一种酶解法制备淫羊藿苷的方法技术

本发明专利技术公开了一种酶解法制备淫羊藿苷的方法，属于药物制备领域。本发明专利技术的方法主要利用鼠李糖苷酶促使淫羊藿中的朝藿定C发生酶解反应，从而转化为淫羊藿苷。本方法具有操作简单、环境友好、经济可行的优点，能够将淫羊藿中含量较高的多糖苷类物质朝藿定C转化为淫羊藿苷，从而提高淫羊藿苷的产率，弥补现有技术中的不足。

A method for preparation of icariin by enzymatic hydrolysis

The invention discloses a method for preparing icariin by enzymatic hydrolysis, which belongs to the field of drug preparation. The method of the invention mainly uses rhamnosidase to induce the enzymatic hydrolysis reaction of Chaiguoding C in Epimedium, thereby converting it into icariin. This method has the advantages of simple operation, friendly environment and economic feasibility. It can transform Chaohoding C, a polysaccharide glycoside substance with high content in Epimedium, into icariin, so as to improve the yield of icariin and make up for the shortcomings of the existing technology.

【技术实现步骤摘要】
一种酶解法制备淫羊藿苷的方法
本专利技术属于药物制备领域，具体涉及一种酶解法制备淫羊藿苷的方法。
技术介绍
淫羊藿苷是一种具有8-异戊烯基黄酮母核的黄酮类物质，分子式C33H40O15，分子量为676.65，CAS号为489-32-7，主要存在于淫羊藿属植物例如淫羊藿、巫山淫羊藿、箭叶淫羊藿、朝鲜淫羊藿和柔毛淫羊藿茎叶提取物中，具有补肾壮阳，强壮筋骨，增加心血管血流量，促进造血功能、免疫功能和抗衰老等功效。目前常见的淫羊藿苷制备方法是通过进行水醇提取得到淫羊藿的主要成分，然后通过各种型号的大孔树脂柱、聚酰胺柱、硅胶柱等分离。中国专利CN101607976A采用了甲醇或乙醇提取淫羊藿得浸膏，再用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇做溶剂萃取不同部位，选用硅胶柱色谱和聚酰胺柱色谱进行分离提纯得到淫羊藿苷。上述方法工艺复杂，所耗有机溶剂多，得率低，不利于工业化生产；而中国专利CN102718819A主要是通过对淫羊藿原料进行水加热提取、大孔树脂分离、柱分离精制得到淫羊藿苷，该方法操作复杂，需要经过两次层析处理，不利于大量生产；中国专利CN103396463A首先对淫羊藿进行乙醇水溶液微波提取，利用微孔滤膜除去其中的微粒杂质，再通过模拟移动床色谱进行分离和纯化，最后经过浓缩喷雾干燥得淫羊藿苷成品，该方法运用到了模拟移动床色谱技术，存在着仪器的限制，不便于推广。以上现存的淫羊藿苷制备方法普遍都是以淫羊藿植物为原料来获得淫羊藿苷的，但淫羊藿植物中淫羊藿苷含量交低，只有0.5％左右，因此通过复杂操作工序制备的淫羊藿苷的得率仍然低。因此，寻找一种得率高的淫羊藿苷制备方法是及其具具备市场开发意义的。淫羊藿属植物中除了含有二糖苷淫羊藿苷外，还含有与淫羊藿苷具有同样母核的三糖苷物质，如朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C，其中朝藿定C在淫羊藿属植物巫山淫羊藿中具有丰富的含量，达到2.5％～4.0％，对比朝藿定C(图1中a所示)、淫羊藿苷的结构(图1中b所示)，发现朝藿定C与淫羊藿苷在C3位上差一个鼠李糖，因此可以采用酶解方法将巫山淫羊藿中高含量的朝藿定C转化获得大量淫羊藿苷。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种酶解法制备淫羊藿苷的方法。为实现上述专利技术目的，本专利技术提供如下技术方案：1、一种酶解法制备淫羊藿苷的方法，所述方法为通过酶解法将淫羊藿中的朝藿定C转化为淫羊藿苷。优选的，所述淫羊藿为巫山淫羊藿。优选的，所述酶解法采用的酶为鼠李糖苷酶。优选的，所述方法的具体操作如下：(1)淫羊藿浸膏的制备：取淫羊藿粉末，过三号筛后加入体积分数为70％-75％的乙醇，所述巫山淫羊藿粉末与乙醇的质量体积比为1:20～30，g:mL；旋转蒸发得到残留固体，真空干燥即得淫羊藿浸膏；(2)酶解反应：按照1:1，mmol:U的比例依次加入淫羊藿浸膏与鼠李糖苷酶，再加入酸性缓冲溶液与酶稳定剂，所述淫羊藿浸膏与酸性缓冲溶液、酶稳定剂的质量体积比为1:2:2，g:mL:mg，在40～60℃的水浴条件下进行酶解反应，抽取少量反应液检测朝藿定C转化率达到98％时进行沸水灭活结束反应。(3)淫羊藿苷纯化：将(2)中酶解反应结束后的反应液用等体积的乙酸乙酯进行萃取三次，收集上层液体，旋转蒸发后进行重结晶得到纯化的淫羊藿苷。优选的，步骤(1)中所述淫羊藿粉末与乙醇的质量体积比为1:25，g:mL。优选的，步骤(2)中所述弱酸性缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液，所述缓冲溶液的浓度为0.2mol/L，所述缓冲溶液的pH为6.5。优选的，所述酶稳定剂为牛血清白蛋白，所述牛血清白蛋白的浓度为1mg/mL。优选的，步骤(2)中所述酶解反应时的水浴温度为50℃。优选的，步骤(3)中所述重结晶所用的溶剂为甲醇。本专利技术的有益效果在于：本专利技术一种酶解法制备淫羊藿苷的方法主要利用鼠李糖苷酶促使淫羊藿中的朝藿定C发生酶解反应，从而转化为淫羊藿苷。本方法具有操作简单、环境友好、经济可行的优点，能够将淫羊藿中具有2.5％～4.0％含量的多糖苷类物质朝藿定C转化为淫羊藿苷，从而提高淫羊藿苷的产率，弥补现有技术中的不足。附图说明为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图：图1为朝藿定C(a)、淫羊藿苷(b)的分子结构图；图2为不同酶解反应时间后反应液的液相色谱图；图3为朝藿定C、淫羊藿苷酶水解浓度变化图。具体实施方式下面将对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。实施例1(1)淫羊藿浸膏的制备：取淫羊藿粉末，过三号筛后加入体积分数为70％的乙醇，所述巫山淫羊藿粉末与乙醇的质量体积比为1:30，g:mL；旋转蒸发提取液得到残留固体，真空干燥即得淫羊藿浸膏；(2)酶解反应：按照1:1，mmol:U的比例依次加入淫羊藿浸膏与鼠李糖苷酶，再加入浓度为0.2mol/L、pH为6.5的磷酸盐缓冲溶液与酶稳定剂牛血清白蛋白，所述淫羊藿浸膏与磷酸盐缓冲溶液、牛血清白蛋白的质量体积比为1:2:2，g:mL:mg，在40℃的水浴条件下进行酶解反应，抽取少量反应液检测朝藿定C转化率达到98％时进行沸水灭活结束反应。(3)淫羊藿苷纯化：将(2)中酶解反应结束后的反应液用等体积的乙酸乙酯进行萃取三次，收集上层液体，旋转蒸发后进行重结晶得到纯化的淫羊藿苷。实施例2(1)淫羊藿浸膏的制备：取巫山淫羊藿粉末，过三号筛后加入体积分数为70％-75％的乙醇，所述巫山淫羊藿粉末与乙醇的质量体积比为1:25，g:mL；旋转蒸发提取液得到残留固体，真空干燥即得巫山淫羊藿浸膏；(2)酶解反应：按照1:1，mmol:U的比例依次加入巫山淫羊藿浸膏与鼠李糖苷酶，再加入浓度为0.2mol/L、pH为6.5的磷酸盐缓冲溶液与酶稳定剂牛血清白蛋白，所述淫羊藿浸膏与磷酸盐缓冲溶液、牛血清白蛋白的质量体积比为1:2:2，g:mL:mg，在50℃的水浴条件下进行酶解反应，抽取少量反应液检测朝藿定C转化率达到98％时进行沸水灭活结束反应。(3)淫羊藿苷纯化：将(2)中酶解反应结束后的反应液用等体积的乙酸乙酯进行萃取三次，收集上层液体，旋转蒸发后进行甲醇重结晶得到纯化的淫羊藿苷，纯度为98.2％，总收率为81.2％。。实施例3(1)淫羊藿浸膏的制备：取淫羊藿粉末，过三号筛后加入体积分数为75％的乙醇，所述巫山淫羊藿粉末与乙醇的质量体积比为1:20，g:mL；旋转蒸发提取液得到残留固体，真空干燥即得淫羊藿浸膏；(2)酶解反应：按照1:1，mmol:U的比例依次加入淫羊藿浸膏与鼠李糖苷酶，再加入浓度为0.2mol/L、pH为6.5的磷酸盐缓冲溶液与酶稳定剂牛血清白蛋白，所述淫羊藿浸膏与磷酸盐缓冲溶液、牛血清白蛋白的质量体积比为1:2:2，g:mL:mg，在60℃的水浴条件下进行酶解反应，抽取少量反应液检测朝藿定C转化率达到98％时进行沸水灭活结束反应。(3)淫羊藿苷纯化：将(2)中酶解反应结束后的反应液用等体积的乙酸乙酯进行萃取三次，收集上层液体，旋转蒸发后进行甲醇重结晶得到纯化的淫羊藿苷。按照实施例2的条件进行不同时间点酶解反应液做高效液相色谱分析，其色谱图如图2所示，保留时间23.1min为朝藿定C，保留时间为27.1min为淫羊藿苷，其中朝藿定C随着反应时间的增本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酶解法制备淫羊藿苷的方法，其特征在于，所述方法为通过酶解法将淫羊藿中的朝藿定C转化为淫羊藿苷。

【技术特征摘要】
1.一种酶解法制备淫羊藿苷的方法，其特征在于，所述方法为通过酶解法将淫羊藿中的朝藿定C转化为淫羊藿苷。2.根据权利要求1所述一种酶解法制备淫羊藿苷的方法，其特征在于，所述淫羊藿为巫山淫羊藿。3.根据权利要求1所述一种酶解法制备淫羊藿苷的方法，其特征在于，所述酶解法采用的酶为鼠李糖苷酶。4.根据权利要求1所述一种酶解法制备淫羊藿苷的方法，其特征在于，所述方法的具体操作如下：(1)淫羊藿浸膏的制备：取淫羊藿粉末，过三号筛后加入体积分数为70％-75％的乙醇，所述巫山淫羊藿粉末与乙醇的质量体积比为1:20～30，g:mL；旋转蒸发得到残留固体，真空干燥即得淫羊藿浸膏；(2)酶解反应：按照1:1，mmol:U的比例依次加入淫羊藿浸膏与鼠李糖苷酶，再加入弱酸性缓冲溶液与酶稳定剂，所述淫羊藿浸膏与酸性缓冲溶液、酶稳定剂的质量体积比为1:2:2，g:mL:mg，在40～60℃的水浴条件下进行酶解反应，抽取少量反应液检测朝藿定C转...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏之宁，尹蔓妮，张起辉，
申请(专利权)人：重庆大学，
类型：发明
国别省市：重庆,50