【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种原子力显微镜(afm)探针，特别涉及一种原子力显微镜探针针尖的交联剂修饰方法及其应用。
技术介绍
1、原子力显微镜(atomic force microscope，afm)是一种具有原子分辨率的表面形貌、电磁性能分析的重要仪器。afm的基本原理是通过测量探针与样品表面的相互作用力来探测表面形貌。
2、在afm的探针针尖上修饰特定分子(例如抗体)，如果样品中有目标分子(例如对应的抗原)能与针尖上修饰的分子之间产生特异性的作用力，那么它们之间的作用力就会被记录下来，从而实现目标分子的检测。目前修饰afm探针针尖的方法很多，其中最为常用的是用聚乙二醇作为交联剂，将分子(例如抗体)连接到针尖上。但这样的afm探针针尖修饰方法存在如下缺陷，包括：聚乙二醇的实验结果很难定量，甚至是否将特定分子修饰到针尖上都不能确定；不同研究者获得的实验结果往往存在较大差距，有时候甚至能达到三个数量级以上，不能实现标准化；只能连接蛋白质等含氨基的物质，不能连接其他种类的分子；聚乙二醇过于柔软，有时候会错过识别事件，这就导致与目标分子之间的特异性结合事件概率比较低。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的在于提供一种原子力显微镜探针针尖的交联剂修饰方法及其应用，以克服了现有技术中的不足。
2、为实现上述专利技术目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、本专利技术的第一个方面提供了一种原子力显微镜探针针尖的交联剂修饰方法，其包括：
4、以硅烷偶联剂对表
5、将所述表面硅烷化的afm探针针尖与交联剂接触并反应，获得交联剂修饰的afm探针针尖，所述交联剂选自异戊烯醇。
6、在一个实施例中，所述afm探针针尖的材质包括但不限于硅、碳纳米管等。
7、在一个实施例中，所述的方法包括：以臭氧对afm探针针尖进行清洁处理20min以上，以至少除去所述针尖上的有机污染物，获得所述表面清洁的afm探针针尖。
8、在一个实施例中，所述的方法包括：
9、在室温条件下，使所述表面清洁的afm探针针尖与食人鱼溶液充分接触并反应，之后清洗，完成对所述针尖表面的羟基化处理；
10、在室温条件下，使经羟基化处理后的afm探针针尖与硅烷偶联剂溶液充分接触并反应，之后清洗，获得所述表面硅烷化的afm探针针尖。
11、在一个实施例中，所述硅烷偶联剂溶液包括体积比为1∶10-1∶20的乙烯基三乙氧基硅烷和中性磷酸盐缓冲溶液，所述中性磷酸盐缓冲溶液包含15-25mmol/l na2hpo4以及120-180mmol/l nacl。
12、在一个实施例中，所述的方法包括：将所述表面硅烷化的afm探针针尖浸入含交联剂、三乙胺和有机溶剂的混合液中并进行反应，从而获得交联剂修饰的afm探针针尖；
13、其中，所述混合液含有0.1-0.5mg/ml交联剂，优选含有0.15-0.36mg/ml交联剂；所述反应是在室温条件下进行的，反应时间在0.5h以上，优选为1.5-2.5h。
14、在一个实施例中，所述异戊烯醇包括但不限于3-甲基-2-丁烯-1-醇或3-甲基-3-丁烯-1-醇。
15、本专利技术的第二个方面提供了一种交联剂修饰的原子力显微镜探针针尖，它是由所述原子力显微镜探针针尖的交联剂修饰方法制得。
16、本专利技术的第三个方面提供了一种原子力显微镜探针的制备方法，其包括：
17、采用所述原子力显微镜探针针尖的交联剂修饰方法对原子力显微镜探针针尖进行交联剂修饰，之后在有催化剂存在的条件下，使所述针尖与捕捉分子接触并反应，获得连接有捕捉分子的原子力显微镜探针。
18、在一个实施例中，所述催化剂包括但不限于nacnbh3。
19、本专利技术的第四个方面提供了一种物品检测方法，其包括：
20、采用原子力显微镜探针的制备方法制备原子力显微镜探针；
21、利用所述原子力显微镜探针对含有目标分子的样品进行检测，所述目标分子能与捕捉分子特异性结合。
22、与现有技术相比，本专利技术通过采用异戊烯醇作为交联剂对afm探针针尖修饰，不仅可用于连接多种捕捉分子，例如抗原、dna或其他小分子或大分子物质，并大大提高分子间识别事件的概率，包括提高解离力事件的概率，以尽可能地不错过解离力事件，尤其是还可精确实现分子间作用力的定量检测，并使检测结果标准化。
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1.一种原子力显微镜探针针尖的交联剂修饰方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括：以臭氧对AFM探针针尖进行清洁处理20min以上，以至少除去所述针尖上的有机污染物，获得所述表面清洁的AFM探针针尖。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述硅烷偶联剂溶液包括体积比为1：10-1：20的乙烯基三乙氧基硅烷和中性磷酸盐缓冲溶液，所述中性磷酸盐缓冲溶液包含15-25mmol/L Na2HPO4以及120-180mmol/L NaCl。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括：将所述表面硅烷化的AFM探针针尖浸入含交联剂、三乙胺和有机溶剂的混合液中并进行反应，从而获得交联剂修饰的AFM探针针尖；
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，所述异戊烯醇包括3-甲基-2-丁烯-1-醇或3-甲基-3-丁烯-1-醇。
7.一种交联剂修饰的原子力显微镜探针针尖，其特征在于，它是由权利要求1-6中任一项所述的方法制得。<...
【技术特征摘要】
1.一种原子力显微镜探针针尖的交联剂修饰方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括：以臭氧对afm探针针尖进行清洁处理20min以上，以至少除去所述针尖上的有机污染物，获得所述表面清洁的afm探针针尖。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述硅烷偶联剂溶液包括体积比为1：10-1：20的乙烯基三乙氧基硅烷和中性磷酸盐缓冲溶液，所述中性磷酸盐缓冲溶液包含15-25mmol/l na2hpo4以及120-180mmol/l nacl。
5.根据权利要求1所述的方法，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵伟栋，钟海舰，李新宇，冯荣荣，郭泽灵，孟雨，
申请(专利权)人：赣南医学院，
类型：发明
国别省市：
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