【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蜜蜂抗寒机制研究，具体而言，涉及一种珲春黑蜂特异性抗寒功能基因的筛选方法及其应用。
技术介绍
1、转录组测序是利用新一代测序技术进行转录组分析的技术，可以全面快速地获得特定细胞或组织在某一状态下几乎所有转录本的序列信息和表达信息，包括编码蛋白质的mrna和各种非编码rna，基因选择性剪接产生的不同转录本的表达丰度等。在分析转录本的结构和表达水平的同时，还发现未知转录本和稀有转录本，从而准确地分析基因表达差异、基因结构变异、筛选分子标记等生命科学的重要问题。
2、珲春黑蜂是吉林省的地方蜂种，主要分布于吉林东部山区的珲春市，具有抗寒、春季繁殖快、采集力强等品种优势。由于地处于高纬度地区，珲春黑蜂在冬季需要经历寒冷且漫长的冬季，当地最低气温达到-40℃，越冬时长接近5个月。珲春黑蜂在漫长的进化过程中与当地气候相适应，形成了特异性的抗寒机制，较养蜂生产中常见的引入蜂种在越冬损耗率和越冬饲料消耗方面具有明显的品种抗寒优势。然而目前暂无珲春黑蜂特异性抗寒功能基因筛选的研究，珲春黑蜂特异性抗寒机制尚不清楚。
3、鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种珲春黑蜂特异性抗寒功能基因的筛选方法及其应用，该方法能够筛选出珲春黑蜂特异性的抗寒功能基因，为阐明期特异性抗寒机制提供了理论基础。
2、本专利技术是这样实现的：
3、一方面，本专利技术提供了一种珲春黑蜂特异性抗寒功能基因的筛选方法，其包括：利用转录组测序
4、在一些实施例中，利用转录组测序分析不同时期的蜜蜂的胸部差异表达基因包括：分析夏繁时期和4个不同越冬期的珲春黑蜂胸部的差异表达基因，筛选出珲春黑蜂抗寒相关功能基因。
5、在一些实施例中，利用转录组测序分析不同品种的蜜蜂的胸部差异表达基因包括：分析珲春黑蜂与意大利蜜蜂、卡尼鄂拉蜂、高加索蜂和欧洲黑蜂在越冬期的胸部差异表达基因，筛选出珲春黑蜂相比引入蜂种的特异性的抗寒候选基因。
6、在一些实施例中，上述越冬期为外界夜晚的最低温度长时间在0℃及以下的时期。
7、在一些实施例中，上述筛选方法包括将所述珲春黑蜂抗寒相关功能基因与所述珲春黑蜂相比引入蜂种的特异性的抗寒候选基因进行分析，筛选出两者共有基因。
8、另一方面，本专利技术提供了上述珲春黑蜂特异性抗寒功能基因的筛选方法筛选的抗寒基因在调控蜜蜂抗寒性能或培育抗寒蜜蜂品种中的应用。
9、在一些实施例中，抗寒基因包括富含亮氨酸重复序列的蛋白家族成员40(leucine-rich repeat-containing protein 40，lrrc40)。
10、在一些实施例中，富含亮氨酸重复序列的蛋白家族成员40(lrrc40)基因的氨基酸序列如seq id no.1所示。
11、在一些实施例中，富含亮氨酸重复序列的蛋白家族成员40(lrrc40)基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。
12、在一些实施例中，上述蜜蜂包括珲春黑蜂。
13、本专利技术具有以下有益效果：
14、(1)本专利技术通过转录组测序分析不同时期和不同品种的蜜蜂的胸部差异表达基因，筛选出珲春黑蜂抗寒相关功能基因，该方法操作简单，数据分析容易。
15、(2)本专利技术筛选方法中选择的不同时期包括1-2个越夏期和3-4个越冬期，相比于现有技术只分析越夏期和1个越冬期，本专利技术的筛选方法获得的抗寒候选基因更优准确。
16、(3)本专利技术筛选方法中新增加了珲春黑蜂与4个引入蜂种越冬蜂的比较分析，能够筛选出珲春黑蜂特异性的抗寒相关基因。
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1.一种珲春黑蜂特异性抗寒功能基因的筛选方法，其特征在于，包括：利用转录组测序分析不同时期和不同品种的蜜蜂的胸部差异表达基因，筛选出珲春黑蜂特异性抗寒功能基因。
2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，利用转录组测序分析不同时期的蜜蜂的胸部差异表达基因包括：分析1-2个越夏期和3-4个不同越冬期的珲春黑蜂胸部的差异表达基因，筛选出珲春黑蜂抗寒相关功能基因。
3.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，利用转录组测序分析不同品种的蜜蜂的胸部差异表达基因包括：分析珲春黑蜂与意大利蜜蜂、卡尼鄂拉蜂、高加索蜂和欧洲黑蜂在越冬期的胸部差异表达基因，筛选出珲春黑蜂相比引入蜂种的特异性的抗寒候选基因。
4.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，所述越夏期为外界夜晚最低气温常在14℃以上；所述越冬期为外界夜晚最低温度长时间在0℃及以下的时期。
5.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括将所述珲春黑蜂抗寒相关功能基因与所述珲春黑蜂相比引入蜂种的特异性的抗寒候选基因进行分析，筛选出两者共有基因。
6.如权利要
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述抗寒基因包括富含亮氨酸重复序列的蛋白家族成员40。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述富含亮氨酸重复序列的蛋白家族成员40基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述富含亮氨酸重复序列的蛋白家族成员40基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述蜜蜂包括珲春黑蜂。
...【技术特征摘要】
1.一种珲春黑蜂特异性抗寒功能基因的筛选方法，其特征在于，包括：利用转录组测序分析不同时期和不同品种的蜜蜂的胸部差异表达基因，筛选出珲春黑蜂特异性抗寒功能基因。
2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，利用转录组测序分析不同时期的蜜蜂的胸部差异表达基因包括：分析1-2个越夏期和3-4个不同越冬期的珲春黑蜂胸部的差异表达基因，筛选出珲春黑蜂抗寒相关功能基因。
3.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，利用转录组测序分析不同品种的蜜蜂的胸部差异表达基因包括：分析珲春黑蜂与意大利蜜蜂、卡尼鄂拉蜂、高加索蜂和欧洲黑蜂在越冬期的胸部差异表达基因，筛选出珲春黑蜂相比引入蜂种的特异性的抗寒候选基因。
4.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，所述越夏期为外界夜晚最低气温常在14℃以上；所述越冬期为外界夜晚最低温度长时间在0℃及以下的时期。
...【专利技术属性】
技术研发人员：徐凯，杜亚丽，何金明，蒋海宾，吴鹰，孙智禹，刘玉玲，牛庆生，王志，兰凤明，
申请(专利权)人：吉林省养蜂科学研究所吉林省蜂产品质量管理监督站，吉林省蜜蜂遗传资源基因保护中心，
类型：发明
国别省市：
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