细胞介导的免疫应答力试验制造技术

本公开内容一般涉及基于免疫学的诊断试验领域，包括检测细胞介导的免疫应答力的试验。本公开内容指导基于对象的细胞介导的免疫应答力来测定病症的阶段、发展和/或严重性。本文预期的试验能够整合到标准病理学架构中以提供诊断报告系统并方便医疗点临床管理。

【技术实现步骤摘要】
细胞介导的免疫应答力试验本专利技术专利申请是国际申请号为PCT/AU2012/000413，国际申请日为2012年4月10日，进入中国国家阶段的申请号为201280030886.3，名称为“细胞介导的免疫应答力试验”的专利技术专利申请的分案申请。申请数据本申请联系并要求2011年4月29日提交的题为“细胞介导的免疫应答力试验”的美国临时专利申请61/480,913号的优先权，其全文内容通过引用纳入本文。
本公开内容一般涉及基于免疫学的诊断试验领域，所述基于免疫学的诊断试验包括检测细胞介导的免疫应答力试验。本公开内容指导基于对象的细胞介导的免疫应答力测定病症的阶段、发展和/或严重性。本文预期的试验能够整合到标准病理学架构中以提供诊断报告系统并方便医疗点临床管理。
技术介绍
关于本说明书中作者的发表物详细书目在说明书的结尾按字母顺序集中。在该说明书中参考的任何现有技术不应认为或不应作为承认或任何形式暗示表明该现有技术在任何国家中构成一般常识的一部分。基于免疫学的诊断试验是检测各种病症的重要手段。这些试验类型的效果部分在于免疫系统内成分的特异性。尽管有此特异性，基于免疫学的诊断并不必总是足够灵敏以检测低水平的获得性和/或先天免疫应答活性，例如响应低度感染或出现持续低水平感染或者具有活性或潜在疾病状态的对象。需要开发在细胞介导的免疫应答力方面灵敏度提高的诊断试验。基于免疫学的一种诊断方法形式涉及在分离细胞培养或全血液培养中用抗原或有丝分裂原激活T细胞，然后检测效应分子，例如经刺激的T细胞(也称为效应T细胞)生成的细胞因子。效应分子一般用诸如酶免疫分析、多元珠分析、酶联免疫斑点法(ELISpot)和流式细胞仪等技术检测。这些试验用于检测疾病特异性T细胞应答。T细胞试验的一个示例是QuantiFERON(注册商标；Cellestis有限公司)。这在后文被称为“QFT”，并且是基于干扰素-γ(IFN-γ)释放实验(IGRA)的测试。另一种试验使用抗CD3抗体(T细胞受体激动剂)和Toll样受体(TLR)激动剂(R848)直接刺激高度纯化的人T细胞。然而，并非所有效应分子都被检测到并且该试验不适用于全血。快速评估细胞介导免疫性的能力和具有高度的灵敏度是具有临床重要性的。临床医师需要对疾病状态的发展及其对宿主免疫系统的影响做出正确评价。但是，需要改进对象内细胞介导的免疫应答力试验的灵敏度。
技术实现思路
本文提供用于检测对象内细胞介导的免疫应答的方法，所述方法包括使用以下物质孵育所述对象的淋巴细胞：(i)抗原；和(ii)限制量的Toll样受体(TLR)激动剂；然后筛选由活化的淋巴细胞产生的效应分子的水平。所述TLR激动剂的“限制量”指如下描述的一种试剂的量：(i)当该试剂与淋巴细胞在抗原不存在下孵育时诱导最小背景应答；和/或(ii)以试剂对抗原比例为1:50～1:1.5存在；和/或(iii)具有低于抗原量的浓度；和/或(iv)是次佳的试剂量，所述试剂量为其它情况下在QFT-Nil抗原管中产生应答所需。抗原和所述限制量的TLR激动剂和淋巴细胞的共孵育导致更灵敏的试验，使对淋巴细胞刺激的检测比其它可能的检测更早。所述增加的灵敏度包括：相较于非限制量的TLR激动剂的共孵育，对效应分子的检测增加至少10％。增加细胞介导的免疫应答试验灵敏度的能力还能使检测效应分子的较低敏感方法可行。此外，在本文公开的试验中的细胞介导的免疫应答的检测的量级可能与疾病阶段、发展和/或严重性相关。因此，本公开内容指导对象内细胞介导的免疫应答力的试验。因此，本文提供用于检测对象内细胞介导的免疫应答活性的方法，所述方法包括使所述对象的淋巴细胞接触抗原和限制量的TLR激动剂并检测免疫细胞的免疫效应分子的存在或水平升高，其中，所述免疫效应分子的存在或水平指示所述对象的细胞介导的应答力水平。TLR激动剂包括TLR-7/8、TLR-4、TLR-3或TLR-2激动剂。示例包括咪唑喹啉，R848，脂甘露聚糖和聚(I:C)。在一个实施方式中，所述TLR激动剂是TLR7/8激动剂R848。有用的是，所述对象是人且所述样品是未经稀释的全血。或者，所述样品是包含约10％～100％的待测样品体积，或者包含约50％～100％的待测样品体积，或者包含约80％～100％的待测样品体积的全血。所述样品体积可以为微升量或毫升量，例如0.5μL～5mL。方便而言，将所述全血收集在含有肝素的管中，且所述免疫效应分子是IFN-γ。一般而言，所述免疫效应子采用其特异性抗体例如使用ELISA或ELISpot检测。所述对象可受选自分枝杆菌(Mycobacterium)属例如结合分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)或结核(TB)、葡萄球菌(Staphylococcus)属、链球菌(Streptococcus)属、包柔氏螺旋体菌(Borrelia)属、大肠杆菌(Escherichiacoli)、沙门氏菌(Salmonella)属、梭状芽孢杆菌(Clostridium)属、志贺菌(Shigella)属、变形杆菌(Proteus)属、芽孢杆菌(Bacillus)属、疱疹病毒、乙型或丙型肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒(HIV)的病原剂感染或患有其导致的疾病。或者，所述对象患有选自以下的病症：乳糜泻、自体免疫性糖尿病、斑秃、关节强硬性脊椎炎、抗磷脂综合症、自体免疫阿狄森氏病多发性硬化症、肾上腺自体免疫疾病、自体免疫溶血性贫血、自体免疫肝炎、自体免疫卵巢炎和睾丸炎、白赛氏(Behcet's)病、大疱性类天疱疹、心肌病、口炎性腹泻皮炎(celiacsprue-dermatitis)、慢性疲劳综合症(CFIDS)、慢性炎症脱髓鞘、慢性炎症多神经病、丘-施二氏综合症、瘢痕性类天疱疮、CREST综合症、冷凝集素病、克罗恩氏病、疱疹样皮炎、盘状红斑狼疮、基本混合冷球蛋白血症、纤维组织肌痛、肾小球肾炎、格雷弗氏病、格林-巴利症、乔本氏甲状腺炎、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA肾病、胰岛素依赖型糖尿病(I型)、扁平苔藓、狼疮、梅尼埃氏病、混合型结缔组织病、多发性硬化症、重症肌无力、心肌炎、寻常性天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合症、风湿性多肌痛、多发性肌炎和皮肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺氏现象、赖特尔综合症、风湿热、类风湿关节炎、肉状瘤症、硬皮病、舍格伦综合症、僵人综合症、系统性红斑狼疮、高安氏动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎、白斑和炎性肠病。或者，所述对象可患有选自以下的癌症：ABL1原癌基因、AIDS相关癌症、听神经瘤、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞白血病、腺样囊腺癌、肾上腺皮质癌、特发性髓样化生、秃头症、泡软组织肉瘤、肛门癌、血管肉瘤、再生障碍性贫血、星形胶质细胞瘤、共济失调毛细血管扩张症、基底细胞癌(皮肤)、膀胱癌、骨癌、肠癌、脑干胶质瘤、脑和CNS肿瘤、乳腺癌、CNS肿瘤、类癌瘤、子宫颈癌、儿童脑肿瘤、儿童癌症、儿童白血病、儿童软组织肉瘤、软骨肉瘤、绒毛膜癌、慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞白血病、结直肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、隆凸性皮肤纤维肉瘤、促纤维组织增生性小细胞癌、导管癌、内分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.肽抗原和Toll样受体激动剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测对象内细胞介导的免疫应答活性的方法中，所述方法包括使来自所述对象的淋巴细胞接触所述抗原和浓度为0.01μg/ml到0.1μg/ml的所述Toll样受体激动剂，并检测来自免疫细胞的免疫效应分子的存在或水平升高，其中，所述免疫效应分子的存在或水平指示所述对象的细胞介导的应答力的水平，且其中，所述Toll样受体激动剂是咪唑喹啉。

【技术特征摘要】
2011.04.29 US 61/480,9131.肽抗原和Toll样受体激动剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测对象内细胞介导的免疫应答活性的方法中，所述方法包括使来自所述对象的淋巴细胞接触所述抗原和浓度为0.01μg/ml到0.1μg/ml的所述Toll样受体激动剂，并检测来自免疫细胞的免疫效应分子的存在或水平升高，其中，所述免疫效应分子的存在或水平指示所述对象的细胞介导的应答力的水平，且其中，所述Toll样受体激动剂是咪唑喹啉。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述对象是人。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述样品是未经稀释的全血。4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述全血收集在含有肝素的管中。5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述免疫效应分子是干扰素-γ。6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述免疫效应分子用其特异性抗体检测。7.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述对象患有由致病体所致的感染，所述致病体选自下列：分枝杆菌属(Mycobacterium)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)、包柔氏螺旋体菌属(Borrelia)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、沙门氏菌属(Salmonella)、梭状芽孢杆菌属(Clostridium)、志贺菌属(Shigella)、变形杆菌属(Proteus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、疱疹病毒、乙型或丙型肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒。8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述对象患有由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)所致的感染。9.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述对象患有选自下列的病症：脱发斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合症、自体免疫阿狄森氏病多发性硬化症、肾上腺自体免疫疾病、自体免疫溶血性贫血、自体免疫肝炎、自体免疫卵巢炎和睾丸炎、白塞氏病、大疱性类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻皮炎、慢性疲劳综合症、慢性炎症脱髓鞘、慢性炎症多神经病、变应性肉芽肿性血管炎、瘢痕性类天疱疮、CREST综合症、冷凝集素病、克隆氏病、疱疹样皮炎、盘状红斑狼疮、基本混合冷球蛋白血症、纤维组织肌痛、肾小球肾炎、格雷弗氏病、格林-巴利症、桥本甲状腺炎、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜、IgA肾病、胰岛素依赖型糖尿病、扁平苔藓、红斑狼疮、梅尼埃病、混合性结缔组织病、多发性硬化症、重症肌无力、心肌炎、寻常性天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合症、风湿性多肌痛、多发性肌炎和皮肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺氏现象、赖特尔综合症、风湿热、类风湿关节炎、结节病、硬皮病、舍格伦综合症、全身肌强直综合症、系统性红斑狼疮、多发性大动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎、白癜风和炎症性肠病。10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述疾病是乳糜泻。11.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述对象患有选自以下的癌症：ABL1原癌基因、AIDS相关癌症、听神经瘤，急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞白血病、腺样囊腺癌、肾上腺皮质癌、特发性髓样化生、秃头症、泡软组织肉瘤、肛门癌、血管肉瘤、再生障碍性...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·伯勒，E·曼科特罗，
申请(专利权)人：塞尔雷斯蒂斯有限公司，
类型：发明
国别省市：澳大利亚,AU