本发明专利技术提供一种早熟梨茎段的组织培养方法及培养基，属于植物细胞分子生物学技术领域。所述组织培养方法，包括如下步骤：将外植体采用初始接种培养基进行诱导分化培养，得到初代组培苗；将所述初代组培苗用增殖培养基进行增殖培养，然后切取新稍转接入壮苗培养基进行继代培养，再依次转入生根培养基A和生根培养基B进行生根培养。所述用于早熟梨茎段组织培养的培养基，由初始接种培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基中的一种或两种以上组合。本发明专利技术组织培养方法，消毒方法安全、时间短，显著提高组培苗增殖系数、生根率、平均根长和平均根数。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供一种早熟梨茎段的组织培养方法及培养基，属于植物细胞分子生物学
。所述组织培养方法，包括如下步骤：将外植体采用初始接种培养基进行诱导分化培养，得到初代组培苗；将所述初代组培苗用增殖培养基进行增殖培养，然后切取新稍转接入壮苗培养基进行继代培养，再依次转入生根培养基A和生根培养基B进行生根培养。所述用于早熟梨茎段组织培养的培养基，由初始接种培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基中的一种或两种以上组合。本专利技术组织培养方法，消毒方法安全、时间短，显著提高组培苗增殖系数、生根率、平均根长和平均根数。【专利说明】一种早熟梨莖段的组织培养方法及培养基
本专利技术属于植物细胞分子生物学领域，具体涉及梨茎段的组织培养方法及培养基。
技术介绍
苏翠I号是优质早熟砂梨，亲本为华酥X翠冠，2003年杂交，2004年培养杂交苗，2011年通过江苏省农作物品种审定委员会品种认可(苏鉴果201107)。果肉白色，肉质细脆，石细胞极少或无，汁多味甜、风味好、品质佳。花芽易形成，连续结果能力强，坐果率高，果实成熟期为7月初。 苏翠2号也属于早熟砂梨，亲本为西子绿X翠冠，2003年杂交，2004年培养杂交苗,2011年通过江苏省品种审定。果实倒卵圆形,果皮黄绿色，无锈，果肉白色，肉质细脆，石细胞极少或无，花芽易形成，连续结果能力强，坐果率高，果实成熟期为7月中旬。 苏翠I号和苏翠2号采用常规的扦插方法进行繁殖时，繁殖系数低、高度杂合；采用常规的组培方法进行繁殖时，试管苗增殖系数低，平均生根率、平均根数较低，根长较短。 【
技术实现思路
】 本专利技术的目的是提供一种梨茎段的组织培养方法，该方法显著提高了试管苗的增殖率、增殖系数、生根率、平均根长和平均根数。 本专利技术的另一目的是提供用于梨茎段组织培养的培养基。 本专利技术的目的采用如下技术方案实现。 一种早熟梨茎段的组织培养方法，包括如下步骤:将外植体采用初始接种培养基进行诱导分化培养，得到初代组培苗；将所述初代组培苗用增殖培养基进行增殖培养，然后切取新稍转接入壮苗培养基进行继代培养，再依次转入生根培养基A和生根培养基B进行生根培养； 所述初始接种培养基是在1/2MS或AS基本培养基中添加6_BA、NAA和GA3后得到的培养基，所述6-BA的终浓度为0.5-1.0mg/L,所述NAA的终浓度为0.05-0.5mg/L,所述GA3的终浓度为0.2-3mg/L，所述初始接种培养基的pH为5.5-5.8 ； 所述增殖培养基是在MS培养基中添加6-BA、NAA和GA3后得到的培养基，所述 6-BA的终浓度为0.5?1.0mg/L,所述NAA的终浓度为0.1?0.2mg/L,所述GA3的终浓度为0.5-3mg/L，所述增殖培养基的pH为5.5-5.8 ； 所述壮苗培养基是1/3MS培养基或1/4QL培养基，所述壮苗培养基的pH为 5.5-5.8 ； 所述生根培养基A是在1/4QL培养基中添加IAA、6_BA和NAA后得到的培养基，所述IAA的终浓度为0.4-0.6mg/L,所述6-BA的终浓度为0.8-1.2mg/L,所述NAA的终浓度为 0.05-0.15mg/L,所述的生根培养基的pH为5.5-5.8 ； 所述生根培养基B是1/4QL培养基。 在本专利技术中，所述初始接种培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基A和生根培养基B中均添加有蔗糖和琼脂，所述蔗糖的终浓度为20?30g/L，所述琼脂的终浓度为 5-7g/L。 在本专利技术中，所述初始接种培养基中的培养条件为:培养温度22?25°C，每天光照15-16h、黑暗8-9h，光照强度为1500-20001χ，每25-32d更换一次初始接种培养基。 在本专利技术中，所述增殖培养基中的培养条件为:培养温度22?25°C，每天光照15-17h、黑暗7-9h，光照强度为1500-20001x，培养时间为25_32d。 在本专利技术中，所述壮苗培养基中的培养条件为:培养温度22?25°C，每天光照15-17h、黑暗7-9h，光照强度为1500-20001x，每13-16天继代一次，继代次数为2_3次。 在本专利技术中，所述生根培养基A中的培养条件为:培养温度24?26°C,黑暗培养 7-12 天。 在本专利技术中，所述生根培养基B中的培养条件为:培养温度22?25°C，每天光照15-16h、黑暗8-9h，光照强度为1500-20001x，培养时间为50-60天。 在本专利技术中，所述外植体为成龄母株茎段；优选为当年生带芽茎段。 在本专利技术中，所述外植体在诱导分化培养前进行如下处理:用羧苄青霉素水溶液浸泡所述外植体，然后采用含有爱力克?A、B和吐温20的溶液对所述外植体进行消毒。 本专利技术还要求保护用于早熟梨茎段组织培养的培养基，由如下培养基中的全部或部分组成: (a)初始接种培养基； 所述初始接种培养基是在1/2MS或AS基本培养基中添加6_BA、NAA和GA3后得到的培养基，所述6-BA的终浓度为0.5-1.0mg/L,所述NAA的终浓度为0.05-0.5mg/L,所述GA3的终浓度为0.2-3mg/L，所述初始接种培养基的pH为5.5-5.8 ； (b)增殖培养基； 所述增殖培养基是在MS培养基中添加6_BA、NAA和GA3后得到的培养基，所述6_BA的终浓度为0.5-1.0mg/L,所述NAA的终浓度为0.1-0.2mg/L,所述GA3的终浓度为0.5_3mg/L,所述增殖培养基的pH为5.5-5.8 ； (C)壮苗培养基； 所述壮苗培养基是1/3MS培养基或1/4QL培养基，所述壮苗培养基的pH为 5.5-5.8 ； (d)生根培养基； 所述生根培养基包括生根培养基A和生根培养基B ； 所述生根培养基A是在1/4QL培养基中添加IAA、6_BA和NAA后得到的培养基，所述IAA的终浓度为0.4-0.6mg/L,所述6-BA的终浓度为0.8-1.2mg/L,所述NAA的终浓度为 0.05-0.15mg/L ； 所述生根培养基B是1/4QL培养基。 本专利技术梨茎段的组织培养方法与常规扦插繁殖方法相比，克服梨苗扦插繁殖系数低、高度杂合的缺点，获得大量无性系试管苗，其遗传性状稳定、增殖率高，为遗传转化和扩大栽培面积提供了大量的试管苗。 本专利技术梨茎段的组织培养方法与常规组培方法相比， (A)消毒方式利用爱力克?A、B代替升汞，安全无毒。采用茎段作为外植体，缩短了丛生芽生长时间；取消酒精消毒，缩短爱力克?A、B的消毒时间，提高了两个品种成活率，降低了褐化率；涡旋处理降低了污染率。 (B)初始接种培养基选用AS培养基，植株生长势和向上生长势优于MS和1/2MS培养基。 (C)组培苗增殖系数显著提高，经壮苗培养后，植株生长健康，叶片平展，叶片绿色，无玻璃化现象。 (D)本专利技术生根方法显著提高组培苗增殖系数、生根率、平均根长和平均根数。 【具体实施方式】 6-BA:6_苄氨基腺嘌呤；NAA:1_萘乙酸；GA3:赤霉素；IAA:卩引哚_3_乙酸；IBA:3-吲哚丁酸。 MS 培养基的组成:(I)大量元素:NH4N031650mg/L，KN03190本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种早熟梨茎段的组织培养方法，其特征在于包括如下步骤：将外植体采用初始接种培养基进行诱导分化培养，得到初代组培苗；将所述初代组培苗用增殖培养基进行增殖培养，然后切取新稍转接入壮苗培养基进行继代培养，再依次转入生根培养基A和生根培养基B进行生根培养；所述初始接种培养基是在1/2MS或AS基本培养基中添加6‑BA、NAA和GA3后得到的培养基，所述6‑BA的终浓度为0.5‑1.0mg/L，所述NAA的终浓度为0.05‑0.5mg/L，所述GA3的终浓度为0.2‑3mg/L，所述初始接种培养基的pH为5.5‑5.8；所述增殖培养基是在MS培养基中添加6‑BA、NAA后得到的培养基，所述6‑BA的终浓度为0.5~1.0mg/L，所述NAA的终浓度为0.1~0.2mg/L，所述增殖培养基的pH为5.5‑5.8；所述壮苗培养基是1/3MS培养基或1/4QL培养基，所述壮苗培养基的pH为5.5‑5.8；所述生根培养基A是在1/4QL培养基中添加IAA、6‑BA和NAA后得到的培养基，所述IAA的终浓度为0.4‑0.6mg/L，所述6‑BA的终浓度为0.8‑1.2mg/L，所述NAA的终浓度为0.05‑0.15mg/L,所述的生根培养基的pH为5.5‑5.8；所述生根培养基B是1/4QL培养基。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王宏，蔺经，常有宏，马娜，甘慧芳，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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