唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型及其构建方法和构建系统技术方案

一种唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型及其构建方法和构建系统，其中构建方法包括如下步骤：设置疾病组与对照组，每组包括若干份相异人体的已经脱离人体的血标本；从血标本中分离单个核细胞；从单个核细胞的细胞悬液中提取总RNA；采用表达谱芯片分析疾病组和对照组总中RNA中的circRNA差异表达谱，得到circRNA差异数据；采用表达谱芯片分析疾病组和对照组中总RNA中的mRNA差异表达谱，得到mRNA差异数据；采用RT‑PCR验证疾病组和对照组中circRNA和mRNA的表达情况，得到对比数据；对circRNA差异数据、mRNA差异数据及对比数据进行数据分析，构建唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型。上述构建方法通过对血标本中的circRNA进行测序和分析，以探究circRNA在DS中的功能及其发生机制。

Differential expression profiles of maternal and fetal circRNA in Down's syndrome and its construction method and construction system

A maternal fetal circRNA differential expression profile model of Down syndrome and its construction method and construction system are described. The construction method includes the following steps: setting up disease group and control group, each group includes several dissimilar human blood samples; isolating mononuclear cells from blood samples; extracting total RNA from cell suspension of mononuclear cells; and using expression method. Differential expression profiles of circRNA in total RNA of disease group and control group were analyzed by microarray, and differential data of circRNA were obtained. Differential expression profiles of total RNA in disease group and control group were analyzed by microarray, and differential data of circRNA and RNA in disease group and control group were obtained. The expression of circRNA and RNA in disease group and control group was verified by RT-PCR, and the comparative data were obtained. Based on the data analysis and comparison, the differential expression profiles of maternal and fetal circRNA in Down syndrome were constructed. By sequencing and analyzing the circRNA in blood samples, the function and mechanism of circRNA in DS were explored.

【技术实现步骤摘要】
唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型及其构建方法和构建系统
本专利技术涉及生物医学
，特别是涉及一种唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型及其构建方法和构建系统。
技术介绍
唐氏综合征(DownSyndrome，DS)，即21-三体综合征，也可称作先天愚型或Down综合征，是由于第21号染色体异常而导致的出生缺陷类疾病，是出生缺陷疾病中最常见的一种染色体非整倍体遗传性疾病。该病在小儿中最为常见，在新生儿中的发病率约为1/800～1/600，患者的平均存活年龄为25岁。其主要特征为严重的先天性智力低下智力障碍、轻度至重度学习障碍、面容异常、身体发育迟缓，并常伴有先天性心脏病、免疫力低下、阿尔茨海默病等80多种疾病，DS患者罹患白血病的几率也比正常人高出20倍，DS患者通常生活不能自理，劳动能力低，社会适应能力较差，对家庭具有高度依赖性，因此给其所在的家庭和社会带来了沉重的负担。我国目前大约拥有DS患儿60万以上，而每年有27000例左右DS患儿出生。在国外，DS的发病数量占所有染色体疾病的91.60﹪，居于所有染色体异常疾病的首位。有关唐氏综合征的发病机制具体的发生机制目前仍不清楚，有待于进一步的探究。因此，需要进一步从分子水平上对唐氏综合征的发病机制作更深入的研究。环状RNA(circularRNA，circRNA)作为最近被发现的一种特殊的新型内源非编码RNA，是RNA研究领域的研究热点。生物体内普遍存在着不能翻译为蛋白的功能性RNA分子，称为非编码RNA(non-codingRNAs，ncRNAs)。其中circRNA是一类通过反向剪接将3′和5′末端连接起来形成的环形RNA分子。按照剪接来源的不同，circRNA可分为内含子来源环状RNA以及外显子来源环状RNA。主要参与转录及转录后基因表达的调节。circRNA可能在疾病的发生和发展中发挥着重要的作用，有望成为某些疾病过程的潜在的生物标志物。介于某些circRNA含有一种或多种类型的miRNA结合位点，可充当竞争性内源RNA，从而调节miRNA的活性，并因此影响miRNA对靶基因的调节，因此通过circRNA与miRNA以及miRNA与疾病之间的关系表明circRNA可能在疾病的发生中具有调节作用(GhosalS,DasS,SenR,etal.Circ2Traits:acomprehensivedatabaseforcircularRNApotentiallyassociatedwithdiseaseandtraits[J].FrontiersinGenetics,2013,4(283):283)，例如癌症、心脏病、神经病症、动脉粥样硬化以及糖尿病等。目前，避免DS患儿出生的唯一医疗手段是对孕妇进行全面的产前筛查和产前诊断。然而，传统的产前筛查具有检出率低、漏检率和假阳性率相对较高的缺点，胎儿染色体产前诊断相关方法则因为侵入式取样的手段容易产生出血、流产或患有其它并发症。而已有的无创性的产前诊断方法又存在步骤繁琐、成本较高等问题。因此，基于传统产前筛查和产前诊断的缺陷，以及已有无创性产前诊断方法不足的现状，探索新的无创性唐氏综合征胎儿产前诊断标志物具有非常重要的意义。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型及其构将方法和构建系统。一种唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型的构建方法，包括如下步骤：设置疾病组与对照组，每组包括若干份相异人体的已经脱离人体的血标本；从血标本中分离单个核细胞，得到单个核细胞的细胞悬液；从单个核细胞的细胞悬液中提取总RNA；采用表达谱芯片分析疾病组和对照组总中RNA中的circRNA差异表达谱，得到circRNA差异数据；采用表达谱芯片分析疾病组和对照组中总RNA中的mRNA差异表达谱，得到mRNA差异数据；采用RT-PCR验证疾病组和对照组中circRNA和mRNA的表达情况，得到对比数据；对circRNA差异数据、mRNA差异数据及对比数据进行数据分析，构建唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型。一种唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型，由如上任一实施例中所述的构建方法制备得到。一种唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型的构建系统，采用如上任一实施例中所述的构建方法实现。上述唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型的构建方法，通过对脱离人体的血标本中的circRNA进行测序和分析，对筛选出的DS母体胎源性差异表达circRNA表达谱和mRNA基因表达谱信息进行整合分析，寻找circRNA与mRNA的关联作用，以探究circRNA在DS中的功能及其发生机制，对探索新的无创性唐氏综合征胎儿产前诊断标志物具有非常重要的意义。附图说明图1为本专利技术一实施方式的唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型的步骤流程图；图2为本专利技术另一实施方式的唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型的步骤流程图。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将参照相关附图对本专利技术进行更全面的描述。附图中给出了本专利技术的较佳实施方式。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本专利技术的公开内容理解的更加透彻全面。当然，它们仅仅为示例，并且目的不在于限制本专利技术。此外，本专利技术可以在不同例子中重复参考数字和/或字母。这种重复是为了简化和清楚的目的，其本身不指示所讨论各种实施例和/或设置之间的关系。需要说明的是，当元件被称为“固定于”另一个元件，它可以直接在另一个元件上或者也可以存在居中的元件。当一个元件被认为是“连接”另一个元件，它可以是直接连接到另一个元件或者可能同时存在居中元件。本文所使用的术语“垂直的”、“水平的”、“左”、“右”以及类似的表述只是为了说明的目的，并不表示是唯一的实施方式。在本专利技术的描述中，需要说明的是，除非另有规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是机械连接或电连接，也可以是两个元件内部的连通，可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语的具体含义。此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。在专利技术的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个等，除非另有明确具体的限定。在本专利技术的描述中，“若干”的含义是至少一个，例如一个，两个等，除非另有明确具体的限定。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。例如，一种唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型的构建方法，包括如下步骤：设置疾病组与对照组，每组包括若干份相异人体的已经脱离人体的血标本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：设置疾病组与对照组，每组包括若干份相异人体的已经脱离人体的血标本；从血标本中分离单个核细胞，得到单个核细胞的细胞悬液；从单个核细胞的细胞悬液中提取总RNA；采用表达谱芯片分析疾病组和对照组总中RNA中的circRNA差异表达谱，得到circRNA差异数据；采用表达谱芯片分析疾病组和对照组中总RNA中的mRNA差异表达谱，得到mRNA差异数据；采用RT‑PCR验证疾病组和对照组中circRNA和mRNA的表达情况，得到对比数据；对circRNA差异数据、mRNA差异数据及对比数据进行数据分析，构建唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型。

【技术特征摘要】
1.一种唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：设置疾病组与对照组，每组包括若干份相异人体的已经脱离人体的血标本；从血标本中分离单个核细胞，得到单个核细胞的细胞悬液；从单个核细胞的细胞悬液中提取总RNA；采用表达谱芯片分析疾病组和对照组总中RNA中的circRNA差异表达谱，得到circRNA差异数据；采用表达谱芯片分析疾病组和对照组中总RNA中的mRNA差异表达谱，得到mRNA差异数据；采用RT-PCR验证疾病组和对照组中circRNA和mRNA的表达情况，得到对比数据；对circRNA差异数据、mRNA差异数据及对比数据进行数据分析，构建唐氏综合征母体胎源性circRNA差异性表达谱图谱模型。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，从血标本中分离单个核细胞，得到单个核细胞的细胞悬液，具体为：将各血标本加入抗凝剂，并使用缓冲液稀释各脐带血标本；使用淋巴分离液从稀释后的各脐带血标本中分离单个核细胞；使用缓冲液重悬单个核细胞，得到单个核细胞的细胞悬液。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述抗凝剂为EDTA。4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，从单个核细胞的细胞悬液中提取总RNA，具体为：将单个核细胞的细胞悬液离心，弃上清；加入Trizol试剂，直至细胞完全溶解，得到第一样品；将第一样品置于-80℃冰箱中冻存；将第一样品解冻复溶；加入氯仿，振荡后在15℃～30℃的温度下孵育2min～3min，得到第二样品，其中氯仿的加入量为制备第一样品时加入Trizol试剂量的1/5；将第二样品于4℃下12000rpm离心15min后，吸取上层水相；将上层水相转移至新的1.5mLRNase-freeEP管中，加入异丙醇，混匀后15℃～30℃孵育10min，得到第三样品；其中，异丙醇的加入量为制备第一样品时加入Trizol试剂量的1/2；将第三样品4℃，12000rpm离心10min，使RNA形成RNA沉淀，弃上清；加入75％乙醇，振荡混匀后，4℃7500rpm离心5min，弃上清；将RNA沉淀干燥，加入无RNA酶的水溶解RNA沉淀，得到总RNA溶液。5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，从单个核细胞的细胞悬液中提取总RNA之后，采用表达谱芯片分析疾病组和对照组总中RNA中的circRNA差异表达谱，得到circRNA差异数据之前，所述构建方法还包括：对总RNA进行纯化，并测定总RNA中RNA含量。6.根据权利要求5所述的构建方...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴勇，眭维国，杜冬，常燕，吴炎，曾君，
申请(专利权)人：戴勇，眭维国，常燕，杜冬，
类型：发明
国别省市：广西,45