一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法技术

本发明专利技术公开了一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法，包括以下步骤：外植体启动培养阶段——丛芽培养阶段——壮苗培养挑选阶段——生根成苗培育阶段，植体启动培养阶段，先取在大棚洁净环境中生长的杂交兰十八格格干净植株的嫩芽，先用蒸馏水初次冲洗干净的植株的嫩芽，嫩芽选取时，一个星期内不要对植株进行浇水、施肥、打药等，然后用锋利的刀片切下未张开芽口的嫩芽，本发明专利技术中杂交兰十八格格茎尖组织培养装置有益效果，通过培养基配方和接种时间的控制，减少褐化现象，更实用，利用组织培养技术由杂交兰茎尖长芽，再以芽繁芽的方式，减少变异，从而可得到大量性状一致的种苗，是商业化生产杂交兰的最佳途径。

A Tissue Culture Method for Stem Tips of Hybrid Lan 18-grid

The invention discloses a stem tip tissue culture method of hybrid orchid eighteen cells, which comprises the following steps: explant initiation culture stage - cluster bud culture stage - strong seedling cultivation selection stage - rooting seedling cultivation stage, plant initiation culture stage, first taking the tender buds of hybrid orchid eighteen cells clean plant growing in a clean greenhouse environment, and first rinsing them with distilled water. When selecting the tender buds of a clean plant, do not water, fertilize or apply medicine to the plant within a week, and then cut the tender buds without opening the bud mouth with sharp blades. In the present invention, the stem tip tissue culture device of hybrid orchid eighteen grid has beneficial effects. Through the control of medium formulation and planting time, the Browning phenomenon can be reduced, which is more practical, and the tissue culture technology can be used to cut the tender buds without opening the bud mouth. The best way to produce hybrid orchid commercially is to get a large number of seedlings with identical characters by long shoot at stem tip and reducing variation by bud propagation.

【技术实现步骤摘要】
一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法
本专利技术属于杂交兰十八格格的茎尖培养方式，具体涉及一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法方法，属于植物组织培养

技术介绍
兰花，兰花宜种植于空气流通的环境，性喜阴，忌阳光直射，喜湿润，忌干燥，15℃至30℃最宜生长。35℃以上生长不良，5℃以下的严寒会影响其生长力，这时，兰花常处于休眠状态。如气温太高加上阳光曝晒则一两天内即出现叶子灼伤或枯焦附生或地生草本，叶数枚至多枚，通常生于假鳞茎基部或下部节上，二列，带状或罕有倒披针形至狭椭圆形，基部一般有宽阔的鞘并围抱假鳞茎，有关节，而杂交兰十八格格，是杂交兰中的一个栽培品种，目前该品种成品花大多数从韩国和我国台湾进口，该品种成品花株型较小且优美，叶片细长，秀丽，有光泽，花瓣绿色，唇瓣呈白色，有淡粉色虎斑，香气清幽，在兰界有“十八格格”的美誉，传统栽培方式，均通过分株繁殖，其缺点在于，植株繁殖周期长，且繁殖率低，难以满足规模化生产的需要，缺乏一种快速规模化培育的方式，存在改进，且传统的植株在分株繁殖时，选用的植物植株多采用无菌水冲洗方式，其消毒灭菌后的植物嫩芽容易残留细菌，消毒不彻底，存在改进，且传统的培养方式在植株嫩芽增殖阶段褐化现象明显，缺乏系统避免方法，存在不足。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法，以解决上述
技术介绍
中提出的目前，用牙刷轻轻刷洗杂交兰十八格格的新生小芽，并用流动的水冲洗杂交兰外植体，改进外植体材料表面的消毒技术，在外植体消毒过程中两次剥掉叶片，控制茎尖切的大小，让杂交兰十八格格外植体的启动率达到60％，获得无菌材料，更安全实用，杂交兰增殖阶段褐化现象明显，通过培养基配方和接种时间的控制，减少褐化现象，在杂交兰的规模化生产过程中，整齐出苗十分重要。壮苗阶段筛除芽球，长势不好的小芽，能够更整齐的出苗，本专利技术优化培养基类型，整个组培过程分四个阶段：外植体启动、丛芽增殖、壮苗培养、生根成苗；只使用了两种培养基：丛芽增殖使用一种，外植体启动、壮苗培养和生根成苗阶段，使用同一种不加激素的培养基。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法，包括以下步骤：步骤一：外植体启动培养阶段，先取在大棚洁净环境中生长的杂交兰十八格格干净植株的嫩芽，先用蒸馏水初次冲洗干净的植株的嫩芽，嫩芽选取时，一个星期内不要对植株进行浇水、施肥、打药等，然后用锋利的刀片切下未张开芽口的嫩芽，用流动的水缓慢冲洗植株嫩芽，然后用软毛牙刷轻轻的刷洗嫩芽，刷洗后的嫩芽可自然阴干后，放在75％的酒精中浸泡，摇动30秒，用10倍的漂白水，(漂白水中需要添加一滴洗洁精为展着剂)处理10分钟，无菌水冲洗3-4次，然后用无菌解剖刀剥掉外围叶片，然后用0.1％氯化汞溶液(加一滴洗洁精为展着剂)浸泡并摇动10-15分钟，用无菌水冲洗3-4次，然后可将处理后的嫩芽放置到带有筛孔的过滤板上，然后在过滤板上端加设风机，利用风力加速嫩芽水分水分晾干，用无菌解剖刀剥掉叶片，茎尖切成0.6-1CM高度，每瓶培养基接种一个茎尖，避免交叉污染，将消毒后的茎尖接种到启动培养基：美国花宝1号+马铃薯汁5000-15000mg/L+香蕉汁5000-15000mg/L+活性炭1g/L上，暗培养一周，然后使用一支日光灯光照培养，每天光照12小时，经过3个月的培养，外植体启动成功率达到60％，一个茎尖上有1-2个小芽长出来，并且有根长出来。步骤二：丛芽培养阶段，先将茎尖诱导的小芽切去叶子和根，然后转接至培养基：Murashige和Skoog1962+萘乙酸0.1-5mg/L+6-苄氨基腺嘌呤1-5mg/L+激动素1-5mg/L+香蕉汁5000-15000mg/L，1支灯培养，每天光照12小时，温度25±2℃，培养3个月，一个芽上长出3-4个芽，成丛生状，培养基有褐化现象，需要及时转接。步骤三：所述壮苗培养挑选阶段：将诱导的丛芽，3-4芽为一丛，芽球、差的小芽用无菌解剖刀剔除不要，然后将丛芽接种到壮苗培养基，壮苗培养基配方为，美国花宝1号+马铃薯汁5000-15000mg/L+香蕉汁5000-15000mg/L+活性炭1g/L上，然后采用两个日光灯培养，每天光照12小时，温度控制在25±2℃，培养2个月，此时丛芽生产成苗，苗大部分长到3CM以上，有的苗上有根长出。步骤四：所述生根成苗阶段，取3cm以上的小苗接种到美国花宝1号+马铃薯汁5000-15000mg/L+香蕉汁5000-15000mg/L+活性炭1g/L的培养基上，2支灯培养，每天光照12小时，温度25±2℃，培养3个月后，苗高10CM，一株苗有5-6条根，根长5CM以上，生根率达到100％。优选的，所述步骤一中软毛牙刷应选用高韧性尼龙材质制成。优选的，所述步骤一、步骤二、步骤三和步骤四，光照培养时应选用日光灯光照培养，步骤一种盛放培养基的器皿，应进行消毒处理后使用。优选的，所述香蕉汁为成熟香蕉果实加无菌蒸馏水粉碎稀释而成。优选的，所述步骤一种流动水冲洗植株嫩芽时，因选用无菌水进行冲洗。与现有技术相比，本专利技术提供了一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法，具备以下有益效果：1、本专利技术中植株的嫩芽消毒成功率达到100％，用牙刷轻轻刷洗杂交兰十八格格的新生小芽，并用流动的水冲洗杂交兰外植体，改进外植体材料表面的消毒技术，在外植体消毒过程中两次剥掉叶片，控制茎尖切的大小，让杂交兰十八格格外植体的启动率达到60％，获得无菌材料。2、本专利技术中通过严格控制培养基配方和接种时间的控制，有效减少杂交兰增殖阶段褐化现象的问题。3、本专利技术方法简单，在杂交兰的规模化生产过程中，整齐出苗十分重要。壮苗阶段筛除芽球，长势不好的小芽，能够更整齐的出苗。4、本专利技术中只使用了两种培养基：丛芽增殖使用一种，外植体启动、壮苗培养和生根成苗阶段，使用同一种不加激素的培养基，简单实用，方便人员后期植株培养。该装置中未涉及部分均与现有技术相同或可采用现有技术加以实现，本专利技术结构科学合理，使用安全方便，为人们提供了很大的帮助。附图说明附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制，在附图中：图1为本专利技术提出的一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法技术路线图；具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。请参阅图1，本专利技术提供一种技术方案：一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法，包括以下步骤：步骤一：外植体启动培养阶段，先取在大棚洁净环境中生长的杂交兰十八格格干净植株的嫩芽，先用蒸馏水初次冲洗干净的植株的嫩芽，嫩芽选取时，一个星期内不要对植株进行浇水、施肥、打药等，然后用锋利的刀片切下未张开芽口的嫩芽，用流动的水缓慢冲洗植株嫩芽，然后用软毛牙刷轻轻的刷洗嫩芽，刷洗后的嫩芽可自然阴干后，放在75％的酒精中浸泡，摇动30秒，用10倍的漂白水，(漂白水中需要添加一滴洗洁精为展着剂)处理10分钟本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法，其特征在于，包括以下四个培育步骤：步骤一：外植体启动培养阶段：先取在大棚洁净环境中生长的杂交兰十八格格干净植株的嫩芽，先用蒸馏水初次冲洗干净的植株的嫩芽，嫩芽选取时，一个星期内不要对植株进行浇水、施肥、打药等，然后用锋利的刀片切下未张开芽口的嫩芽，用流动的水缓慢冲洗植株嫩芽，然后用软毛牙刷轻轻的刷洗嫩芽，刷洗后的嫩芽可自然阴干后，放在75％的酒精中浸泡，摇动30秒，用10倍的漂白水，(漂白水中需要添加一滴洗洁精为展着剂)处理10分钟，无菌水冲洗3‑4次，然后用无菌解剖刀剥掉外围叶片，然后用0.1％氯化汞溶液(加一滴洗洁精为展着剂)浸泡并摇动10‑15分钟，用无菌水冲洗3‑4次，然后可将处理后的嫩芽放置到带有筛孔的过滤板上，然后在过滤板上端加设风机，利用风力加速嫩芽水分水分晾干，用无菌解剖刀剥掉叶片，茎尖切成0.6‑1CM高度，每瓶培养基接种一个茎尖，避免交叉污染，将消毒后的茎尖接种到启动培养基：美国花宝1号+马铃薯汁5000‑15000mg/L+香蕉汁5000‑15000mg/L+活性炭1g/L上，暗培养一周，然后使用一支日光灯光照培养，每天光照12小时，经过3个月的培养，外植体启动成功率达到60％，一个茎尖上有1‑2个小芽长出来，并且有根长出来。步骤二：丛芽培养阶段，先将茎尖诱导的小芽切去叶子和根，然后转接至培养基：Murashige和Skoog 1962+萘乙酸0.1‑5mg/L+6‑苄氨基腺嘌呤1‑5mg/L+激动素1‑5mg/L+香蕉汁5000‑15000mg/L，1支灯培养，每天光照12小时，温度25±2℃，培养3个月，一个芽上长出3‑4个芽，成丛生状，培养基有褐化现象，需要及时转接。步骤三：壮苗培养挑选阶段：将诱导的丛芽，3‑4芽为一丛，芽球、差的小芽用无菌解剖刀剔除不要，然后将丛芽接种到壮苗培养基，壮苗培养基配方为，美国花宝1号+马铃薯汁5000‑15000mg/L+香蕉汁5000‑15000mg/L+活性炭1g/L上，然后采用两个日光灯培养，每天光照12小时，温度控制在25±2℃，培养2个月，此时丛芽生产成苗，苗大部分长到3CM以上，有的苗上有根长出。步骤四：生根成苗阶段，取3cm以上的小苗接种到美国花宝1号+马铃薯汁5000‑15000mg/L+香蕉汁5000‑15000mg/L+活性炭1g/L的培养基上，2支灯培养，每天光照12小时，温度25±2℃，培养3个月后，苗高10CM，一株苗有5‑6条根，根长5CM以上，生根率达到100％。...

【技术特征摘要】
1.一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法，其特征在于，包括以下四个培育步骤：步骤一：外植体启动培养阶段：先取在大棚洁净环境中生长的杂交兰十八格格干净植株的嫩芽，先用蒸馏水初次冲洗干净的植株的嫩芽，嫩芽选取时，一个星期内不要对植株进行浇水、施肥、打药等，然后用锋利的刀片切下未张开芽口的嫩芽，用流动的水缓慢冲洗植株嫩芽，然后用软毛牙刷轻轻的刷洗嫩芽，刷洗后的嫩芽可自然阴干后，放在75％的酒精中浸泡，摇动30秒，用10倍的漂白水，(漂白水中需要添加一滴洗洁精为展着剂)处理10分钟，无菌水冲洗3-4次，然后用无菌解剖刀剥掉外围叶片，然后用0.1％氯化汞溶液(加一滴洗洁精为展着剂)浸泡并摇动10-15分钟，用无菌水冲洗3-4次，然后可将处理后的嫩芽放置到带有筛孔的过滤板上，然后在过滤板上端加设风机，利用风力加速嫩芽水分水分晾干，用无菌解剖刀剥掉叶片，茎尖切成0.6-1CM高度，每瓶培养基接种一个茎尖，避免交叉污染，将消毒后的茎尖接种到启动培养基：美国花宝1号+马铃薯汁5000-15000mg/L+香蕉汁5000-15000mg/L+活性炭1g/L上，暗培养一周，然后使用一支日光灯光照培养，每天光照12小时，经过3个月的培养，外植体启动成功率达到60％，一个茎尖上有1-2个小芽长出来，并且有根长出来。步骤二：丛芽培养阶段，先将茎尖诱导的小芽切去叶子和根，然后转接至培养基：Murashige和Skoog1962+萘乙酸0.1-5mg/L+6-苄氨基腺嘌呤1-5mg/L+激动素1-5mg/L+香蕉汁5000-15000mg/L，1支灯培养，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈绪盛，杜正丽，毛明辉，
申请(专利权)人：翁源县天下泽雨农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44