亲和力改造的血清蛋白载体结合结构域制造技术

本公开内容涉及通过突变序列来调节特异于血清载体蛋白的结合结构域的半衰期的方法和经调节的特异于血清载体蛋白的结合结构域。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】亲和力改造的血清蛋白载体结合结构域本公开内容涉及通过突变序列来调节特异于血清载体蛋白的结合结构域的半衰期的方法和经调节的特异于血清载体蛋白的结合结构域。背景现已建立了通过靶向血清蛋白载体(例如人血清白蛋白(HSA))来增加生物药物的血清半衰期1,2。使用HSA是因为它的半衰期是19天。它是血清中丰度最高的蛋白质(34-54g/L)，并且广泛分布于组织中3。因此，它是对于结合易于获得且安全可靠的靶标，特别是因为占总量的一小部分的白蛋白被用于该方法。在血清蛋白中，只有IgG具有相似的长半衰期(21天)。HSA和IgG的长血清半衰期主要是由于新生儿Fc受体(FcRn)对细胞内溶酶体降解的保护作用4,5。FcRn将通过血管空间衬里的造血细胞和内皮细胞的血浆非特异性胞饮作用进入囊泡后HSA和IgG再循环回细胞表面。胞饮囊泡通过与早期内体融合而酸化，使得HSA和IgG能够以pH依赖性方式结合FcRn。携带膜受体(包括FcRn)和结合的HSA和IgG的囊泡再循环回细胞表面，而剩余的未结合的物质被引导至溶酶体进行降解。HSA和IgG在中性pH下与FcRn结合较弱，因此当再循环的囊泡暴露于血液的中性pH本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.结合结构域，其包含特异于血清载体蛋白的VH和VL，其中通过选自以下的修饰突变所述结合结构域：轻链可变结构域(VL)中的一个或两个氨基酸取代、重链可变结构域(VH)中的一个或两个突变及其组合，并且突变的结合结构域的半衰期高于或低于未突变的结合结构域的半衰期，条件是突变不是由以下组成的突变：SEQ ID NO：1的I50A，T56A，T95A，V96A，P97A，G98A，Y99A，S100A，T100Aa，Y100Ca，I50A和T95A，I50A和G98A，I50A和Y99A，T56A和T95A，T56A和G98A，以及T56A和Y99A。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.05.01 GB 1607636.6;2016.05.04 GB 1607828.91.结合结构域，其包含特异于血清载体蛋白的VH和VL，其中通过选自以下的修饰突变所述结合结构域：轻链可变结构域(VL)中的一个或两个氨基酸取代、重链可变结构域(VH)中的一个或两个突变及其组合，并且突变的结合结构域的半衰期高于或低于未突变的结合结构域的半衰期，条件是突变不是由以下组成的突变：SEQIDNO：1的I50A，T56A，T95A，V96A，P97A，G98A，Y99A，S100A，T100Aa，Y100Ca，I50A和T95A，I50A和G98A，I50A和Y99A，T56A和T95A，T56A和G98A，以及T56A和Y99A。2.权利要求1的结合结构域，其中所述血清载体蛋白选自甲状腺素结合蛋白、甲状腺素视黄质运载蛋白、α1-酸性糖蛋白、转铁蛋白、血纤蛋白原和白蛋白或其任何片段。3.权利要求2的结合结构域，其中所述血清载体蛋白是白蛋白，例如人血清白蛋白。4.权利要求3的结合结构域，其中所述结合结构域结合白蛋白的结构域II。5.权利要求1至4中任一项的结合结构域，其中所述突变是VL中的至少一个取代。6.权利要求5的结合结构域，其中所述突变是VL中一个氨基酸的取代。7.权利要求5的结合结构域，其中所述突变是VL中两个氨基酸的取代。8.权利要求5至7中任一项的结合结构域，其中突变位于选自L1、L2、L3及其组合的CDR中。9.权利要求8的结合结构域，其中所述CDR是L1。10.权利要求9的结合结构域，其中突变的氨基酸独立地选自位置26、27、28、29、30、31、32、33、34和35。11.权利要求10的结合结构域，其中所述位置是位置30。12.权利要求10或11的结合结构域，其中相关位置的氨基酸被疏水残基取代，所述疏水残基例如选自丙氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、脯氨酸和甘氨酸，例如丙氨酸。13.权利要求5至11中任一项的结合结构域，其中所述突变由对VL的修饰组成。14.权利要求1至12中任一项的结合结构域，其中所述突变位于VH结构域中。15.权利要求14的结合结构域，其中所述突变是VH中一个氨基酸的取代。16.权利要求14的结合结构域，其中所述突变是VH中两个氨基酸的取代。17.权利要求15或16的结合结构域，其中突变位于选自H1、H2、H3及其组合的CDR中。18.权利要求17的结合结构域，其中所述CDR是H2和/或H3。19.权利要求18的结合结构域，其中所述CDR是H2。20.权利要求14至19中任一项的结合结构域，其中突变的氨基酸独立地选自位置50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65。21.权利要求20的结合结构域，其中相关位置的氨基酸被疏水残基取代，所述疏水残基例如选自丙氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、脯氨酸和甘氨酸，例如丙氨酸。22.权利要求18至21中任一项的结合结构域，其中所述CDR是H3。23.权利要求22的结合结构域，其中所述突变的氨基酸独立地选自位置95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106或107。24.权利要求23的结合结构域，其中残基101是经突变的。25.权利要求23或24的结合结构域，其中相关位置的氨基酸被疏水残基取代，所述疏水残基例如选自丙氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、脯氨酸和甘氨酸，例如丙氨酸。26.前述权利要求中任一项的结合结构域，其中所述一个或多个氨基酸取代是非保守氨基酸取代。27.权利要求26的结合结构域，其中非保守氨基酸选自天然氨基酸丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸和谷氨酸。28.权利要求1至27中任一项的结合结构域，其中所述结合结构域包含CDR移植的可变结构域。29.权利要求28的结合结构域，其中所述结合结构域是人源化的。30.权利要求29的结合结构域，其中人源化的结合结构域在VH和/或VL中包含人框架。31.权利要求30的结合结构域，其中VH框架是人的(例如VH3，例如VH31-33-23)，例如包含1、2、3、4、5或6个氨基酸取代，例如其为供体残基的氨基酸。32.权利要求31的结合结构域，其中所述VH具有SEQIDNO：2、3、4、5或6(特别是SEQIDNO：5或6)或其任一个的具有至少95、96、9...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·亚当斯，S·P·海伍德，
申请(专利权)人：UCB生物制药私人有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时,BE