基于POCT模式的APOE2和APOE4基因型快速检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种基于POCT模式的APOE2和APOE4基因型快速检测试剂盒，所述试剂盒含有用于检测APOE2和APOE4基因型的引物、探针和细胞裂解液，检测APOE2的引物如SEQ ID NO.1‑2所示，探针如SEQ ID NO.3‑4所示，检测APOE4的引物如SEQ ID NO.5‑6所示，探针如SEQ ID NO.7‑8所示。本试剂盒无需DNA提纯，可将样本直接加入试剂中进行PCR反应，特别适合DNA含量较低样本的快速、准确检测，检测准确率达99％，灵敏度高，可以准确检测低至0.1ng基因组DNA；整个检测耗时短，能在第一时间给医生提供用药依据，降低患者用药风险。

Rapid Genotype Detection Kit for APOE2 and APOE4 Based on POCT Model

The invention provides a rapid detection kit for APOE 2 and APOE4 genotypes based on POCT mode. The kit contains primers, probes and cell lysates for detecting APOE 2 and APOE4 genotypes. The primers for detecting APOE 2 are shown as SEQ ID NO.1_2, the probes are shown as SEQ ID NO.3_4, and the primers for detecting APOE4 are shown as SEQ ID NO.5_6 and the probes are shown as SEQ ID NO.7_8. The kit does not need DNA purification and can directly add samples to the reagent for PCR reaction. It is especially suitable for the rapid and accurate detection of low DNA content samples. The detection accuracy is 99%, and the sensitivity is high. It can accurately detect genomic DNA as low as 0.1ng. The whole detection time is short, and it can provide the basis for medication for doctors in the first time, and reduce the risk of drug use for patients.

【技术实现步骤摘要】
基于POCT模式的APOE2和APOE4基因型快速检测试剂盒
本专利技术涉及分子生物学领域，具体地说，涉及一种基于POCT模式的APOE2和APOE4基因型快速检测试剂盒。
技术介绍
APOE基因是编码人类载脂蛋白E(apolipoproteinE，APOE)的基因，该基因定位于染色体19p13，有4个外显子和3个内含子，其所编码的APOE蛋白属载脂蛋白家族，是血浆脂蛋白的重要组成部分，主要在肝脏和脑组织中表达，通过多种途径参与机体的脂质代谢，是影响血脂水平的重要内在因素。研究表明，APOE基因具有核苷酸多态性，其中最常见的两个单核苷酸多态性位点为APOE4T388C(rs429358)和APOE2C526T(rs7412)，共形成3种单倍体，分别为E2(388T-526T)、E3(388T-526C)、E4(388C-526C)三种蛋白表型，生成包括三种纯合子(ε2/ε2、ε3/ε3、ε4/ε4)和三种杂合子(ε3/ε2、ε4/ε2、ε4/ε3)在内的6种APOE基因型。其中，ε2等位基因携带者，其血液中APOE浓度高，胆固醇含量低，对动脉粥样硬化有防护作用；而ε4等位基因携带者，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测APOE2和APOE4基因多态性的引物组合，其特征在于，检测APOE2基因多态性的引物对的核苷酸序列为：上游引物：5’‑CGTAAGCGGCTCCTCCG‑3’下游引物：5’‑GGATGGCGCTGAGGCC‑3’；检测APOE4基因多态性的引物对的核苷酸序列为：上游引物：5’‑GGAGGAGACGCGGGCAC‑3’下游引物：5’‑GCCTGCACCTCGCCG‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种检测APOE2和APOE4基因多态性的引物组合，其特征在于，检测APOE2基因多态性的引物对的核苷酸序列为：上游引物：5’-CGTAAGCGGCTCCTCCG-3’下游引物：5’-GGATGGCGCTGAGGCC-3’；检测APOE4基因多态性的引物对的核苷酸序列为：上游引物：5’-GGAGGAGACGCGGGCAC-3’下游引物：5’-GCCTGCACCTCGCCG-3’。2.与权利要求1所述引物对配套使用的探针组合，其特征在于，所述探针组合为：APOE2基因野生型探针：5’-TGCAGAAGCGCCTGG-3’APOE2基因突变型探针：5’-CAGAAGTGCCTGGCAG-3’APOE4基因野生型探针：5’-CGGCCGCACACGTCCT-3’APOE4基因突变型探针：5’-CGGCCGCGCACGTCCT-3’。3.根据权利要求2所述的探针组合，其特征在于，所述探针组合包括：APOE2基因野生型探针：5’-TGCAGAAG+CGCCTGG-3’APOE2基因突变型探针：5’-CAGAAG+TGCCTGGCAG-3’APOE4基因野生型探针：5’-CGGCCGC+ACACGTCCT-3’APOE4基因突变型探针：5’-CGGCCGC+GCACGTCCT-3’,其中，“+”表示右侧的碱基为LNA修饰。4.含有权利要求1所述引物和权利要求2或3所述探针组合的检测试剂或试剂盒。5.一种检测APOE2和APOE4基因多态性的PCR反应液，其特征在于，所述PCR反...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗德朋，钟越，向霄，熊伟，贺庭祯，黎帮勇，刘黎，崔奇新，董锐，
申请(专利权)人：重庆京因生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50