为抗原免疫动物制备血红蛋白抗体。2.根据权利要求1所述的一种血红蛋白抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤S1的具体步骤为：取健康人全血，4000rpm离心去除上清，沉淀用生理盐水洗涤2-4次，并用生理盐水配制成红细胞悬液，加入的生理盐水与全血的体积比为1.5～2.5:1，加入红细胞悬液10-15倍体积的10mMPH为7.4的磷酸钠缓冲液，低渗溶血1h，15000rpm4℃离心35～45min，取上清，将所述上清加入100kd的超滤管中，4000rpm离心20～30min，收集收集管中的液体，即为含有血红蛋白的溶液。3.根据权利要求1所述的一种血红蛋白抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤S2的具体步骤为：将氯仿和乙醚以2:3的体积比混合得到混合液，将大豆卵磷脂和胆固醇按照质量比为2:1加入混合液中得到类脂溶液，所述类脂溶液中大豆卵磷脂和胆固醇的质量分数为8～10mg/mL，将所述血红蛋白配制成浓度为6～7mg/mL的溶液，并用注射器缓慢滴加到类脂溶液中，血红蛋白溶液与所述类脂溶液的体积比为3:10，水浴超声5min，形成w/o型乳液，将乳液放置30min，若分层则重新配制，若不分层则将乳液置于旋转蒸发仪中37℃减压蒸发除去有机溶剂，达到胶合状态后，加水继续减压蒸馏直至凝胶自瓶壁上脱落，加入的水与所述类脂溶液的体积比为2～5:1，将凝胶过0.45μm微孔滤膜，得到乳白色脂质体混悬液，即为脂质体包裹的血红蛋白。4.根据权利要求1所述的一种血红蛋白抗体的制备方法，其特征在于，所述血红蛋白抗体为多克隆抗体，所述步骤S3包括以下步骤：S31:用所述脂质体包被的血红蛋白免疫动物，得到动物抗人血红蛋白...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡治勇，曾凡明，冉凯凯，
申请(专利权)人：武汉戴安生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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