具有增强灵敏度的细胞介导免疫应答测定制造技术

本申请涉及具有增强灵敏度的细胞介导免疫应答测定。本公开一般涉及基于免疫学的诊断测定领域，所述基于免疫学的诊断测定包括检测细胞介导的免疫应答的测定。本发明专利技术教导了以具有增强灵敏度的细胞介导免疫应答为基础的对象接触抗原的诊断。将来自对象的淋巴细胞与至少第一组和第二组肽接触，第一组包括至少一种7

【技术实现步骤摘要】
具有增强灵敏度的细胞介导免疫应答测定
[0001]本申请是中国专利申请号201810440565.X的分案申请。
[0002]申请数据
[0003]本专利技术与2011年6月29号提交的题为“具有增强灵敏度的细胞介导免疫应答测定”的美国临时专利申请号61/502,811相关并要求优先权，其全部内容通过引用纳入本文。


[0004]本公开一般涉及基于免疫学的诊断测定领域，所述基于免疫学的诊断测定包括检测细胞介导免疫应答的测定。本专利技术教导了以具有增强灵敏度的细胞介导免疫应答为基础的对象接触抗原的诊断。本文预期的测定能够整合到标准病理学架构中以提供诊断报告系统和促进临床护理管理。
[0005]专利技术背景
[0006]本说明书中作者的发表物详细书目在说明的结尾按字母顺序集中。
[0007]在该说明书中参考任何现有技术不应作为或不应视作承认或任何提示形式表明该现有技术在任何国家中构成一般常识的一部分。
[0008]基于免疫学的诊断测定是检测各种疾病状况的重要工具。这些测定类型的有效性取决于免疫系统内成分的特异性。尽管有这种特异性，基于免疫学的诊断对于检测低级感染或持续低水平感染的存在或在具有活性或潜伏感染疾病状态的对象中不总是足够灵敏。需要开发在细胞介导免疫应答方面具有增强灵敏度的诊断测定。
[0009]基于免疫学的一种诊断方法形式涉及分离细胞培养或全血液培养中抗原或有丝分裂原的T细胞激活，然后是检测效应分子，例如经刺激的T细胞(也称为效应T细胞)生成的细胞因子。效应分子一般用诸如酶免疫分析，多元珠分析，酶联免疫斑点法(ELISpot)和流式细胞仪等技术检测。这些测定用于检测疾病特异性T细胞反应。T细胞的一个例子是QuantiFERON(注册商标；塞尔雷斯蒂斯有限公司(Cellistis Limited))。另一种测定使用15聚体肽抗原以刺激T细胞。然而，这样长度的肽尽管能够被CD4
+ T细胞检测到，但是其太长以至于不能被CD8
+ T细胞检测到。
[0010]快速评估细胞介导免疫的能力并且具有高度的灵敏度在临床上具有重要意义。尤其在免疫系统受损患者的情况中。临床医师需要对疾病状态的发展及其对宿主免疫系统的影响做出正确评价。
[0011]但是，需要改进对象内细胞介导免疫应答测定的灵敏度。
[0012]专利技术概述
[0013]本文提供了用于检测对象中细胞介导免疫应答的方法，所述方法包括将来自对象的淋巴细胞与衍生自蛋白抗原的肽孵育，所述肽包括一组每个有约7
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14个氨基酸长度的肽与一组超过15个氨基酸长度的肽的组合，其包括全部或部分的所述蛋白抗原，并且然后筛选由活化淋巴细胞产生的效应分子水平。
[0014]“约7
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14个氨基酸”表示7、8、9、10、11、12、13或14个氨基酸。这在本文视作第一组肽。“超过15个氨基酸”指从16个氨基酸至蛋白抗原的全长，包括16
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50个氨基酸。这视作第
二组肽。本方法不限于哪组肽称为第一组或第二组。每个组包括从至少一个肽到一系列重叠的肽。
[0015]衍生自蛋白抗原的7
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14个氨基酸的肽和超过15个氨基酸的肽与淋巴细胞共同孵育得到更灵敏的测定，使得能够比其他情况更早检测淋巴细胞刺激成为可能。增加的灵敏度包括与用衍生自抗原的7
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14个氨基酸范围内或＞15个氨基酸范围内或全抗原自身的单个肽共孵育相比增加至少10％的效应分子检测。增加细胞介导免疫应答测定灵敏度的能力还能使检测效应分子的较低灵敏度方法可行。此外，在所公开测定中检测的细胞介导免疫应答的量级可能与疾病阶段、发展和/或严重性相关。因此，本公开指导对象内细胞介导免疫应答的测定。
[0016]本专利技术不限于任意某个理论或作用模式，两组肽即7
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14聚体肽和＞15聚体肽能够被CD4
+
和CD8
+ T细胞同时检测。CD4
+ T细胞识别＞15聚体肽而CD8
+ T细胞识别7
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14聚体肽。这些肽可在本文称为“CD4
+
肽”(＞15聚体肽)或“CD8
+
肽”(7
‑
14聚体肽)。
[0017]因此在本文中提供了一种用于测定对象中细胞介导免疫应答活性的方法，所述方法包括使来自对象的淋巴细胞与至少两组肽接触，第一组包括一种或多种约7
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14个氨基酸残基长度的肽，而第二组包括一种或多种16个或更多氨基酸的肽，其全部或部分的包括抗原蛋白，并且测量来自免疫细胞的免疫效应分子的出现或水平升高，其中所述免疫效应分子的出现或水平指示对象对于抗原的细胞介导应答水平。
[0018]有用的是，所述对象是人且所述样品是未经稀释的全血。或者，所述样品是占待测样品体积约10％
‑
100％的全血，或者占待测样品体积约50％
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100％的全血，或者包含待测样品体积约80％
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100％的全血。所述样品体积可以为微升量或毫升量，例如0.5μL
‑
5mL。方便而言，将所述全血收集在含有肝素的试管中，且所述免疫效应分子是IFN
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γ。一般，所述免疫效应分子采用特异性的抗体例如使用ELISA或ELISpot检测。
[0019]所述对象可由选自以下的病原体导致的感染：分枝杆菌(Mycobacterium)属例如结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)或结核(TB)、葡萄球菌(Staphylococcus)属、链球菌(Streptococcus)属、包柔氏螺旋体菌(Borrelia)属、大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella)属、梭状芽孢杆菌(Clostridium)属、志贺菌(Shigella)属、变形杆菌(Proteus)属、芽孢杆菌(Bacillus)属、疱疹病毒、乙型或丙型肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒(HIV)的病原体感染或患有其导致的疾病。
[0020]或者，所述对象患有选自以下的病症：乳糜泻、自身免疫性糖尿病、斑秃、关节强硬性脊椎炎、抗磷脂综合症、自身免疫阿狄森氏病多发性硬化症、肾上腺自身免疫疾病、自身免疫溶血性贫血、自身免疫肝炎、自身免疫卵巢炎和睾丸炎、白赛氏(Behcet
′
s)病、大疱性类天疱疹、心肌病、口炎性腹泻皮炎(celiac sprue
‑
dermatitis)、慢性疲劳综合症(CFIDS)、慢性炎症脱髓鞘、慢性炎症多神经病、丘
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施二氏综合症、瘢痕性类天疱疮、CREST综合症、冷凝集素病、克罗恩氏病、疱疹样皮炎、盘状红斑狼疮、原发性混合型冷球蛋白血症、纤维组织肌痛、肾小球肾炎、格雷弗氏病、格林
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巴利症、乔本氏甲状腺炎、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA肾病、胰本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于测定对象中细胞介导的免疫应答活性的方法，所述方法包括将来自对象的淋巴细胞与至少两组肽接触，第一组包括至少一种约7
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14个氨基酸残基长度的肽，而第二组包括至少一种16个或更多氨基酸残基的肽，所述肽包括全部或部分的抗原蛋白，并且测量来自免疫细胞的免疫效应分子的存在或水平升高，其中所述免疫效应分子的存在或水平指示对象的细胞介导应答水平。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象是人。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述7
‑
14个氨基酸的肽由CD4
+
淋巴细胞识别而所述16个或更多氨基酸的肽由CD8
+
淋巴细胞识别。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品是未经稀释的全血。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述样品是占待分析样品体积约10％
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100％的全血。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述全血占待分析样品体积约50％
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100％。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述全血占待分析样品体积约80％
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100％。8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述全血收集在含有肝素的试管中。9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫效应分子是细胞因子。10.权利要求11所述的方法，其特征在于，所述细胞因子是IFN
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γ。11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫效应分子用其特异性抗体检测。12.权利要求11中所述的方法，其特征在于，所述免疫效应分子使用ELISA检测。13.权利要求12所述的方法，其特征在于，所述免疫效应分子使用酶联免疫斑点法检测。14.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象患有选自以下的病原体导致的感染：分枝杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属、伯疏氏螺旋体属、大肠杆菌、沙门氏菌、梭状芽孢杆菌属、志贺菌属、变形杆菌属、芽孢杆菌属、疱疹病毒、乙型或丙型肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒(HIV)的病原体感染或患有其导致的疾病。15.权利要求14所述的方法，其特征在于，所述病情是结核分枝杆菌感染或结核病(TB)。16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述抗原选自CFP10、ESAT
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6、TB7.7和TB37.6。17.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象有选自以下的病情：脱发斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合症、自身免疫阿狄森氏病、多发性硬化症、肾上腺自身免疫疾病、自身免疫溶血性贫血、自身免疫肝炎、自身免疫卵巢炎和睾丸炎、白塞氏病、大疱性类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻皮炎、慢性疲劳综合症(CFIDS)、慢性炎症脱髓鞘、慢性炎症多神经病、变应性肉芽肿性血管炎、瘢痕性类天疱疮、CREST综合症、冷凝集素病、克罗恩氏病、疱疹样皮炎、盘状红斑狼疮、原发性混合型冷球蛋白血症、纤维组织肌痛、肾小球肾炎、格雷弗氏病、急性多发性神经根炎、桥本甲状腺炎、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA肾病、胰岛素依赖型糖尿病(I型)、扁平苔藓、红斑狼疮、梅尼埃病、混合性结缔组织病、多发性硬化症、重症肌无力、心肌炎、寻常性天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合症、风湿性多肌痛、多发性肌炎和皮肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺氏现象、赖特尔综合症、风湿热、类风湿关节炎、结节病、硬皮病、
干燥综合症、全身肌强直综合症、系统性红斑狼疮、多发性大动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎、白癜风和炎性肠病。18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述疾病是乳糜泻。19.权利要求18所述的方法，其特征在于，所述疾病...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：塞尔雷斯蒂斯有限公司，
类型：发明
国别省市：