一种将黄芩药材中黄芩苷水解为黄芩素的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高黄芩药材中黄芩苷水解率的方法，属于天然产物提取分离技术领域。包括以下步骤：1)测定待处理黄芩药材中自带黄芩酶的酶解率：取待处理黄芩药材(已知黄芩苷含量)，粉碎成粗粉，取50.0g，加入黄芩苷10.0g，加水200mL，调节pH值至4.5，50℃保温3小时，抽滤，药渣干燥，测定黄芩苷含量，计算自带酶酶解率。2)根据待处理黄芩自带黄芩酶的酶解率，选择糖苷酶和辅助酶的用量；3)待处理黄芩药材粉碎，加入药材粉末质量3～5倍的水进行浸润，调节混合体系pH值至4～6，然后加入糖苷酶和辅助酶，于40～60℃下保温10～14h，完成水解。药材中黄芩苷水解率大于95％。

【技术实现步骤摘要】
一种将黄芩药材中黄芩苷水解为黄芩素的方法
本专利技术属于天然产物提取分离
，具体涉及一种将黄芩药材中黄芩苷水解为黄芩素的方法。
技术介绍
黄芩是清热解毒类中药的代表品种之一，黄酮类是其有效成分，已分离到的有黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素等40余种。黄芩传统炮制工艺有炒制、煮制、酒制、姜汁制、醋制、猪胆汁制、蜜制、米泔水制等(闻永举，2005)；《中国药典》规定了黄芩的水煮、蒸、酒炙三种方法。黄芩药材中特有的黄芩酶，在一定条件下能将黄芩苷、汉黄芩苷等水解为黄芩素、汉黄芩素等苷元。后者多为邻位三羟基黄酮，易被氧化而使药材从黄色变为绿色。黄芩传统炮制(炒、煮、蒸)的主要目的在于以高温灭活黄芩酶，阻止黄酮苷类水解。传统炮制工艺中，也有用米泔水或米醋浸泡黄芩的方法，与上述高温炮制灭活酶的思路不同。如明代《炮炙大法》“黄芩，米泔水浸七日，炙干，又浸又炙，如此七次。”元代《瑞竹堂经验方》“黄芩，用米醋浸七日，炙干，又浸又炙，如此七次。”明代《普济方》“黄芩，醋浸一宿，晒”。上述方法与高温炮制的区别在于，通过浸泡促进黄芩酶水解黄芩苷类成分，如米泔水所含的淀粉酶可促进黄芩酶活性，米醋为黄芩酶的提供酶活力最佳弱酸性环境。并且“又浸又炙”，可防止邻位三羟基黄酮的氧化变色。药代动力学研究表明，黄芩苷极性大，在胃肠道不能直接跨膜转运吸收入血，一般在肠道菌群的葡糖醛酸苷酶作用下转化为黄芩素，被人体空肠段吸收。黄芩素在医药领域备受关注。近年来，关于制备黄芩素和黄芩苷元的相关专利有：专利1，一种制备高纯度黄芩素的方法(专利公开号CN1683356A)，将黄芩苷加水硫酸水溶液中，在50～70℃下，反应10～15分钟，晶体析出得粗品，再用丙酮提纯得高纯度黄芩素。专利2，一种黄芩总黄酮苷元提取物、黄芩单体黄酮苷元及其制备方法与应用(专利公开号CN1709885A)，将黄芩粉碎，加水，在41～46℃进行酶解反应4.1～4.8小时，天然存在于黄芩中的黄芩酶与黄芩黄酮苷、在不经提取分离的情况下、直接在黄芩中发生酶解反应。专利3，黄芩素和黄芩黄酮总苷元提取物的制备方法(专利公开号CN1709885A)，黄芩药材的水浸提液，加热至＜70℃、保温持续3～20小时，收集析出的沉淀物，为黄芩素和黄芩黄酮总苷元。专利4，一种用黄芩苷制备黄芩素的方法(专利公开号CN1583776A)，取黄芩药材制备黄芩粗酶粉，再加入黄芩苷，在适宜条件下，将黄芩苷酶解为黄芩素。专利5，黄芩中黄芩苷及黄芩总苷元同时提取分离工艺(专利公开号CN104710382A)，取黄芩药材，酶解两次，取药液，静置，沉淀为黄芩素和黄芩苷元；药液用酸沉法制备黄芩苷。文献1，复合酶法提取黄芩素的工艺研究，采用外加复合酶法(纤维素酶和异淀粉酶)，可提高从黄芩药材中提取单一纤维素酶提取黄芩素提取率提高1.5倍文献2，黄芩素的酶法提取工艺研究，以黄芩苷为底物，用β-葡萄糖苷酶酶解，得黄芩素。总结上述专利或文献公开的制备黄芩素或黄芩苷元的方法，主要有以下三种：①以黄芩苷为原料，用酸碱(专利1)、黄芩酶(从药材中分离纯化)酶解(专利4)、β-葡萄糖苷酶水解得黄芩素(文献2)；②以黄芩药材粗粉为原料，加水保温，通过黄芩药材中自带酶，水解得黄芩素和黄芩总黄酮苷元(专利2、3、5)。③不考虑黄芩自带酶、外加糖苷酶的水解作用等，添加纤维素酶等破坏药材中的纤维素，提高黄芩中原有黄芩素的得率(文献1)。以黄芩苷为原料制备黄芩素，过程繁琐，成本高，并且酸解安全隐患大，不适于大生产；以黄芩药材为原料，直接提取其中的黄芩素，因其含量过低，生产价值不大；采用酶解法水解黄芩药材中的黄芩苷类，是成本低廉的工业化生产方法，但药材自带酶的含量和活力，受产地、采收季节等因素，差异大，无法控制水解程度。
技术实现思路
为了克服上述现有技术存在的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种将黄芩药材中黄芩苷水解为黄芩素的方法，该方法操作简单，提取效率高，提取时间短，黄芩苷类的水解率大于90.0％。本专利技术是通过以下技术方案来实现：本专利技术公开了一种将黄芩药材中黄芩苷水解为黄芩素的方法，包括以下步骤：1)测定待处理黄芩药材中自带黄芩酶的酶解率；2)根据步骤1)测得的待处理黄芩自带黄芩酶的酶解率，选择糖苷酶和辅助酶的用量；3)将待处理黄芩药材粉碎，加入黄芩药材粉末质量3～5倍的水进行浸润，得到混合体系，调节混合体系pH值至4～6，然后加入糖苷酶和辅助酶，于40～60℃下保温10～14h，完成水解，黄芩药材中黄芩苷水解率大于95％。优选地，步骤1)中，测定黄芩药材中自带黄芩酶的酶解率的具体操作如下：取待处理黄芩药材粉碎成粗粉，取粗粉50.0g，加入黄芩苷10.0g，加水200mL，调节pH值至4.5，50℃保温3小时，抽滤，药渣干燥，测定黄芩苷含量；按下式计算自带酶酶解率：进一步优选地，加入的糖苷酶为β-葡萄糖苷酶。优选地，加入的β-葡萄糖苷酶的量为：每g黄芩药材添加157～236U。优选地，加入的辅助酶为纤维素酶、果胶酶和异淀粉酶中的两种或三种。优选地，加入的纤维素酶的量为每g黄芩药材添加12.16～20.27U；加入的果胶酶的量为每g黄芩药材添加0～10.49g；加入的异淀粉酶的量为每g黄芩药材添加6.93～13.86U。优选地，步骤2)中，根据自带酶酶解率，选择糖苷酶和辅助酶的用量关系如下：与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果：本专利技术公开的从黄芩药材中制备黄芩素的方法，首先测定待处理黄芩药材自带酶的酶解效率，根据自带酶的酶解效率确定添加的糖苷酶及辅助酶的用量，保证药材中黄芩苷类水解率大于90.0％。本专利技术方法采用“自带酶+糖苷酶+辅助酶”的复合酶解方法，水解黄芩药材中的黄芩苷类为黄芩素类，创新点在于：通过建立待处理黄芩药材自带酶酶解效率来决定糖苷酶和辅助酶的用量。进一步地，优选出自带酶、糖苷酶添加比例和添加量与黄芩药材中总黄酮含量、水解程度的关系，从而能够确保水解完全。进一步地，本专利技术获得辅助酶(纤维素酶、果胶酶和异淀粉酶)对糖苷酶的辅助作用的比例关系。具体实施方式本专利技术公开的从黄芩药材中制备黄芩素的方法，主要包括以下步骤；(1)自带酶酶解率的测定：取待处理黄芩药材(已知黄芩苷含量)，粉碎成粗粉，取50.0g，加入黄芩苷10.0g，加水200mL，调节pH值至4.5，50℃保温3小时，抽滤，药渣干燥，测定黄芩苷含量。按下式计算自带酶酶解率。(2)糖苷酶和辅助酶的用量确定：根据自带酶酶解率，按下表1推荐量，确定糖苷酶和辅助酶的用量。表1糖苷酶和辅助酶的用量推荐表(3)具体实施：将待处理黄芩药材粉碎成粗粉，加3～5倍量水浸润，调节pH值至4～6，加热至40～60℃，根据待处理药材自带酶的酶解率，按推荐量加糖苷酶(β-葡萄糖苷酶)和辅助酶(纤维素酶、果胶酶、异淀粉酶)，于40～60℃下保温10～14h。结果黄芩药材中黄芩苷类水解率大于95.0％。上述采用“自带酶+糖苷酶+辅助酶”的复合酶解方法，水解黄芩药材中的黄芩苷类为黄芩素类，关于复合酶解方法中，所用各种酶的选择及试验结果如下：1、不同批次黄芩药材中自带黄芩酶的活性测定选择不同产地、不同采收时间点的黄芩药材共计9批次，按药典净制方法，切片、干燥，得9种饮片，分别测定每种黄芩药材中的黄芩苷本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种将黄芩药材中黄芩苷水解为黄芩素的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)测定待处理黄芩药材中自带黄芩酶的酶解率；2)根据步骤1)测得的待处理黄芩自带黄芩酶的酶解率，选择糖苷酶和辅助酶的用量；3)将待处理黄芩药材粉碎，加入黄芩药材粉末质量3～5倍的水进行浸润，得到混合体系，调节混合体系pH值至4～6，然后加入糖苷酶和辅助酶，于40～60℃下保温10～14h，完成水解，黄芩药材中黄芩苷水解率大于95％。

【技术特征摘要】
1.一种将黄芩药材中黄芩苷水解为黄芩素的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)测定待处理黄芩药材中自带黄芩酶的酶解率；2)根据步骤1)测得的待处理黄芩自带黄芩酶的酶解率，选择糖苷酶和辅助酶的用量；3)将待处理黄芩药材粉碎，加入黄芩药材粉末质量3～5倍的水进行浸润，得到混合体系，调节混合体系pH值至4～6，然后加入糖苷酶和辅助酶，于40～60℃下保温10～14h，完成水解，黄芩药材中黄芩苷水解率大于95％。2.根据权利要求1所述的将黄芩药材中黄芩苷水解为黄芩素的方法，其特征在于，步骤1)中，测定黄芩药材中自带黄芩酶的酶解率的具体操作如下：取待处理黄芩药材粉碎成粗粉，取粗粉50.0g，加入黄芩苷10.0g，加水200mL，调节pH值至4.5，50℃保温3小时，抽滤，药渣干燥，测定黄芩苷含量；按下式计算自带酶酶解率：3.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：林涛，杨彦平，穆祥，武小卫，高雷，苏敏，
申请(专利权)人：西安雨田农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61