【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其是涉及一种基因工程化仿病毒的细菌外膜囊泡及其制备方法和应用。
技术介绍
1、肿瘤会通过免疫编辑过程降低自身的抗原性以逃脱免疫系统的监管。肿瘤即可以不表达抗原而直接实现免疫逃逸，也可以通过下调主要组织相容性复合体的表达或者干扰抗原肽和t细胞受体之间的相互作用而逃脱免疫监管。最终，免疫原性较弱的肿瘤细胞能选择性的增殖，并且经过不断地筛选使自身免疫原性逐渐丢失。同时，肿瘤环境会上调多种免疫检查点以进一步逃避免疫系统识别，而临床上以程序死亡配体1(programmed deathligand 1，pd-l1)等为靶点的检查点疗法仅对部分患者有效，并且免疫检查点疗法依然无法解决机体对丢失免疫原性肿瘤的识别的问题。
2、近年来，提高肿瘤细胞的免疫原性一直是免疫治疗的重点，而促进原位肿瘤异源化被认为是改善肿瘤免疫原性的有效方法。使用化学药物提高肿瘤突变的概率从而增强免疫系统对肿瘤的识别是肿瘤特异性异源化的策略之一，但是可能因为脱靶以及遗传造成免疫毒副作用。非特异性策略也可以触发有效的肿瘤异源化，如肿瘤免疫原性死亡的过程中将表达多种免疫激活型的损伤相关分子模式，但是大部分标志物都被释放到肿瘤微环境中而能够提高肿瘤自身免疫原性的标志物十分有限。因此，亟待开发一种新型肿瘤原位异源化的方式。
3、病原相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns，pamps)是一类可以被机体免疫细胞表面的模式识别受体高效识别的微生物来源物质，其对免疫细胞来说是异常强烈的识别和
4、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的第一目的在于提供一种基因工程化仿病毒的细菌外膜囊泡，以解决上述问题中的至少一种。
2、本专利技术的第二目的在于提供一种上述细菌外膜囊泡的制备方法。
3、本专利技术的第三目的在于提供上述细菌外膜囊泡在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
4、第一方面，本专利技术提供了一种基因工程化仿病毒的细菌外膜囊泡，包括细菌外膜囊泡和融合蛋白；
5、所述融合蛋白分布于细菌外膜囊泡上；
6、所述融合蛋白由n端至c端依次含有细菌外膜蛋白片段和水疱性口炎病毒蛋白(vsvg)。
7、作为进一步技术方案，所述细菌外膜蛋白片段包括细菌细胞溶素a蛋白(cytolysin a，clya)片段；
8、所述细菌细胞溶素a蛋白片段的核苷酸序列如seq id no.1所示。
9、作为进一步技术方案，所述水疱性口炎病毒蛋白的核苷酸序列如seq id no.2所示。
10、作为进一步技术方案，所述细菌外膜蛋白片段和水疱性口炎病毒蛋白通过连接肽连接；
11、所述连接肽的氨基酸序列如seq id no.3所示。
12、作为进一步技术方案，所述细菌外膜囊泡包括革兰氏阴性菌分泌的外膜囊泡。
13、作为进一步技术方案，还包括药物；
14、所述药物负载于细菌外膜囊泡的空腔中。
15、作为进一步技术方案，所述药物包括具有下调pd-l1表达功能的小干扰rna。
16、第二方面，本专利技术提供了上述细菌外膜囊泡的制备方法，包括以下步骤：
17、获得含有所述融合蛋白的基因的表达质粒，然后将质粒导入到细菌中表达，培养后收集细菌分泌的外膜囊泡，制备得到所述细菌外膜囊泡。
18、作为进一步技术方案，还包括将所述细菌外膜囊泡进行载药的步骤；
19、所述载药的方式包括电穿孔。
20、第三方面，本专利技术提供了上述细菌外膜囊泡在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
21、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
22、(1)本专利技术提供的仿病毒细菌外膜囊泡具有肿瘤细胞膜融合特性，可以通过使肿瘤表达细菌pamps成分来提高自身的异己性，因此是增强肿瘤异源化的新型有效方法；
23、(2)本专利技术提供的仿病毒细菌外膜囊泡通过对肿瘤的异源化改造，实现了抗原提呈细胞增强的吞噬行为，有利于肿瘤细胞全抗原的利用，以疫苗的形式促进抗原特异性免疫反应的发生；
24、(3)本专利技术提供的仿病毒细菌外膜囊泡通过基因工程方法获得，使得病毒来源的vsvg融合蛋白通过基因工程技术表达在omvs表面以制备vsvg工程化的vomvs；
25、(4)本专利技术提供的仿病毒细菌外膜囊泡具有优异的sirna递送能力，借助于vomvs的肿瘤膜融合策略提高了sipd-l1的肿瘤内化含量，并通过直接的胞质释放方式增强sipd-l1下调肿瘤免疫检查点pd-l1的功效；
26、(5)本专利技术提供的功能化仿病毒细菌外膜囊泡通过肿瘤异源化和免疫检查点调控的双重策略提高了免疫系统对肿瘤的识别，促进吞噬细胞对肿瘤的清除，极大地发挥功能囊泡的功效，最终激活t细胞依赖的抗肿瘤免疫反应。
27、(6)本专利技术提供的仿病毒细菌外膜囊泡在免疫、仿生改造、生物诊疗中有着重要应用前景。
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1.一种基因工程化仿病毒的细菌外膜囊泡，其特征在于，包括细菌外膜囊泡和融合蛋白；
2.根据权利要求1所述的细菌外膜囊泡，其特征在于，所述细菌外膜蛋白片段包括细菌细胞溶素A蛋白片段；
3.根据权利要求1所述的细菌外膜囊泡，其特征在于，所述水疱性口炎病毒蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.根据权利要求1所述的细菌外膜囊泡，其特征在于，所述细菌外膜蛋白片段和水疱性口炎病毒蛋白通过连接肽连接；
5.根据权利要求1所述的细菌外膜囊泡，其特征在于，所述细菌外膜囊泡包括革兰氏阴性菌分泌的外膜囊泡。
6.根据权利要求1所述的细菌外膜囊泡，其特征在于，还包括药物；
7.根据权利要求6所述的细菌外膜囊泡，其特征在于，所述药物包括具有下调PD-L1表达功能的小干扰RNA。
8.权利要求1-7任一项所述细菌外膜囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，还包括将所述细菌外膜囊泡进行载药的步骤；
10.权利要求1-7任一项所述的细菌外膜囊
...【技术特征摘要】
1.一种基因工程化仿病毒的细菌外膜囊泡，其特征在于，包括细菌外膜囊泡和融合蛋白；
2.根据权利要求1所述的细菌外膜囊泡，其特征在于，所述细菌外膜蛋白片段包括细菌细胞溶素a蛋白片段；
3.根据权利要求1所述的细菌外膜囊泡，其特征在于，所述水疱性口炎病毒蛋白的核苷酸序列如seq id no.2所示。
4.根据权利要求1所述的细菌外膜囊泡，其特征在于，所述细菌外膜蛋白片段和水疱性口炎病毒蛋白通过连接肽连接；
5.根据权利要求1所述的细菌外膜囊泡，其特征在于，所述细菌外...
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