本发明专利技术公开了一种脐橙皮中挥发油和黄酮苷类成分的连续提取及检测分析方法，本发明专利技术先采用水蒸气蒸馏法提取橙皮中的挥发油，再以60％乙醇连续提取残渣中的黄酮苷类成分，巧妙地将精油提取与黄酮苷提取相结合，工艺简单，符合工业化生产要求；并借助GC‑MS和UPLC‑Q/TOF技术对所分离制得的成分分别进行了定性分析，对其中最主要的活性成分橙皮苷进行HPLC‑DAD含量测定，明确了脐橙皮中主要成分及含量，为脐橙皮的开发提供研究方向和技术基础。
【技术实现步骤摘要】
一种脐橙皮中挥发油和黄酮苷类成分的提取及检测方法
本专利技术涉及一种脐橙皮中挥发油和黄酮苷类成分的连续提取及检测分析方法，属于天然产物有效成分提取及分析
技术介绍
脐橙，原名：甜橙。别名：橙、橙子、香橙。属于芸香科柑橘属植物，甜橙(Citrussinensis(L.)Osbeck)的成熟果实。橙性微温，味甘，主治食欲不振，腹胀，便溏或腹泻，具有生津止渴，开胃下气的功效，果皮供药用，可止恶心下气消痰。中国脐橙产业主要是以新鲜脐橙出售和制成橙汁为主。因为脐橙具有浓郁的香味以及诱人的色泽，更因为它包含丰富的营养物质，例如类黄酮、维生素C、类胡萝卜素等，使得橙汁成为了国内外市场上最受欢迎的果汁之一。自2000年开始，由于橙汁消费量在中国的逐年增长，脐橙的发展在我国倍受重视。从国内脐橙汁销售量的增长趋势来看，预测2020年橙汁的销售量在中国将达到400多万吨。但是脐橙加工时榨成汁后将产生许多的橙皮，其残留的多数橙皮常常被直接当成废物填埋掉，使得大量的橙皮资源都没有被充分利用而被废弃掉，失去其应有的价值。工业生产中的废弃物亦可被重新开发利用，比如脐橙皮中含有的挥发油类、氨基酸，多糖类，类黄酮类和维生素类等多种活性成分，若加以利用，则在保护生态环境的同时也能产生较大的经济效益。脐橙皮挥发油具有广泛的应用，如可作为各种加工产品(食品、饮料)的芳香剂，其主要含有的化学成分为各种萜烯类、醇类、醛类或其衍生物等低分子量易挥发性成分。橙皮中含量较高的黄酮类成分主要应用于以下四个方面：天然的抗氧化剂、天然色素、天然调味剂和天然风味增强剂。如果橙皮中的这些成分能够被充分回收利用，则橙皮产业将有望成为脐橙产业的另一个分支，提高其附加经济效益。赣南脐橙的橙皮和橙肉中均富含黄酮苷类成分橙皮苷，尤其是橙皮，远远多于橙肉。橙皮苷属于黄烷酮类成分，大量存在于柑橘属类植物成熟果实的果皮中，是脐橙皮中含量最为丰富的黄酮类成分，具有多种生物活性，回收开发利用的利益十分可观。基于国内外市场上与日剧增的橙汁消费量，废弃的橙皮无处安置，虽有报道橙皮中精油以及橙皮苷的提取及成分鉴定方法，但目前少有报道在工业中如何充分利用这一资源，采用什么样的回收方法可使经济效益达到最高。为了综合利用脐橙果汁产业中所产生的废弃物橙皮资源，回收其中的有效成分，有必要开展从橙皮中联合提取、鉴定挥发油类和黄酮苷类成分以及明确其中橙皮苷的含量的研究。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种连续提取及检测脐橙皮中挥发油和黄酮苷类成分的方法。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种脐橙皮中挥发油和黄酮苷类成分的连续提取方法，其步骤如下：步骤a：取洗净的新鲜脐橙皮，切成小块，放入挥发油提取器中，加水进行水蒸气蒸馏提取4～8h，然后停止加热，放置30～40min后，打开阀门，将水层缓缓放出，再向挥发油提取器中加入相当于新鲜脐橙皮0.5％～1％重量的有机溶剂摇匀后放出油层，回收有机溶剂，并用干燥剂脱水干燥，得脐橙皮挥发油；其中，新鲜脐橙皮和水加入的料液比为1:(1～4)；步骤b：将步骤a中已提取完挥发油的脐橙皮渣置于40～80℃条件下烘干，粉碎过40～60目筛后，称重，加入60％～70％乙醇溶液加热回流提取3～6次，每次30～60min，合并提取液，抽滤得滤液，即得脐橙皮中的黄酮苷类成分；其中，干燥的脐橙皮渣与60％～70％乙醇溶液料液比为1:(20～40)。优选，步骤a中，所述有机溶剂选自乙酸乙酯、丙烯酸乙酯、正己烷和乙醚中的一种或几种。优选，步骤a中，所述脱水干燥剂选自无水硫酸钠或无水硫酸钙中的一种或几种。本专利技术的第二方面，提供一种脐橙皮中挥发油和黄酮苷类成分的检测分析方法，步骤如下：S01，提取纯化脐橙皮挥发油；S02，采用气相色谱-质谱法对脐橙皮挥发油进行分析检测；S03，提取纯化脐橙皮黄酮苷类成分；S04，采用液相色谱-质谱法对脐橙皮黄酮苷类成分进行分析检测；S05，采用液相色谱法对脐橙皮黄酮苷类成分中橙皮苷进行分析检测。优选，S02中，分析检测的条件为：Rtx-5MS色谱柱；载气：氦气；流速：1mL/min，溶剂延迟3min；升温程序：初始温度为40℃，保持5min，以5℃/min升温到250℃，保持10min，再以25℃/min升到300℃，保持2min；质谱条件：离子源温度200℃；接口温度50℃；电离方式EI；电子能量70V；延时3min；扫描范围(m/z)40～600amu。优选，S04中，应用UPLC-Q/TOF法，超高液相色谱条件：检测器：XevoG2-XSQ/TOFMS检测器；色谱柱：AcquityUPLCBEHC18色谱柱；柱温：35℃；流动相：A为0.1％甲酸溶液，B为乙腈；流速：0.3mL/min；进样量：1μL，梯度洗脱，洗脱程序：0～2min时5～15％B；2～5min时15～25％B；5～10min时25～40％B；10～20min时40～80％B；20～23min时80～100％B；23～25min时100％B；质谱条件：MS检测范围：100～1200Da；扫描时间间隔：0.2s；MS/MS检测范围：50～1200Da；扫描时间间隔：0.2s；二级质谱能量：10V～30V；数据采集与分析工作站：MassLynx4.0。优选，S05中，应用HPLC法，液相色谱条件：色谱柱：InertsustainRC18；检测器：Waters2998PDA检测器；数据采集工作站为Empower色谱工作站；流动相：A为乙腈，B为水；流速：1mL/min；检测波长：283nm；进样量：10μL；梯度洗脱程序，洗脱程序：0～5min时5～30％A；5～11min时30～45％A；11～12min时45～70％A；12～14min时70％A；14～18min时70～80％A；18～19min时80～100％A；19～25min时100％A。本专利技术的第三方面：(1)提供由上述提取纯化方法得到的脐橙皮挥发油。经分析检测，本专利技术的脐橙皮挥发油的化学成分包括：香桧烯，a-蒎烯，月桂烯，丁酸甲酯，辛醛，β-罗勒烯，a-萜品烯，柠檬烯，γ-萜品烯，辛醇，异松油烯，芳樟醇，壬醛，(e)-p-薄荷-2，8-二烯-1-醇，反式-柠檬烯氧化物，a-蒎烯，二氢香芹醇，香茅醛，松油烯-4-醇，α-松油醇，辛酸酯，癸醛，乙酸辛酯，反式香芹醇，L-香茅醇，橙花醛，香芹酮，香叶醇，香叶醛，紫苏醛，愈创木酚，乙酸香茅酯，橙花醇乙酸酯，α-古巴烯，乙酸香叶酯，β-榄香烯，月桂醛，β-石竹烯，香橙烯，β-桉叶烯，大根香叶烯，β-花柏烯，朱栾倍半萜，绿花烯，塞舌尔烯，δ-荜澄茄烯，α-香柠檬醇，肉豆蔻醛，石竹烯氧化物，刺柏脑，β-甜橙醛，顺式-金合欢醇，α-甜橙醛，诺卡酮，橙花叔醇，二十五烷及其同分异构体，邻苯二甲酸二辛酯，α-榄香醇。其中，绿花烯和塞舌尔烯首次在脐橙皮挥发油中发现，此前未见报道。(2)提供由上述提取纯化方法得到的脐橙皮黄酮苷类成分。经分析检测，本专利技术的脐橙皮黄酮苷类的化学成分包括：AspergiloneA，Cinoxolone，Naringin，Hesperidin，其中，Hesperidin(橙皮苷)响应值最高，为最主要成分。(3)提供由上述提取纯化本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种脐橙皮中挥发油和黄酮苷类成分的连续提取方法，其特征在于，其步骤如下：步骤a：取洗净的新鲜脐橙皮，切成小块，放入挥发油提取器中，加水进行水蒸气蒸馏提取4～8h，然后停止加热，放置30～40min后，打开阀门，将水层缓缓放出，再向挥发油提取器中加入相当于新鲜脐橙皮0.5％～1％重量的有机溶剂摇匀后放出油层，回收有机溶剂，并用干燥剂脱水干燥，得脐橙皮挥发油；其中，新鲜脐橙皮和水加入的料液比为1:(1～4)；步骤b：将步骤a中已提取完挥发油的脐橙皮渣置于40～80℃条件下烘干，粉碎过40～60目筛后，称重，加入60％～70％乙醇溶液加热回流提取3～6次，每次30～60min，合并提取液，抽滤得滤液，即得脐橙皮中的黄酮苷类成分；其中，干燥的脐橙皮渣与60％～70％乙醇溶液料液比为1:(20～40)。
【技术特征摘要】
1.一种脐橙皮中挥发油和黄酮苷类成分的连续提取方法，其特征在于，其步骤如下：步骤a：取洗净的新鲜脐橙皮，切成小块，放入挥发油提取器中，加水进行水蒸气蒸馏提取4～8h，然后停止加热，放置30～40min后，打开阀门，将水层缓缓放出，再向挥发油提取器中加入相当于新鲜脐橙皮0.5％～1％重量的有机溶剂摇匀后放出油层，回收有机溶剂，并用干燥剂脱水干燥，得脐橙皮挥发油；其中，新鲜脐橙皮和水加入的料液比为1:(1～4)；步骤b：将步骤a中已提取完挥发油的脐橙皮渣置于40～80℃条件下烘干，粉碎过40～60目筛后，称重，加入60％～70％乙醇溶液加热回流提取3～6次，每次30～60min，合并提取液，抽滤得滤液，即得脐橙皮中的黄酮苷类成分；其中，干燥的脐橙皮渣与60％～70％乙醇溶液料液比为1:(20～40)。2.如权利要求1所述的一种脐橙皮中挥发油和黄酮苷类成分的连续提取方法，其特征在于，步骤a中，所述有机溶剂选自乙酸乙酯、丙烯酸乙酯、正己烷和乙醚中的一种或几种。3.如权利要求1所述的一种脐橙皮中挥发油和黄酮苷类成分的连续提取方法，其特征在于，步骤a中，所述脱水干燥剂选自无水硫酸钠或无水硫酸钙中的一种或几种。4.如权利要求1～3任一项所述的一种脐橙皮中挥发油和黄酮苷类成分的检测分析方法，其特征在于，步骤如下：S01，提取纯化脐橙皮挥发油；S02，采用气相色谱-质谱法对脐橙皮挥发油进行分析检测；S03，提取纯化脐橙皮黄酮苷类成分；S04，采用液相色谱-质谱法对脐橙皮黄酮苷类成分进行分析检测；S05，采用液相色谱法对脐橙皮黄酮苷类成分中橙皮苷进行分析检测。5.如权利要求4所述的一种脐橙皮中挥发油和黄酮苷类成分的检测分析方法，其特征在于，S02中，分析检测的条件为：Rtx-5MS色谱柱；载气：氦气；流速：1mL/min，溶剂延迟3min；升温程序：初始温度为40...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄浩，刘海，李林福，胡海波，明良山，高进，曹晖，
申请(专利权)人：赣南医学院，
类型：发明
国别省市：江西,36
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