地熊蜂actin蛋白的抗体及其制备方法技术

本发明专利技术提供了地熊蜂actin蛋白的抗体及其制备方法，属于蛋白质及抗体生物技术领域。本发明专利技术提供的地熊蜂actin蛋白的抗体，具有地熊蜂的actin蛋白的识别位点，特异的识别地熊蜂的actin蛋白，特异性较高。通过地熊蜂actin蛋白的抗体的制备方法能快速高效的制备出具有特异性的地熊蜂actin蛋白的抗体，操作简单方便，具有较高的使用应用价值。

【技术实现步骤摘要】
地熊蜂actin蛋白的抗体及其制备方法
本专利技术涉及蛋白质及抗体生物
，具体而言，涉及地熊蜂actin蛋白的抗体及其制备方法。
技术介绍
Actin是细胞的一种重要骨架蛋白；同时Actin在细胞分泌、吞噬、移动、胞质流动和胞质分离等过程中起重要作用。actin基因是当前昆虫基因功能研究中的看家基因，该基因在不同组织以及不同的个体间的表达量基本一致，可在昆虫基因表达研究中做为校正。Actin是WesternBlotting很好的内参基因。内参即是内部参照(InternalControl)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做校正。由于当前还没有商业用的膜翅目昆虫actin抗体，所以在研究地熊蜂功能基因的蛋白定位、表达以及生物学功能时，需要制备特定的actin抗体进行蛋白表达的校正，满足下一步的试验需要。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供地熊蜂actin蛋白的抗体，该抗体能特异识别地熊蜂actin蛋白。本专利技术的第二目的在于提供地熊蜂actin蛋白的抗体的制备方法，该方法能快速获得效价较高的地熊蜂actin蛋白的抗体，效果良好。为了实现本专利技术的上述目的，采用以下技术方案：地熊蜂actin蛋白的抗体，抗体识别的地熊蜂actin蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。地熊蜂actin蛋白的抗体的制备方法，包括以下步骤：合成如SEQIDNO.1所示地熊蜂actin蛋白的氨基酸序列作为多肽抗原序列；通过KLH偶联方法进行多肽链偶联并脱盐得到免疫抗原；将550-630μg免疫抗原注射入宿主动物进行免疫，并于第13-15日、第20-22日和第27-30日进行加强免疫；在第二次加强免疫时取血实验并观测宿主动物，在免疫第32-38天放血获得地熊蜂actin蛋白的抗体。与现有技术相比较，本专利技术的有益效果包括：本专利技术提供的地熊蜂actin蛋白的抗体，具有地熊蜂的actin蛋白的识别位点，特异的识别地熊蜂的actin蛋白，特异性较高。通过地熊蜂actin蛋白的抗体的制备方法能快速高效的制备出具有特异性的地熊蜂actin蛋白的抗体，操作简单方便，具有较高的使用应用价值。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实验例提供的westernblotting试验结果图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员应当理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例的地熊蜂actin蛋白的抗体及其制备方法进行具体说明。地熊蜂，Bombusterrestris，蜜蜂科熊蜂属的一种熊蜂。目前对地熊蜂功能基因的研究尚处于起步阶段，在地熊蜂的分子生物学研究中，目的蛋白表达量的测定试验较多。地熊蜂actin蛋白的抗体，抗体识别的地熊蜂actin蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，编码如SEQIDNO.1所示地熊蜂actin蛋白的碱基序列如SEQIDNO.2所示。本专利技术以地熊蜂actinN端360位-372位共13个氨基酸作为多克隆抗体制备的抗原表位，如SEQIDNO.1所示，其氨基酸序列为KQEYDESGPSIVH。编码该抗原表位的核苷酸序列SEQIDNO.2所示，其核苷酸的序列为：AAACAAGAATACGACGAGTCTGGACCATCCATCGTCCAC。编码如SEQIDNO.1所示的地熊蜂actin蛋白序列的碱基序列有很多条，本实施例中优选如SEQIDNO.2所示的核苷酸序列。地熊蜂actin蛋白的抗体的制备方法，包括以下步骤：合成如SEQIDNO.1所示地熊蜂actin蛋白的氨基酸序列作为多肽抗原序列；通过KLH偶联方法进行多肽链偶联并脱盐得到免疫抗原；将550-630μg免疫抗原注射入宿主动物进行免疫，并于第13-15日、第20-22日和第27-30日进行加强免疫；在第二次加强免疫时取血实验并观测宿主动物，在免疫第32-38天放血获得地熊蜂actin蛋白的抗体。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，多肽抗原序列的纯度大于75％。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，宿主动物为新西兰兔。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，免疫抗原的总注射量为1500μg。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，还包括地熊蜂actin蛋白的抗体的血清效价评价。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，血清效价评价包括将多肽抗原序列与BSA偶联脱盐得到多肽-BSA偶联剂，通过多肽抗原序列和多肽-BSA偶联剂进行包被，并用地熊蜂actin蛋白的抗体进行ELISA分析评价。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，多肽抗原序列的用量为0.5mL。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，多肽抗原序列和多肽-BSA偶联剂的包被量为100ng/孔。以下结合实施例对本专利技术的特征和性能作进一步的详细描述。实施例1本实施例提供地熊蜂actin蛋白的抗体，抗体的识别如SEQIDNO.1所示的地熊蜂actin蛋白的氨基酸序列；其氨基酸序列为KQEYDESGPSIVH。编码如SEQIDNO.1所示地熊蜂actin蛋白的抗体如SEQIDNO.2所示，其为：AAACAAGAATACGACGAGTCTGGACCATCCATCGTCCAC。实施例2本实施例提供地熊蜂actin蛋白的抗体的制备方法，地熊蜂actin蛋白的抗体识别如SEQIDNO.1所示的地熊蜂actin蛋白的氨基酸序列；其氨基酸序列为KQEYDESGPSIVH。制备方法的步骤如下：1.1根据SEQIDNO.1所示的地熊蜂actin蛋白的氨基酸序列合成纯度多肽序列，作为多肽抗原序列；1.2将多肽抗原序列通过KLH偶联方法进行多肽链偶联并脱盐得到免疫抗原；1.3将550μg免疫抗原注射入新西兰兔体内进行免疫，并在第13日注射450μg免疫抗原，在第20日注射350μg免疫抗原和第27日注射150μg免疫抗原举行多次加强免疫；1.4使抗体效价滴度大于1∶50000的效价标准；1.5在免疫的第27天每只免疫的兔子耳静脉取血2mL；实验兔子无异常则继续进行实验；1.6在免疫的第32天颈动脉放血；1.7用1mL地熊蜂actin蛋白制备免疫亲和组，选择信号较好的兔血进行纯化，取30mL的血清获得1-3mg的免疫亲和纯化的地熊蜂actin蛋白的抗体。ELISA检测抗血清效价，方法如下：2.1将BSA用MES溶解为10mg/mL的BSA溶液，去1mL加入0.4mgEDC-HCl和1.1mg的Sulfo-NHS活化15min；2.2加入0.5mL的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示地熊蜂actin蛋白进行偶联并脱盐得到多肽-BSA偶联剂，备用2.3用如SEQIDNO.1所示地熊蜂actin蛋白和多肽-BSA偶联剂进行ELISA多孔板进行包被，包被量为100ng/本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.地熊蜂actin蛋白的抗体，其特征在于，所述抗体识别的地熊蜂actin蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.地熊蜂actin蛋白的抗体，其特征在于，所述抗体识别的地熊蜂actin蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述的地熊蜂actin蛋白的抗体，其特征在于，编码所述如SEQIDNO.1所示地熊蜂actin蛋白的碱基序列如SEQIDNO.2所示。3.地熊蜂actin蛋白的抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：合成如SEQIDNO.1所示地熊蜂actin蛋白的氨基酸序列作为多肽抗原序列；通过KLH偶联方法进行多肽链偶联并脱盐得到免疫抗原；将550-630μg所述免疫抗原注射入宿主动物进行免疫，并于第13-15日、第20-22日和第27-30日进行加强免疫；在第二次加强免疫时取血实验并观测所述宿主动物，在免疫第32-38天放血获得地熊蜂actin蛋白的抗体。4.根据权利要求3所述的地熊蜂actin蛋白的抗体的制备方法，其特征在于，所述多肽抗原序列的纯度大于75％。5.根据权利要求4所...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐凯，牛庆生，刘玉玲，王志，王振伟，牛犇，
申请(专利权)人：吉林省养蜂科学研究所吉林省蜂产品质量管理监督站，吉林省蜜蜂遗传资源基因保护中心，
类型：发明
国别省市：吉林,22